Культивирование вирусов в куриных эмбрионах.

Куриные эмбрионы как живая система вошли в вирусологическую практику в 30-х годах XX в. Их использование расширило спектр культивируемых в лабораторных условиях вирусов, позволило более успешно решать стоящие перед вирусологией задачи в связи с тем, что куриные эмбрионы имеют ряд преимуществ перед лабораторными животными.
Так, скорлупа и подскорлупная оболочка надежно защищают эмбрион от бактериального заражения со стороны внешней среды. Важным преимуществом эмбрионов является также их высокая чувствительность к широкому спектру вирусов, что объясняется недостаточным развитием защитных механизмов. Куриные эмбрионы -
легкодоступный объект в связи с развитием широкой сети птицефабрик и инкубаториев. Кроме того, куриные эмбрионы экономичны, не требуют ухода и кормления.
Однако нельзя полностью гарантировать стерильность этой живой системы, так как эмбрионы могут нести в своем содержимом вирусы и другие патогенные агенты (вирусы инфекционного бронхита кур, ньюкаслской болезни, гриппа, лейкоза, хламидии и микоплазмы). Их присутствие может искажать результаты исследования.
Используют куриные эмбрионы в вирусологии в основном для тех же целей, что и лабораторных животных, а именно:
- обнаружения в патматериале активного вируса биопробой;
- первичного выделения вируса;
- поддержания вирусов в лаборатории;
- титрования вирусов;
- накопления вируса для лабораторных исследований и получения вакцин;
- как тест-объект в реакции нейтрализации.
Эффективно выделяют и культивируют на куриных эмбрионах вирусы, вызывающие заболевания у птиц, а также некоторые вирусы млекопитающих.
При отборе куриных эмбрионов для заражения вируссодержащим материалом к ним предъявляют следующие требования: Используют эмбрионы в возрасте от 8 до 14 дней в зависимости от вида вируса, способа заражения и задач исследования. Вирусы гриппа культивируются в 9-10, осповакцины - в 12, паротита - в 7-дневных куриных эмбрионах. Размножение вируса в куриных эмбрионах происходит в разных частях зародыша, что связано с особенностями тропизма вируса. Методику выращивания вируса в курином эмбрионе широко используют при промышленном культивировании.

Заражение в аллантоисную полость. Вирус, введенный в аллантоис, размножается в эндодермальных клетках, переходя затем в аллантоисную жидкость. Заражение осуществляют следующим способом: в скорлупе над воздушной камерой острием скальпеля или ножниц производят прокол, после чего через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу со шприцем, которая проходит через хорионаллантоисную оболочку и попадает в аллантоисную полость, материал вводится в объеме 0,1 мл и отверстие заливают парафином.

Заражение в желточный мешок. С этой целью используют эмбрионы 5 - 10-дневного возраста. Наиболее употребительны два метода заражения. По первому материал вводится через воздушное пространство. В центре яйца делают отверстие, помещают его на подставку тупым концом вправо и через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу, надетую на шприц, игла проходит через хорионаллантоисную оболочку, аллантоисную полость в желток. В желточный мешок можно ввести от 0,1 до 0,5 мл вируссодержащего материала. После заражения отверстие в скорлупе заливают парафином, и эмбрион помещают в термостат. По второму методу на границе воздушного пространства с той стороны, где лежит желток (стороны, противоположной от эмбриона), делают прокол скорлупы, через который Куриный эмбрион, инфицированный вирусным материалом, ставят в инкубатор на 2—3 дня, в зависимости от характера внесенного вируса. Для развития вирусов из проб, взятых у больного (например, смывов из носоглотки, использующихся при диагностировании гриппа), куриный эмбрион представляет хорошую среду. По типу изменений, скажем в тканях хорионаллантоисной оболочки, можно непосредственно определить, с каким вирусом мы имеем дело. Очень характерные изменения дают вирусы оспы и герпеса. Некоторые вирусы очень интенсивно размножаются в различных тканях куриного эмбриона и дают исходный материал для приготовления вирусных антигенов, необходимых при лабораторной диагностике вирусных заболеваний. Вирусы, размноженные в курином эмбрионе, были использованы как исходный материал для получения восемнадцати видов прививочных вакцин.вводят инфекционный материал. Направление иглы должно быть к центру яйца.

2) 57.Механизм образования и противовирусного действия интерферона.Применение интерферона.

Образование интерферона, кроме действия вирусов, может индуцироваться некоторыми микроорганизмами и продуктами их жизнедеятельности, синтетическими полирибонуклеотидами и другими соединениями.Особенностью интерферона является то, что он проявляет активность лишь в организмах, из которых он был выделен, т.е. является видовым фактором. Молекулярная масса интерферона зависит от вида животных, который его продуцирует, и составляет 13–170 тыс. Известно несколько видов интерферонов, среди которых наиболее важное значение имеют альфа-, бета- и гамма-интерфероны. В организме человека образуются в основном альфа1-, альфа2- и альфа3-интерфероны.Молекулярная масса их составляет 18–25 тыс., реже от 5,5 до 7,5 тыс. На N-конце молекул интерферонов, как правило, содержится остаток цистеина, который принимает участие в образовании дисульфидной связи, важной для их биологического действия.

В настоящее время интерфероны эффективно используются для лечения вирусных, респираторных и инфекционных заболеваний. Внедрен микробиологический синтез интерферона с применением методов генной инженерии. Ген интерферона внедряют в геном бактерии E.coli, которая и обеспечивает его синтез.Механизм противовирусного действия интерферонов

При вирусной инфекции клетки синтезируют интерферон и секретируют его в межклеточное пространство, где он связывается со специфическими рецепторами соседних незараженных клеток.На вирус вне клетки интерферон не действует. Он связывается со специальными рецепторами клеток, нарушает метаболизм вирусинфицированной клетки и, тем самым нарушает репликацию вируса.