Исследование белкового спектра крови.

Азотометрический – м-д Кьельдаля – полное разрушения белка под действием серной кислоты в присутствии катализатора, высвобождающийся аммиак определяется либо методом обратного титрования щелочью точного объема раствора кислоты известной нормальности, либо способом колориметрии (среднее содержание азота в белке 16%, поэтому результат умножают на 6,25. Рефрактометрические – на определении коэффициента преломления монохроматического луча света раствором. – не точны. Гравиметрический – на предварительном осаждении белков, их обезвоживании, высушивании и взвешивании на аналит. весах для очень точного взвешивания. Спектрофотометрические – измерение степени поглощения в ультрафиолетовой области спектра (200-220 или 280 нм) Колориметрические – на цветных реакциях белков с определенными реактивами либо на неспецифическом связывании красителя – биуретовая реакция (белки сыворотки или плазмы, реагируя в щелочной среде с сернокислой медью, обр соединения, окрашенные в фиолет цвет. (дл. волны 540-560 нм, лучше 546нм. 1) осаждение нейтр солями (растворы солей способны преципитировать отдельные белки плазмы в зависимости от их растворимости)2) Электрофоретическое фракционирование 3) Иммунологичесоке исследование (добавление антисывороток вызывает специф преципитацию белков) 4) Иммуноэлектрофорез 5) Седиментационные методы (на зависимости скорости оседания белков при ультрацентрифугировании от массы и размеров молекул) 6) Хроматография (ионообменная) в основном используется для препаративного выделения отдельных белковых фракций 7) Фильтрация через гели

Пробы коллоидоустойчивости. В КДЛ находят применение методы, позволяющие с использованием простых коллоидных реакций выявлять изменения в белковом спектре сыв-ки крови. Поскольку нарушение коллоидной устойчивости сыв-ки под действием какого-либо реактива выражается сначала коагуляцией (склеиванием), а затем флокуляцией (осаждением), коллоидоустойчивые пробы именуют нередко коагуляционными, или флокуляционными (коллоидноосадочными). Положительный результат коллоидно-химических проб чаше всего обусловлен характерными количественными изменениями в содержании отдельных фракций α,β,γ-глобулинов либо уменьшением соотношения альбумин/глобулин. В случае отсутствия сдвигов в пок-лях конц-ции глобулинов и коэф-нта альбумин/глобулин известное значение имеет возрастание содержания более грубо дисперсных подфракций (гамма-глобулинов) в глобулиновой системе. Флокуляция (коагуляция, осаждение) наступает под влиянием двух основных факторов:

1) уменьшение электрического заряда коллоидных частиц (и, следовательно, содержания гидратационной воды в их оболочке)

2) увеличения размеров коллоидных частиц

Положительный результат коллоидно-хим проб чаще всего обусловлен характерными колич. изменениями в содержании отдельных фракций α,β,γ-глобулинов либо уменьшением соотношения альбумин/глобулин. В случае отсутствия сдвигов в показателях концентрации глобулинов и коэф. альбумин/глобулины известное значение имеет возрастание содержания более грубо дисперсных подфракций (гамма-глобулинов) в глобулиновой системе.

Тимоловая проба (Маклагана, Хуэрго и Поппера) (норма 0-4 ед. S – H) – сущность в образовании глобулин-тимол-липидного комплекса (40% глобулинов, 32% тимола, 18% холестерина и 10% фосфолипидов). Более 4 ед.S – H при токсическом и инфекционном гепатите, причем в преджелтушной стадии заб-ия и при безжелтушной его форме. Положительна у больных с постнекротическим биллиарным циррозом печени, а также у лиц страдающих коллагеновыми заб-ями, малярией и вирусными инфекциями. При механической желтухе в 75% положительна, если процесс осложняется паренхиматозным гепатитом.

Зоны глобулинов:

1. альбуминовая: 1.1. альбумин.

2. α-1-зона: 2.1. α-1-антитрипсин (повыш – воспал процессы, пониж – обструктивные болезни легких, особенно эмфизема. 2.2. α-липопротеин, ↑ – гиперлипидемия, ↓ – б-ни печени; 2.3. альфа-1 – кислый гликопротеин (орозомукоид), ↑ – о и хр воспаления, ревматоидный артрит, злокачественные новообразования, лихорадочные состояния, ↓ – тяж поражения печени, гастроэнтеропатия, беременность: 2.4.протромбин, ↑ – склонность к тромбообразованию, ↓ – б-ни печени, механическая желтуха, дисбактериоз кишечника, лечение антикоагулянтами непрямого действия, новорожденные; 2.5. тироксин-связывающий глобулин, ↑ – использование контрацептивов, беременность, ↓ – нефротический синдром, лечение тестостероном

3. альфа – 2 зона 3.1. альфа – 2 макроглобулин, ↑ – нефротический синдром, воспалит заб-ия, сах диабет, ↓ – ИМ, о панкреатит, опухоли почек и активный фибринолиз; 3.2. гаптоглобин 3.3. церулоплазмин 3.4. альфа-липопротеины 3.5. зритропоэтин

4. бета –зона 4.1. трансферрин 4.2. бета-липопротеины (ЛПНП) 4.3. С₃,С₄ 4.5. СРБ 4.6.гемопексин

5. зона гамма-глобулинов, включая АТ 5.1.Ig G 5.2.Ig A 5.3.IgM

ТИПЫ ПРОТЕИНОГРАММ, соответствующие определенным видам заболеваний внутренних органов.

Бэта- и пребета-ЛП турбидиметрическим методом по Бурштейну и Самаю, в присутствии хлорида кальция и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем происходит преципитация бета и пребета-ЛП. КДЗ: не только для выявления гиперлипемических состояний, но и как функциональная печеночная проба, тимоловая проба чувствительна к выявлению сдвигов в начальной стадии, а Бурштейна и Самая – в конечной стадии острого гепатита. В сочетании с тимоловой пробой она может быть использована для диф диагностики мех желтухи от паренхиматозной, при паренх обе пробы положительны, либо тимоловая полож, а бета-ЛП отр, при механ желтухе тимоловая – отр (если нет вторичного гепатита), а Бурштейна-Самая – положительная.

24. Небелковые азотистые основания (НАК): принципы и методы определения мочевины, аммиака, мочевой кислоты, креатина, креатинина. Применение в клинике, интерпретация результатов.