Постановка основного опыта РСК

Если в пробирке на первой стадии присутствуют специфические антитела (в исследуемой сыворотке) и антигены, то они образуют комплекс, который связывает комплемент. При добавлении на второй стадии гемолитической системы гемолиз эритроцитов не может произойти из-за отсутствия свободного комплемента, и они образуют осадок на дне пробирки. Напротив, если из-за отсутствия специфических антител в исследуемой сыворотке иммунный комплекс не образуется, то на первой стадии реакции связывания комплемента не происходит и он взаимодействует с иммунными комплексами в гемолитической системе, вызывая гемолиз эритроцитов. Таким образом, гемолитическая система является индикаторной, то есть показывающей произошло ли связывание комплемента на первой стадии, а это происходит при наличии специфических антител в исследуемой сыворотке. В связи с этим отрицательным результатом РСК считают наличие гемолиза, положительным — отсутствие гемолиза. При этом результат оценивается как резко положительный (++++) при полном отсутствии гемолиза, положительным (+++) при 25% гемолизе, слабо положительным (++) при 50% гемолизе и сомнительным (+) при 75% гемолизе.

Реакция считается специфичной при соответствии результатов во всех контрольных пробирках ожидаемым согласно внесенным в них ингредиентам. При положительном результате в рабочей пробирке, содержащей исследуемую сыворотку в разведении 1:80 (соответствующим диагностическому титру при сыпном тифе) выдается заключение о наличии у больного данного заболевания.

IV. Примеры ситуационных задач

Задача 1

При постановке РП для определения токсигенности дифтерийной палочки культура Corynebacterium diphtheriae, выделенная от больного А продемонстрировала образование линии преципитации, а от больного Б ¾ нет (контроли ¾ верные). Дайте заключение о токсигенности выделенных культур дифтерийных палочек.

Задача 2

При постановке реакции кольцепреципитации по Асколи в диагностике сибирской язвы получены следующие результаты: наличие преципитата в виде белого кольца появился на границе между компонентами в 1) пробирке с термоэкстрактом и специфической сывороткой, 2) в пробирке с специфическими диагностикумом и сывороткой, 3) в пробирке с термоэкстрактом и нормальной сывороткой; отсутствие преципитата в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия и специфической сывороткой. Дайте оценку специфичности реакции и заключение о наличии антигенов возбудителя сибирской язвы в исследуемом материале.

Тема 3: Иммунологические реакции с мечеными ингредиентами: иммуноблоттинг, реакция иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ.

Цель: знать технику постановки, механизм и учёт иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного анализа (РИА), реакции иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблоттинга (ИБ), область применения и информативность указанных выше реакций; уметь учитывать иммуноферментный анализ, иммуноблотинг.

Задание на дом:

I. Вопросы для самоподготовки:

1. Особенности современных серологических реакций с использованием меток.

2. Механизм, цели применения реакции иммунофлюоресценции (РИФ), виды РИФ, ингредиенты.

3. Механизм, цели применения иммуноферментного анализа (ИФА), ингредиенты.

4. Механизм, ингредиенты радиоиммунного анализа (РИА).

5. Механизм, ингредиенты иммуноблоттинга.

6. Механизм, ингредиентыиммунной электронной микроскопии(ИЭМ).

II. Базовый текст

1. Особенности с овременных серологических реакций с использованием меток

1. Для проведения этих реакций используют метку (флюоресцеин, фермент или изотоп); которую соединяют (конъюгируют) с АГ или AT.

2. Эти серологические реакции происходят быстрее (экспресс) и качественнее.

3. Они являются высокочувствительными и возможна точная регистрация результатов специальными приборами.

4. Их проводят на стекле или в полистироловых планшетах с лунками.

Требования к меткам:

а) не изменять специфичность AT или АГ;

б) быстро и легко выявляться;

в) определяются количественно.

Основные виды меток:

а) светящиеся красители ¾ флюорохромы. Такие серологические ¾ реакции называют реакциями иммунной флюоресценции (РИФ);

б) ферменты ¾ реакции иммуноферментного анализа (ИФА);

в) радиоактивные изотопы ¾ реакции радиоиммунного анализа (РИА);

г) электронно-плотные белки ¾ реакции иммунноэлектронной микроскопии (ИЭМ).

Меченые сыворотки выпускаются 2 разновидностей:

• антимикробные меченые сыворотки, содержащие антитела против определенных видов бактерий, вирусов, риккетсий, хламидий;

• антиглобулиновые меченые сыворотки, содержащие антитела против гамма-глобулинов крови человека или животных.