Общие принципы диагностики врожденных инфекций у новорожденного.

Диагностика инфекционных заболеваний основана на обнаружении возбудителя (или его структурных компонентов – белков, нуклеиновых кислот) или на выявлении наличия специфического иммунитета к данному возбудителю.

1. Методы выявления возбудителя:

• Культуральный метод (выявление живых вирионов или бактерий).
• Быстрый культуральный метод (выявление живых вирионов).
• Полимеразная цепная реакция (ПЦР – выявление генома).
• Выявление антигена.

2. Серологические методы (наличие иммунного ответа):

· Выявление специфических антител классов IgG, IgM, IgA.

Для диагностики бактериальных инфекций используются стандартные бактериологические методы. «Золотым стандартом» диагностики вирусных инфекций является вирусологическое исследование. Однако оно трудоемкое и длительное, поэтому для диагностики инфекций, вызванных вирусами и внутриклеточными паразитами, используется редко. В настоящее время разработан быстрый культуральный метод, позволяющий за 2-3 суток выявить наличие живых вирусных частиц в исследуемом материале. Полимеразная цепная реакция позволяет выявить ДНК или РНК возбудителя. Современные методики (полуколичественный и количественный метод) позволяют определить количество копий генома возбудителя. Для ряда возбудителей разработана антигенная диагностика (для вирусных гепатитов, цитомегаловирусной инфекции).

Присутствие возбудителя в материале, взятом с барьерных органов (кожи, слизистых) не может использоваться в качестве единственного метода диагностики. На клиническую значимость указывает обнаружение самого возбудителя, его антигенов или его ДНК во внутренних средах организма (крови, ликворе, биопсийном материале).

       Серологические методы предполагают выявление специфических антител классов IgG, IgM или IgА. Антитела класса М вырабатываются через некоторое время после первого контакта иммунной системы больного с антигенами возбудителя. У новорожденных период от проникновения возбудителя во внутреннюю среду до выработки специфических антител может быть очень длительным – до 4 недель. В ходе течения инфекционного процесса постепенно начинают вырабатываться антитела класса IgG, выработка которых может поддерживаться длительно (для ряда инфекций, например, краснухи – пожизненно). В последнем триместре беременности идет процесс проникновения антител класса IgG против возбудителей, с которыми сталкивалась мать, от матери к плоду. Если титры антител IgG у ребенка равны или меньше материнских , с высокой вероятностью можно утверждать, что они имеют материнское происхождение. Поэтому серологическое обследование новорожденных проводится по определенным правилам и требует вдумчивой оценки.

Принципы серологического обследования:

1. Серологическое обследование должно проводиться до введения препаратов крови.

2. Серологическое обследование новорожденных и детей первых месяцев жизни должно проводиться с одновременным серологическим обследованием матерей.

3. Серологическое обследование должно проводиться методом парных сывороток с интервалом 14-21 день в одной лаборатории одним методом.

4. Оценка результатов должна проводиться с учетом возможностей характера и фазы иммунного ответа.

Сероконверсией называют появление специфических антител у больного, не имевшего их при предыдущем обследовании. Сероконверсия выявляется позже клинических симптомов и позже прямых маркеров. Поскольку выработка антител у новорожденных происходит через 2-4 недели после инфицирования высока вероятность провести забор проб в период «иммунологического молчания». Так, хорошо известна сниженная или замедленная продукция антител у недоношенных детей. У ряда детей возможен неадекватный иммунологический ответ: феномен иммунологической толерантности (особой реакции подавления выработки специфических антител) к антигенам вируса может формироваться как в пре-, так и в постнатальном периоде. У 7-15% детей антигены вируса обнаруживаются при отсутствии специфических антител, у части детей титр антител незначительный и в динамике не нарастает. Все это делает высоко вероятным ложноотрицательный результат серологического обследования у новорожденных.

Обнаружение антител класса G в связи с возможностью длительного их присутствия после окончания инфекционного заболевания и в связи с возможностью передачи антител данного класса от матери, не позволяет сделать вывод о фазе инфекционного процесса. В случае, если оснащенность лаборатории не позволяет использовать другие методики, целесообразно дополнить анализ определением авидности антител (способности связывать антиген). Авидность анител при инфекционном процессе постепенно повышается. Выявление низкоавидных антител свидетельствует о текущей или недавно перенесенной инфекции, а высокоавидных – позволяет исключить активную фазу заболевания. Без одновременного обследования матери определение титра только IgG может приводить к ложноположительным результатам теста у детей первых месяцев жизни.

Поскольку тактика ведения больного зависит от наличия или отсутствия именно активной фазы инфекции необходимо выделить критерии остроты процесса:

Маркеры активности:

1. Маркеры активной репликации возбудителя:

- вирус в крови или ликворе

- антиген вируса в крови или ликворе

- ДНК (РНК) вируса в крови или ликворе

2. Иммунологические маркеры:

- сероконверсия

- 4-х кратное и выше нарастание титров в парных сыворотках.