Взятие и транспортировка афтозного материала

Материалом при проведении лабораторных исследований являются стенки афт в коли­честве не менее 5 г. У крупного рогатого скота свежие афты срезают ножницами с языка от 2—3 больных животных, у овец — с беззубого края верхней челюсти, у свиней - с пятачка и вымени. Полученный афтозный материал помещают во флакон с герметически закры­вающейся крышкой и содержащий консервирующую жидкость, и представляющую химиче­ски чистый глицерин, смешанный в равном объеме с фосфатно-буферным раствором рН=7,4—7,6. Флакон необходимо завернуть в вату, поместить в специальный контейнер и опечатать. Отправлять материал в лабораторию можно только с нарочным, получившим специальный инструктаж. В сопроводительном письме указывают дату взятия материала, его количество, вид животного, дату вакцинации против ящура, название вакцин, номер се­рии и дату выпуска, место изготовления.

Культивирование: Вирус культивируется на естественно- восприимчивых и лабораторных животных: новорожденных мышатах и крольчатах, морских свинках хомяках 60-суточного возраста, развивающихся куриных эмбрионах. Хорошо репродуцируется в культуре клеток почек чувствительных животных, культуре экспплантантов эпителия языка КРС и в некоторых перевиваемых линиях клеток с выраженным ЦПД. Получены аттенуированные штаммы вируса, используются в качестве живой вакцины.

Схема лабораторной диагностики.

1. Экспресс – методы: РИФ, РСК.

2. Вирусологическое исследование:

а)выделение вируса на мышах –сосунах, морских свинках,

крольчатах, культуре клеток свиной почки и щитовидной

железы, естественно-восприимчивых животных;

б)идентификация выделенного вируса в РСК, РДП, РПГА, РН.

3. Ретроспективная диагностика: РПСК, РДП, РИД, РНИФ, РН, РУСК.

Срок исследования – до 7 сут (2…10 сут).

Подготовка вируссодержащей суспензии и антигена для РСК

Из афтозного материала

При работе с афтозным материалом необходимо строго соблюдать правила техники безопасности. Поэтому всю работу, связанную с подготовкой вирусного материала и его исследованием, проводят в специальном помещении, куда вход посторонним лицам строго запрещен. В помещении должен быть бокс, а также необходимое оборудование, инструмен­ты, посуда, одежда. Афтозный материал хранят в опечатанном холодильнике. Всю работу проводят в боксе и в спецодежде. В конце каждого рабочего дня производят обеззаражива­ние рабочего места, пола, стен бокса с последующим облучением ультрафиолетовыми луча­ми. Инструменты, посуду, шприцы следует прокипятить.

Афтозный материал извлекают и тщательно отмывают от консервирующей жидкости в фосфатно-буферном растворе, подсушивают на фильтровальной бумаге, взвешивают, мет­ко измельчают ножницами, размалывают в ступке с песком до гомогенной массы и добав­ляют 2 части фосфатно-буферного раствора с антибиотиками. Полученную 33%-ную взвесь выдерживают при комнатной температуре 1,5—2 часа, а затем промораживают в холодиль­нике при температуре минус 6— 20° в течение 12—18 часов, размораживают и центрифуги­руют 15 минут при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость отделяют и делят на две части. Одну часть инактивируют при 58°С в течение 40 минут, а затем используют в качестве анти­гена для РСК, другую — для выделения и накопления вируса, когда мало поступает афтозного материала. С целью постановки биопробы и накопления вирусной массы производят заражение мышат в возрасте 3—5 дней. Их берут вместе с гнездом и маткой. В начале надо убедиться, что она их кормит. Не следует брать мышат руками. Б положительном случае у мышат развиваются парезы, параличи и на 2-5 день наступает гибель при отсутствии этих признаков в группе контрольных мышат По мере гибели, трупы помещают в флаконы и хранят в замороженном виде, а затем используют для подготовки вируссодержащей суспен­зии и антигена для подготовки вируссодержащей суспензии и антигена для РСК. В отрица­тельном случае мышат уничтожают или из них готовят вируссодержащую суспензию для последующего пассажа.

Биопробу можно ставить на молодых морских свинках весом не более 500 грамм. Их заражают внутрикожно в плантарную поверхность задних лапок. Б положительном случае на 2-5 день на месте инъекции появляются первичные афты, которые собирают и немедлен­но замораживают. Однако таким путем удается получить лишь небольшое количество ви­русного материала, поэтому для накопления вирусной массы лучше использовать мышат-сосунов. Титрование вируса ящура производят в серологических реакциях: РДП, РСК. РН. Во время работы необходимо вести регистрацию расхода вирусного материала в специаль­ном журнале, где отмечают дату поступления, количество материала, хранение и расход. Оставшийся после исследования антиген уничтожают и составляют акт.