Признаки злокачественности в отд клетках.

· Полиморфизм величины и формы кл-к. Размер кл опухоли больше размера клеток той ткани, из которой опухоль происходит. Опухоль с признаками крайней степени незрелости может состоять из клеток меньшей величины, чем клетки исх ткани. Кл принимают причудл урод форму: лентовидную, колбообразную, веретенообразную, многоотросчатую, неправильную с перетяжками.

· Увеличение ядерно-цитоплазм соотношения или индекса. Ядро знач больше по сравн с ядрами норм Кл.

· Измен стр-ры ядра: контур неправ, неравном извилистый с выемками. Происх утолщ яд обол за счет конденс хроматина по периферии ядра. Хроматин распределен неравномерно, грубозернист.

· Измен величины, формы и кол-ва нуклеол. Нуклеолы большие, неправ формы, число их увеличено.

· Кл мог быть гигантс, многояд с полиморфными ядрами.

· Цитоплазма базофильная

· Атипичное распол ядра в Кл.

· Частые митозы, амитотическое деление Кл-к, многодольчатость ядра.

Химическая анаплазия (различная окраска цитоплазмы).

Признаки злокачественности в комплексах клеток: нарушение клеточных соотношений-концентрическое наслоение Кл плоск эпит в виде луковиц, образование сосочков, розеток, комплексов в виде виногр гроздей, беспорядочное нагроможд Кл-к.

Непрямые критерии злокачественности: дистоф измен ядер и цитоплазмы (кариорексис, кариолизис, пикноз, плазмолиз, плазморексис, жировое перерождение ядер и цитоплазмы); функц критерии: пигмент, кератогиалин, секрет, слизь, детрит.

В дигностике также применяются следующие методы.

Микроскопия. Различают светооптическую, электронную и лазерную микроскопию. Микроскопия требует предварительной подготовки исследуемого материала, порой достаточно длительного. Наиболее распространена световая микроскопия, позволяющая определить клеточный и тканевой состав опухоли, степень злокачественности, характер роста, наличие метастазов и т.д. Электронная и лазерная микроскопия необходима лишь при некоторых видах опухолей для дифференциальной диагностики и более точной верификации.

Иммунофлуоресцентный анализ. Метод основан на выявлении светящегося комплекса антиген-антитело при использовании специфических моноклональных антител, имеющих светящиеся метки, к антигенам мембран опухолевых клеток. Позволяет диагностировать различные подтипы той или иной патологии по экспрессии определенного признака, способного выявляться данным методом. Широко применяется в диагностике лейкозов.

Иммуноферментный анализ. Аналогичен иммунофлуоресцентному, но вместо светящихся меток используют ферментные метки.

Анализ ДНК:

Цитогенетический анализ. Первый генетический маркер опухоли был описан еще в 1960 году и получил название «Филадельфийская хромосома», т.к. исследователи работали в Филадельфии. Сегодня описано множество специфических и неспецифических генетических маркеров опухолей, характерных для той или иной патологии. В результате развития данного метода диагностики становится возможным выявление предрасположенности к развитию опухоли, а также раннее выявление патологии.

Саузерн-блоттинг. Оценивает число копий гена в клетке. Используется редко в силу большой цены исследования.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR). Очень распространенный метод оценки генетической информации в ДНК с очень высокой чувствительностью.

На этом перечень методов не заканчивается. Применение других методов, как впрочем и большинства перечисленных, определяется конкретными задачами диагностики и особенностями заболевания.

Аномальные («новые») белки, как маркеры опухолевых зб, обнаруживаются в патологически измененных тканях и прежде всего в тканях злокачественных новообразований. Эти белки отличаются от встречающихся в норме физическими, физико-химическими и биологическими свойствами, примером их могут быть наиболее часто определяемые в медицинских учреждениях карциноэмбриональные, или онкофетальные, антигены (образуются при внутриутробном развитии плода, в постнатольном же периоде не обнаруживаются): альфа-1-фетопротеин, раково-эмбриональный, карцино-эмбриональный антиген (КЭА) и изофермент щелочной фосфатазы Регана.

Перечень аномальных (и некоторых встречающихся в норме) белков-антигенов, определение которых имеет важное клинико-диагностическое значение, достаточно широк:

- AFP, альфафетопротеин, или альфа-1-фетопротеин (антиген).

