Диагностика паразитарных заболеваний

Диагностика многих паразитарных заболеваний не вызывает сложностей. Это связано с тем, что эктопаразитов и мезопаразитов можно обнаружить при проведении визуального осмотра. Яйца кишечных гельминтов обнаруживаются в результате простых лабораторных тестов в смывах кала. Некоторые кровяные паразиты могут быть обнаружены при изучении препаратов (мазков) крови. Однако многие паразиты крови, тканей и полостей органов не могут быть обнаружены визуально. В этом случае используется иммунодиагностика, поскольку, когда невозможно обнаружить самого паразита, можно обнаружить реакцию организма хозяина на присутствие в нем паразита – наличие специфических противопаразитарных антител, повышение уровня иммунокомпетентных клеток и специфических химических агентов – цитокинов и т.п.

Гельминтологические методы исследования направлены на выявление яиц, личинок или фрагментов гельминтов.

Метод нативного мазка и метод толстого мазка используются для выявления яиц червей. Небольшое количество кала растирают на предметном стекле, после чего пробу просматривают под микроскопом. Иногда, как в методе Като, мазок дополнительно просветляют, чтобы улучшить видимость яиц.

Методы всплывания (флотационный метод) основываются на центрифугировании пробы кала в градиенте плотности. Градиент плотности – это жидкость, плотность которой подобрана таким образом, чтобы яйца глистов всплывали и оказывались на поверхностной пленке жидкости. После этого поверхностную пленку снимают и переносят на стекло.

Исследование соскоба сперианальных складок (у входа в анальное отверстие) используется для выявления яиц остриц и онкосфер бычьего цепня. Область вокруг анального отверстия обрабатывают влажной салфеткой или, в классическом варианте метода, производят соскабливание шпателем. Салфетку промывают в воде, затем жидкость центрифугируют, яйца оседают на дно пробирки, после чего их переносят на стекло.

Метод Берманна для выявления личинок заключается в извлечении личинок червей из пробы кала. Основан на том, что личинки из кала активно переходят в теплую воду, поскольку обладают тропизмом к высокой температуре. Пробу кала располагают на сетке, соприкасающейся с водой, нагретой до 50 градусов, личинки через некоторое время переходят в воду, после чего их можно отцентрифугировать и изучить под микроскопом.

Метод культивирования личинок обычно используется для выявления анкилостомы. Кал наносят на фильтровальную бумагу, которую помещают в пробирку с водой. Анкилостомы имеют свободную личинку, которая активно проникает через кожу человека при соприкосновении. Через 7 дней в кале из яиц выходят личинки и, поскольку они какое-то время должны находиться в почве, они спускаются вниз и оказываются на дне пробирки, где видны невооруженным глазом.

Анализ мокроты, носовой слизи и влагалищных выделений используется для выявления яиц легочной трематоды, личинок аскарид и анкилостомид, яиц остриц, фрагментов эхинококкового пузыря. Исследуемую порцию выделений намазывают на стекло и просматривают на черном и белом фоне под микроскопом.

Анализ дуоденального и желудочного сока используется для выявления яиц печеночных трематод, анкилостомид, личинок угрицы кишечной. Дуоденальное содержимое, полученное при зондировании, центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Исследование тканей. Для выявления личинок трихинелл кусочки биопсированной мышцы тщательно расщепляют на волоконца, сдавливают между компрессорными стеклами и исследуют под микроскопом с затененным светом. Для выявления цистицерков мышцы расслаивают препаровальными иглами, выделенный пузырек очищают от окружающей ткани, сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой.

Анализ крови в гельминтологии используется для выявления личинок филярий. Исследуют висячую каплю на покровном стекле, окантованном вазелином. Для дифференцирования разных видов филярий исследуют мазки, окрашенные по методу Романовского-Гимзы.

При выявлении кровяных паразитов, таких как малярийный плазмодий или трипаносома, также изготавливаются препараты крови, окрашиваются и микроскопируются.

Точная диагностика гельминтозов основана на морфологических различиях яиц разных видов червей.

Иммунологические методы исследования основаны на обнаружении не самих паразитов, а реакции на паразитарную инвазию со стороны организма хозяина.

Кожный тест основан на предположении, что, если в организме находится паразит, иммунная система находятся в активированном состоянии и по этой причине, при введении в организм антигена паразита, разовьется быстрая и заметная воспалительная реакция. На коже эта воспалительная реакция будет видна как покраснение, гиперемия, появление пузырьков и т.д. При проведении такого теста в коже делается небольшой разрез, в который помещается какой-то из белковых антигенов паразита. Если иммунная система была преактивирована, через сутки или двое появляется реакция.

В реакции непрямой гемагглютинации также выясняют, есть ли антитела к паразитам в крови человека, однако проводится такой тест in-vitro, то есть вне тела человека, «в пробирке». У человека берут кровь, отделяют эритроциты и обрабатывают их паразитарным антигеном. Используются коммерческие (специально произведенные для медицинских целей) антигены. Затем эритроциты возвращаются в сыворотку. Поскольку на эритроцитах сорбирован антиген, а в сыворотке могут находиться или находятся антитела, антитела «склеивают» эритроциты в комки. При обнаружении таких комков, становится ясно, что антитела в крови были. В противном случае эритроциты остаются свободными.

Для реакции ИФА (иммуноферментный анализ) используются коммерческие наборы, которые включают планшеты с лунками, на стенках которых уже зафиксированы паразитарные антигены. В эти лунки наливается сыворотка крови человека. Если антитела в сыворотке присутствуют, они связываются с антигенами. Потом в те же лунки добавляют краситель, который окрашивает только комплекс антиген-антитело, но не свободные антигены. По изменению цвета раствора судят о присутствии в крови антител.

Реакция связывания комплемента более сложна. Суть ее сводится к такому же взаимодействию между паразитарным антигеном и антителами в сыворотке крови человека. Ключевым агентом для выявления такого связывания выступает не краситель, как в реакции ИФА, а комплемент – это система белков, которая постоянно присутствует в крови млекопитающих и участвует в развитии иммунного ответа по каскадному механизму. Белки системы комплемента вызывают разрушение клеток, на мембране которых находится антиген, но только после связывания антигена с антителом. Для проведения реакции эритроциты обрабатываются паразитарным атигеном, а затем смешиваются с сывороткой крови. При наличии в сыворотке антител, система комплимента вызовет лизис (разрушение) помеченных антигеном эритроцитов.

Генетические методы исследования также используются в тех случаях, когда паразита невозможно выявить визуально. При генетических методах исследования, основанных на реакции ПЦР, у хозяина выделяется ДНК, обычно из крови или из других жидкостей и тканей, в которых могут находиться паразиты. Поскольку при выделении ДНК выделяется вся ДНК, которая оказалась в пробе, то есть ДНК и хозяина и паразита, с этой ДНК можно провести полимеразную цепную реакцию в таких условиях, в которых ДНК паразита будет амплифицироваться, а ДНК хозяина – нет. Для проведения специфической ПЦР используются специально синтезированные праймеры (ДНК-затравки), обладающие сродством только к специфическим генам паразита, отсутствующим в геноме хозяина. По наличию амплификата в продукте ПЦР судят о том, были ли паразиты в пробе жидкостей человека.