Характеристика семейства реовирусов

Семейство Reoviridae — большая группа вирусов, поражающая позвоночных, насекомых и растения.Вирионы реовирусов сферической формы, диаметром 60— 70 нм, с двойным капсидом — наружным и внутренним, кубического типа симметрии; суперкапсидной оболочки нет.Геном представлен двуспиральной фрагментированной (i0— 12 сегментов) линейной РНК. Вирион содержит транскриптазу (РНК-зависимую PHK-полимеразу). Внутренний капсид и геномная РНК составляют сердцевину вириона.В вирионах реовирусов обнаружено 6—10 полипептидов с молекулярной массой 15—155 кД. Некоторые белки гликозилированы. Липиды в составе вирионов не выявлены. Реовирусы содержат 78-86 % белка и 14-22 % РНК.Реовирусы репродуцируются в цитоплазме клетки с образованием характерных цитоплазматических включений, содержащих РНК, вирусные белки, зрелые и незрелые вирусные частицы.Размножаются вирусы в цитоплазме инфицированных клеток. Вирионы вирусов адсорбируются на клетке (с помощью прикрепительного белка — сигма) и проникают путем эндоцитоза в цитоплазму клетки, где под влиянием ферментов лизосом происходят частичная депротеинизация, разрушение наружного капсида, освобождение сердцевины. Ферменты сердцевины инициируют продукцию иРНК, используя в качестве матрицы минус-нить РНК. С каждого фрагмента геномной РНК считывается индивидуальная иРНК.Все 10 видов иРНК связываются с рибосомами и обеспечивают синтез структурных и неструктурных вирусспецифических белков. Плюс-РНК является иРНК, она в составе субвирусных частиц (внутри капсида) является матрицей для образования новых двуспиральных РНК. Вирионы реовирусов формируются в цитоплазматических «фабриках», расположенных около ядра. Вирусы выходят при лизисе клетки.При пассировании реовирусов в клеточных культурах с высокой множественностью заражения образуются дефектные инфекционные частицы, в которых отсутствуют 1—2 фрагмента РНК.

Билет 18

1) 40.Методика приготовления культуры клеток фибробластов эмбрионов кур.

Культуры клеток можно получать не только из органов эмбрио­нов, но и из органов различных молодых убитых животных, одна­ко адаптация эмбриональных клеток к искусственным питательным средам, интенсивность размножения и чувствительность их к различным вирусам значительно выше, чем у клеток, полученных из органов молодых и взрослых животных.

Часто в ветеринарной практике для приготовления КК используют 9-10 суточные куриные эмбрионы (КЭ), эмбрионы кроликов, мышей, морских свинок, различных сельскохозяйственных и домашних жи­вотных. В медицинской вирусологии чаше всего применяют различ­ные перевиваемые линии клеток и культуры клеток из фибробластов эмбриона человека. Этот материал очень дешевый, стерильный и всегда в достаточном количестве имеется в гинекологических отделениях родильных домов, после прерывания беременности у женщин.

Открытию метода культивирования животных клеток in vitro предшествовали многолетние поиски и разработки рецепта питательной среды для изготовления дешевой лабораторной модели для культивирования вирусов, которые могли бы заменить КЭ, лабораторных и сельскохозяйственных животных. Приоритет в этом вопросе принадлежит американским ученым. В 1943 году Херанг, в 1949 году Эндрес изучали этапы дегенерации клеток под действием вируса, впоследствии названных цитопатическим действием (ЦПД). Живые и погибшие клетки хорошо видны в обычный световой микроскоп уже при малом увеличении. В 1952 году аме­риканские исследователи Дульбеко и Фогт разработали методику получения первично трипсинизированных культур клеток, которые сразу же получили широкое внедрение в практику медицинских и ветеринарных вирусологических лабораторий, биокомбинатов, би­офабрик и других учреждений.

В последние 25-30 лет разработаны методики получения диплоидных, перевиваемых, суспензионных и других культур, которые, более экономичны в вирусологической практике.

Культуры клеток применяются для:

1. Обнаружения вируса в исследуемом патологическом материале на ЦПД.

2. Идентификации вируса, обнаружение специфических антител в исследуемых сыворотках крови и определение их титров по реакции нейтрализации на КК.

3. Накопления вируса для производства культуральных живых и убитых вирус вакцин.

4. Получения вирусных антигенов-диагностикумов для серологической диагностики вирусов