Тест его определения используется для диагностики и контроля за эффективности лечения первичного рака печени, гепатоцеллюлярной карциномы (в сочетании с тестом оценки содержания ферритина), а также выявления «зародышевых» клеточных опухолей и пороков развития плода: дефектов нервной трубки, синдрома Дауна и др.

- СА 15-3 Определение этого антигена используется как тест диагностики карциномы (рака) молочной железы, обычно в комбинации с «CEA», «раковоэмбриональным антигеном».

- СА 19-9 – маркер колоректальных опухолей, карциномы желчного пузыря, карциномы поджелудочной железы. Используется для ранней диагностики рака поджелудочной железы и панкреатита.

- СА 50.Тест диагностики злокач новообразований ЖКТ, матки (эндометрия), молочной железы, простаты.

- СА 72-4. Тест определения этого антигена используется для диагностики карциномы (рака) желудка и муцинозной карциномы яичников (в комбинации с СЕА и СА 125)

- СА 125 (опухолеассоциированные антигены). Тест используется для осуществления диагностики и контроля за эффективностью лечения рака (карциномы) яичников.

- СА 549 – диагностика карциномы молочной железы.

- CASA – раковый ассоциированный сывороточный антиген, постановка этого теста рекомендуется для диагностики карциномы яичников (в комбинации с тестом определения СА 125).

- СЕА, карциноэмбриональный антиген, раково-эмбриональный аг (РЭА). Используется для диагностики рака желудка, толстого кишечника и прямой кишки (колоректальные карциномы), осущ контроля за эффективностью лечения опухолей ЖКТ, диагностике рака молочной железы, рака бронхов (увеличение уровня СЕА может обнар и у курильщиков)

- Ferritin (ферритин) –для диагностики гепатоцеллюлярной карциномы (обычно используется в сочетании с определением альфа-фетопротеина), а также выявления ЖДА, оценки депо (скрытого запаса железа) в организме и контроля за его изменением в процессе проведения терапии больным ЖДА.

- Fibronectin (фибронектин) – тест дифференцирования злокачественных асцитов

- Бета-HCG (бета-хорионический гонадотропин, в-ХГЧ). Тест диагностики «зародышевых» опухолей (применяется в сочетании с тестом определения AFP). Определение этого маркера испльзуется для наблюдения за развитием беременности, выявления угрожающего выкидыша и другой патологии беременности.

- В-2 микроглобулин (бета-2-микроглобулин). Диагностика почечной недостаточности, лимфом.

- МСА, муциноподобный раковый антиген (MPA), или муциноподобный карциномо-ассоциированный антиген – диагн рака молочной железы.

- Меланоген в моче – диагностика меланомы.

- CYFRA21-1 – цитоцератиновый фрагмент - рак мочевого пузыря, бронхов.

- MSA – грудной сывороточный антиген – диагностика рака молочной железы.

- Neopterin – злок гематологические зб, гипернефромы.

- NSE – нейронспециф енолаза. Определение этого маркера находит применение для диагностики мелкоклеточной карциномы бронхиол, нейроэндокринных опухолей, в комбинации с СЕА использ для диагностики и контроля за эффективностью лечения мелкоклеточного рака легкого и нейробластомы у детей.

- РАР – простатический изофермент фосфатаза, тест диагностики рака простаты

- РSA - тест ранней диагностики и контроля за лечением рака простаты.

- SCC – диагностика плоскоэпителиальной карциномы шейки матки, легких

- Сиаловые кислоты – диагн меланомы

- Тимидинкиназа – диагн лимфатич и миелоидной лейкемии.

- Тиреоглобулин – рак щитовидной железы

- TPA/TPS – тканеполипептидный антиген – карцинома желчного пузыря и бронхов.

Для выявления перечисленных антигенов исп методы иммуунотурбидиметрического анализа и спец наборы реагентов.

Принятая на сегодняшний день классификация онкомаркеров включает ферменты и изоферменты, гормоны, онкофетальные антигены, углеводсодержащие эпитопы, выявленные с помощью моноклональных антител, а также рецепторы, онкогенные продукты, измененные генетический материал. Опред методом ИФА, современные иммуноферментные методы позволяют определять онкофетальные антигены уже при уровне 1 фмоль в 1 мл сыворотки крови, что соответствует количеству опухолевых клеток порядка 10 в 10 степени.