Археология об основании Рима: Новые раскопки проясняют и такой острый дискуссионный вопрос, как дата самого возникновения Рима...

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...

Определение казеинолитической/ протеолитической активности супернатантов фекалий

2017-09-30 683
Определение казеинолитической/ протеолитической активности супернатантов фекалий 0.00 из 5.00 0 оценок
Заказать работу

Вверх
Содержание
Поиск

Этот метод диагностики дисбиоза основаны на том, что различные таксономические виды бактерий, колонизирующие разные отделы кишечника, обладают неодинаковой протеолитической способностью. Как правило, индигенная микрофлора кишечника человека и его фекалий, в частности бифидо- и лактофлора, обладает выраженной сахаралитической, нежели протеолитической активностью. Возрастание суммарной протеолитической активности супернатантов фекалий тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника.

Рисунок 15. Степени дисбактериоза на основании казеинолитической активности

Постановка:

1) Среда: в расплавленный МПА вносят 1,5% казеин на 0,2Н NaOH в соотношении 1:10, рН доводят до 7,2-7,4

2) Фекалии+ физ. р-р 1:10, цетрифугирование при 3000 об/мин 15 мин., обработать хлороформом

3) Вносят в лунки по 20 мкл

4) Инкубация при 37ºС 6-8ч

5) Проявление добавлением 5 мл 5% водного р-ра соляной кислоты

6) Оценка результата: 0 степень — менее 10 мм, 1 степень — от10 до 12 мм, 2 степень — от 13 до 16 мм, 3 степень — от 17 мм и более (рис.15)

Техники посева и питательные среды при исследовании на дисбактериоз

Рассев петлей (посев штрихами). Берут одну чашку Петри с питательным агаром и делят ее на 4 сектора, проводя разграничительные линии на внешней стороне дна чашки. Исследуемый ма­териал петлей вносят в первый сектор и проводят ею па­раллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлей, не изменяя ее положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные колонии. Кроме того, можно наливать разведен­ные растворы смешанной культуры на поверхность твер­дых сред в чашках.

Таблица 21. Среды для микроорганизмов при диагностики дисбактериоза

Среды Разведения Микроорганизмы
Мюллера, селенитовая, магниевая Без разведения Патогенные энтеробактерии
Плоскирева, Левина с синтомицином 10-1
Печеночная среда Блаурока 10-3-10-10 Бифидумбактерии
Агар Хенеля (анаэробные условия) 10-3-10-7 Бактероиды
МРС-4 (анаэробные условия) 10-3-10-7 Лактобациллы и стрептококки
Среда Калины или ДИФ-3 10-3-10-7 Энтерококки
Желточно-солевой агар 10-3-10-5 Стафилококки
Среда Сабуро 10-3-10-5 Грибы рода Кандида
Среда Левина 10-3-10-5 Энтеробактерии
Среда Плоскирева 10-3 Энтеробактерии
Среда Эндо 10-5 Энтеробактерии
Малахитовый агар 10-1, 10-3, 10-5, 10-7 Синегнойная палочка
Кровяной агар 10-5, 10-7 Гемолизирующие культуры
Среда Вильсона-Блер 10-3, 10-5, 10-7 Клостридии

Схема 1. Схема посева на дисбактериоз по Gold:

A I II III Кол-во в 1 гр.
30-60 - - -  
70-80 - - -  
100-150 5-10 - -  
Не сосч. 20-30 - -  
Не сосч. 40-60 - - 1 млн.
Не сосч. 100-150 10-20 - 5 млн.

Схема 2. Схема посева на дисбактериоз по Н.М.Грачевой, И.Н.Щетининой, 1991:


Схема посева на дисбактериоз по Дригальскому:

Схема 3. Схема посева на дисбактериоз по Дригальскому:

1. посев

шпателем

 

2. инкубация

           
     


3. учёт

 

 

трёхчашечный метод (по Дригальскому)

Рассев шпателем по Дригальскому. Берут 3 чашки Петри с питательной средой. На 1-ю чашку петлей или пипеткой наносят кап­лю исследуемого материала и растирают шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель пе­реносят во 2-ю чашку и втирают оставшуюся на шпателе культуру в поверхность питательной среды. Далее шпа­тель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом про­изводят посев. На 1-й чашке вырастает максимальное количество колоний, на 3-й — минимальное. В зависимо­сти от содержания микробных клеток в исследуемом ма­териале на одной из чашек вырастают отдельные коло­нии, пригодные для выделения чистой культуры микро­организма.


Поделиться с друзьями:

Наброски и зарисовки растений, плодов, цветов: Освоить конструктивное построение структуры дерева через зарисовки отдельных деревьев, группы деревьев...

Индивидуальные очистные сооружения: К классу индивидуальных очистных сооружений относят сооружения, пропускная способность которых...

Автоматическое растормаживание колес: Тормозные устройства колес предназначены для уменьше­ния длины пробега и улучшения маневрирования ВС при...

Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...



© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!

0.015 с.