Определение числа неподвижных сперматозоидов в счетной камере

Сперма разводится теплым изотоническим раствором хлори­да натрия в 20 раз. Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов так же, как описано выше. Расчет процентного содержания неподВИЖНЫХ спермато­зоидов производят следующим образом, исходя из пропорции:

Кинезисграмма - это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. количество подвижных сперма­тозоидов является главным критерием при оценке их полноцен­ности. Активноподвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным целесообразным вращательным движением с перемещением в поле зрения. Малоподвижные сперматозоиды дви­гаются медленно, совершая колебательное, манежное движение или подергивание на месте. Исследование проводят с использо­ванием «окошечка Фони О» для ограничения поля зрения. Иссле­дование проводят при температуре 20-25 ос. На сухое предмет­ное стекло наносят каплю перемешанного эякулята, покрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Под­считывают в нескольких полях зрения не менее 100 клеток, от­мечая количествО активноподвижных, малоподвижных и неподвижных. Рассчитывают процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах: 4 _ активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью), 3 - хо­рошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает пря­молинейной подвижностью, но она несколько снижена), 2 - посред­ственная подвижность (небольшое количество двигается поступатель­но), 1 _ плохая подвижность (поступательное движение сперматозо­идов отсутствует), О - полное отсутствие движения сперматозоидов.

Определение мертвых и живых сперматозоидов: окрашивание по Блуму. На предметное стекло наносят каплю спермы, рядом две капли водного раствора кислого (50 г/л) эозина, капли смешивают, через несколько секунд добавляют каплю водного рас­твора нигрозина (100 г/л), перемешивают и через несколько се­кунд делают тонкий мазок при помощи шлифованного стекла. Мазок высушивают и исследуют с помощью иммерсионного объ­екгива, Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя отдельно ЖИвые и мертвые сперматозоиды. Мертвые сперматозоиды окрашены в красно-фиолетовый цвет, живые - бесцветные. Можно окрашивать одним эозином без нигрозина, однако при окраске с нигрозином сперматозоиды выглядят более контрастно. В нормальном эякуля­те живые сперматозоиды составляют 90-95% от общего количества.

64. Микроскопические исследования вагинального отделяемого и мазка из цервикального канала для определения гормонального профиля, степени чистоты, элементов воспаления. Признаки бактериального вагиноза.

Функция яичников отражается на состоянии эндометрия и слизистой оболочки влагалища, эпителий которого изменяется в течение менструального цикла. Свойство эпителия влагалища изменяться под влиянием гормонов легло в основу гормональной цитодиагностики. Она основана на изучении отторгающихся эпителиальных клеток слизистой оболочки влагалища, изменении состава клеток в зависимости от гормональных влияний в течение менструального цикла. На основании цитологического исследования вагинального отделяемого можно судить о фазе менструального цикла, о достаточности выработки эндрогенов, о наличии или отсутствии овуляции, о соответствии цитологической картины возрасту женщины, о характере гормональной дисфункции, об эффективности гормональной терапии, позволяет выявить угрозу прерывания беременности, уточнить срок родов, перенашивание беременности.

Материалом для исследования является отделяемое влагалища, которое должно исследоваться в динамике в течение всего менструально-овариального цикла. Материал обычно берут на 7, 14, 21 и 28-й дни цикла. Перед взятием материала не должно быть половых сношений, нельзя проводить внутривлагалищные манипуляции, использовать влагалищные шарики или таблетки, спринцеваться, проводить гормональное лечение. Для исследования берут свободно отделяющийся материал с верхнебокового свода влагалища с помощью шпателя, металлической петли, ложечки Фолькмана, пипетки, но не ватным тампоном. Материал помещают в смесь Никифорова (смесь равных частей 96º этилового спирта и эфира) для фиксации в течение 15−20 минут.

Мазки лучше окрашивать по Романовскому − Гимзе, как окрашивают мазки крови, этот метод выгодно отличается от монохромных красителей.

