Учесть и зарисовать ЦПД в клеточных культурах

Мазок №1- нормальная культура клеток. В поле зрения наблюдаются клетки с ярко выраженной цитоплазматической мембраной, цитоплазмой и находящимся в ней ядром. Клетки с неизмененной внутренней структурой равномерно распределены в мазке.

Мазок №2- цитопатическое действие вируса на клетки. В поле зрения наблюдается полная или частичная дегенерация клеток (разрыв монослоя) за счет внутриклеточной репродукции вируса, что проявляется в уменьшении количества клеток, а также изменении формы клеток, и формировании гигантских многоядерных клеток (симпластов).

Учесть и зарисовать реакцию гемадсорбции

Целый ряд вирусов (гриппа, парагриппа и др.) обладают гемадсорбирующими свойствами, что позволяет использовать реакцию гемадсорбции для индикации этих вирусов даже при отсутствии выраженного ЦПД в культуре клеток.

Дать определение гемадсорбции и используя таблицу, зарисовать эритроциты, адсорбированные на зараженных вирусом клетках.

4. Учесть и зарисовать реакцию образования бляшек под агаром

Культуру клеток с питательной средой №199 и агаром заражают вирусологическим материалом и инкубируют в течение нескольких суток при температуре 37ºC. Появление светлых пятен («бляшка»), видимых невооруженным глазом, на фоне окрашенного монослоя живых клеток свидетельствует о разрушенных вирусами клеток. Добавление агара в питательную среду ограничивает распространение вирусов по всему монослою после выхода их из разрушенной клетки и обеспечивает взаимодействие вирусов только с соседними клетками. Каждая «бляшка» образуется потомством одного вириона. Подсчитав количество «бляшек», можно определить концентрацию вирусов в исследуемом материале. Кроме того, «бляшки» разных групп вирусов отличаются по размеру, форме, срокам появления.

Используя таблицу, зарисовать реакцию образования бляшек под агаром.

5. Учесть и зарисовать реакцию подавления метаболической активности (цветная проба)

Представлены 3 пробирки: 1-я — рабочая, 2-я- контроль культуры клеток и 3-я- контроль среды №199

	1-я пробирка	2-я пробирка	3-я пробирка
Компоненты:	Культура клеток, питательная среда № 199, вирусологический материал	Культура клеток, питательная среда № 199	питательная среда № 199
pH/цвет	Нейтральная/красный	Кислая/желтый	Нейтральная/красный
ЦПД	+	-	-

Учесть реакцию гемагглютинации (РГА) с целью индикации вируса гриппа

Ряд вирусов (ортомиксовирусы, парамиксовирусы) содержат в суперкапсиде гликопротеиновые шипы, обладающие гемагглютинирующей активностью и вызывающие гемагглютинацию («склеивание» эритроцитов).

Метод диагностики: вирусологический

Компоненты: вирусологический материал, 0,9% р-р NaCl, 1% суспензия отмытых куриных эритроцитов.

Постановка: Разведение вирусологического материала физиологическим раствором в ряде лунок по 0,5 мл. В каждую лунку вносят суспензию эритроцитов по 0,2 мл. Выдерживают при комнатной температуре в течение 40 мин.

Учет: Положительная реакция — осадок эритроцитов с неровными краями в виде зонтика. Отрицательная реакция — осадок эритроцитов с ровными краями в виде пуговки. Титр РГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается гемагглютинация (красный зонтик).

Заключение: Вирусологический материал содержит вирус гриппа в титре 1:200.

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

При учете реакции подавления метаболической активности (цветная проба) получены следующие результаты: через 48 ч. инкубации в рабочей пробирке выявлена жидкость желтого цвета. Сформулируйте заключение по этой реакции:

1. Вирусологический материал содержит вирус
2. Вирусологический материал не содержит вирус
3. ЦПД положительное
4. ЦПД отрицательное

Ситуационная задача № 2

В результате культивирования вируса гриппа в аллантоисной жидкости куриного эмбриона необходимо убедиться, что вирус размножился в достаточном количестве. Для этого нужно:

1. Произвести электронную микроскопию вируссодержащего материала

2. Добавить к аллантоисной жидкости индикатор рН среды

3. Сделать мазок, окрасить по Граму и микроскопировать

4. Поставить реакцию агглютинации

5. Поставить реакцию гемагглютинации