Тема 2: Идентификация вирусов. Серодиагностика. Генетические методы диагностики (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция).

Цель занятия: знать: методы серологической и генетической идентификации вирусов (молекулярная гибридизация (МГ), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

уметь: учитывать и интерпретировать реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию нейтрализации (РН) с учётом по цветной пробе, иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунный анализ (РИА).

Задание на дом:

I. Вопросы для самоподготовки:

1. Идентификация вирусов и ее виды

2. Идентификация вирусов по антигенному строению:

а) реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

б) реакция нейтрализации (РН)

в) реакция связывания комплемента (РСК)

г) иммуноферментный анализ (ИФА)

д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

е) радиоиммунный анализ (РИА)

3. Методы генетической идентификации вирусов

а) молекулярная гибридизация (МГ)

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР)

II. Базовый текст

Иденификация вирусов и ее виды

Идентификация (определение вида, типа) вирусов осуществляется, в основном, с помощью иммунологических реакций, основанных на взаимодействии антигенов вирусов и соответствующих им антител.

1. При выделении вирусов от больного производят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация вирусов.

Для серологической идентификации вирусов (идентификация вирусов по антигенному строению) используют следующие наиболее распространенные реакции: реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция нейтрализации (РН), реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунный анализ (РИА).

Ретроспективным методом диагностики вирусных инфекций является серологический метод с парными сыворотками больного, взятых в период заболевания и период реконвалесценции с интервалом 2-3 недели.

2. Генетическая идентификация вирусов (идентификация по нуклеиновой кислоте)

а) молекулярная гибридизация (МГ),

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Для проведения диагностики вирусных инфекций с помощью нуклеиновых зондов, ПЦР требуется 24-48 часов.

2. Идентификация вирусов по антигенному строению

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

Механизм реакции торможения гемагглютинации (ранняя)основан на блокаде, подавлении антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты, которые выпадают в осадок в виде пуговки (положительная реакция). РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных. Ингредиенты: вируссодержащий материал, диагностические иммунные сыворотки (содержащие антивирусные антитела), суспензия куриных эритроцитов и 0,9% р-р NaCl.

 

РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (РН)

Механизмреакции нейтрализации (РН) основан на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать (блокировать) поверхностные рецепторы (антигены) вирусов, в результате чего вирусы теряют способность проникать в живые клетки.Реакцию проводят путем введения смеси антиген (вируссодержащий материал) — антитело (специфические диагностические сыворотки) в организм животных или чувствительные тест-объекты (культуру клеток в питательной среде и индикатором pH или эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия вирусов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело.

 

Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: А — цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов; Б — ЦПЭ отсутствует в результате нейтрализации вирусов антителами.