Бактериальный вагиноз - заболевание влагалища без при­знаков воспаления. Нормальная флора влагалища весьма разно­образна и изменчива в зависимости от возраста, фазы менстру­ального цикла, сексуальной активности, беременности и других состояний. Однако признаком здоровья считается преобладание до 95% в микробном пейзаже влагалищных лактобацилл. При бактериальном вагинозе нормальная микрофлора влагалища за­меняется анаэробами типа Gardnerella vaginalis и Mobiluncus. Та­кая картина расценивается как дисбактериоз. Бактериальная об­семененность влагалища становится намного выше, чем у здоро­вых женщин. Гарднерелла может обнаруживаться у 5-30% здо­ровых женщин, но в небольших количествах, поэтому гардне­релла не считается единственной причиной заболевания. Имеют значение и другие анаэробы. При бактериальном вагинозе число анаэробных бактерий в 100-1000 раз превышает норму. Бакте­риальный вагиноз часто связывают с изменениями гормональ­ного статуса, со снижением общего и местного иммунитета, с антибактериальной терапией антибиотиками и сульфанилами­дами, с сопутствующими заболеваниями женской половой сфе­ры, с использованием внутриматочной спирали.

Бактерии рода Mobiluncus могуг служить маркером заболе­вания, так как у здоровых женщин не выявляются вообще. Mobiluncus и некоторые другие виды бактерий продуцируют ян­тарную кислоту, которая снижает миграцию нейтрофилов к бак­териям, что угнетает иммунный ответ.

Гарднереллы - это грамвариабельная кокко-бациллярная флора, которая густо покрывает все поля зрения (бактериальный песок) с образованием «ключевых клеток». «Ключевая клетка» ­это клетка плоского эпителия, сплошь покрытая кокко-бацил­лярной флорой. Края клетки могуг плохо просматриваться из-за обилия микроорганизмов, образующих плотный ободок.

Гарднереллы - это полиморфные кокки, мелкие палочки, диплобациллы с преобладанием мелких форм (0,3-0,5 мкм Х 1,5-3 мкм). Располагаются группами или парами так, что одна пара лежит параллельно другой или конец в конец. В основном расположение их хаотично. Коккебациллы образуют обширные скопления, покрывающие все поле зрения. При окраске метилено­вым синим имеют различную интенсивность окраски.

Moblluncus - грамотрицательные облигатные анаэробы, име­ющие вид тонких мелких палочек (4-5 мкм Х 0,25 мкм) в виде полулуний с заостренными концами. Чаще встречаются палочки более насыщенно окрашенные в центре, концы их остаются бледными, но бывают и равномерно прокрашенные палочки.

Иногда палочки могуг быть мельче (1-3 мкм), в виде по­лумесяца, окраска которых локализуется по периферии, поэтому создается впечатление, что микроорганизмы состоят из двух по­ловинок. Как и для гарднереллезной флоры, для Mobiluncus ха­рактерен эффект налипания на эпителиальные клетки и форми­рование «ключевых клеток». При слипании флоры наличие в «бак­териальном песке» гарднерелл затрудняет обнаружение Mobiluncus, так как они окрашиваются несколько слабее и находятся как бы на втором плане. Для выявления Mobiluncus надо выбирать те участки в препарате, в которых бактериальная флора разрежена.

Для бактериального вагиноза характерны выделения с «рыб­ным» запахом, который обусловлен летучими аминами (пугрес­цин, кадаверин), являющимися продуктами жизнедеятельности анаэробов. Выявление аномальных аминов проводится на пред­метном стекле, пугем добавления к 1 капле выделений 1 капли 100 г/л КОН, при этом появляется неприятный «рыбный» запах.

Диагноз бактериального вагиноза ставится при наличии хотя бы 3 из следуюших признаков: 1) наличие в мазках обильной грамвариабельной кокко-бациллярной флоры и «ключевых кле­ток»; 2) положительный аминный тест; 3) рН влагалищного от­деляемого больше 4,5; 4) наличие мобилункус; 5) отсугствие или небольшое количество лейкоцитов; 6) полное отсугствие молочно-кислых бактерий.

у мужчин исследуются выделения из мочеиспускательного канала. Материал беруг через 4-5 ч после мочеиспускания. у женщин исследуют отделяемое из цервикального канала, мо­чеиспускательного канала и из верхнебокового свода влагалища. Материал помещают на предметные стекла, делают мазки и окрашивают 10 г/л водным раствором метиленовой сини или по Романовскому - Гимзе и по Граму. Микроскопический метод диагностики не уступает до­рогостоящему бактериологическому.