Основные характеристики веществ, употребляемых для уплотнения питательных сред.

Характеристика	Агар	Желатин	Кремнекислый гель
Исходный материал для получения
Основные компоненты
Температура плавления
Температура застывания С0
Действие протеаз
Конденсационная вода
Употребляемая концентрация, %

 

Методы стерилизации

Стерилизация (от лат. sterilis – бесплодие) – полное уничтожение вегетативных и споровых форм микроорганизмов в каком-либо объекте. Стерилизация – это обязательное условие получения чистых культур микроорганизмов.

Существуют различные методы стерилизации.

1. Фламбирование – прокаливание в пламени горелки. Таким способом стерилизуют бактериологические петли, иглы, шпатели, пипетки, стёкла.

2. Кипячение. Кипячением стерилизуют иглы, шприцы, пинцеты и другие инструменты, резиновые и стеклянные предметы. Для лучшей стерилизации в дистиллированную воду добавляют 2% двууглекислой соды. Кипятят 20–30 мин. После стерилизации воду осторожно сливают. Дистиллированную воду и физиологический раствор стерилизуют кипячением в колбах с ватными пробками на небольшом огне, поставив их на асбестовую подставку.

3. Стерилизация сухим жаром в сушильных шкафах (или печах Пастера). В печи Пастера стерилизуют стеклянную, чистую, предварительно высушенную посуду. Колбы закрывают ватными пробками. Пробки, чашки Петри и пипетки, пробирки, колбы, цилиндры, стаканы, стеклянные трубочки и палочки, шпатели заворачивают определенным образом в бумагу (после стерилизации хранят в бумаге, стерильность сохраняется несколько месяцев). Режим стерилизации – 170 ^оС в течение 1–1,5 часов. Затем сушильный шкаф отключают, дают температуре снизиться до 45 ^оС, открывают шкаф и достают посуду.

 

 

4. Стерилизация текучим паром в аппарате Коха.

Аппарат Коха представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху неплотно закрытый крышкой. На дне аппарата имеется решётчатая подставка на ножках, до уровня которой наливают воду. На подставку помещают металлическое ведёрко также с дном в виде решётки. В это ведёрко ставят стерилизуемые питательные среды в пробирках. Ведёрко закрывают неплотно крышкой. При нагревании образующиеся водяные пары устремляются вверх, проходят через отверстия в подставке, отверстия в дне ведёрка и нагревают пробирки. Стерилизуют в течение 30 мин. При стерилизации паром погибают только вегетативные формы микроорганизмов. Поэтому стерилизацию текучим паром проводят три дня подряд, выдерживая в перерывах стерилизуемый материал при температуре, благоприятной для прорастания спор в вегетативные клетки. После первой стерилизации материал постепенно остывает при комнатной температуре до следующего дня. Если в культурах имелись споры, они прорастают в вегетативную форму. В следующие два дня стерилизацию текучим паром повторяют. Таким способом стерилизуют питательные субстраты, не выдерживающие температуры выше 100 ^оС.

5.   Тиндализация - методбыл предложен учёным Тиндалем для стерилизации материалов, денатурирующихся при нагревании выше 58–60 ^оС (коллоидные растворы, сыворотки крови и другие белоксодержащие вещества). Тиндализация – стерилизация в водяной бане, например, при температуре 56–58 ^оС в течение 6–7 дней (при 70–80 ^оС – 3 дня, при 60–65 ^оС – 5 дней). В первый день материал прогревают в течение 2 ч; в последующие дни – по 1 ч. В промежутках между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при комнатной температуре.

6. Автоклавирование – стерилизация паром под давлением в автоклаве. Режим стерилизации – 3–4 атмосферы в течение 20 мин. В автоклаве стерилизуют питательные среды, выдерживающие нагревание выше 100 ^оС, стеклянную посуду, отработанный материал и др. Режим выбирают в зависимости от объекта обработки. При стерилизации паром под давлением погибают как вегетативные клетки, так и споры.

7. Пастеризация – уничтожение вегетативных форм микроорганизмов под действием повышенной температуры. Метод был предложен Л. Пастером для сохранения питательной ценности пищевых продуктов, которая снижается при высоких температурах. Режим пастеризации – до 80 °С в течение 30 мин, при 90 °С – 15 мин и меньше, затем резкое охлаждение до 4–8 °С. Резкое охлаждение препятствует прорастанию спор.

8. Фильтрование. Стерилизация фильтрованием осуществляется пропусканием материала через бактериологические фильтры. В результате фильтрации происходит пропускание или задержка фильтром мельчайших частиц (бактерий) в зависимости от величины пор фильтрующей пластинки. В данном процессе имеет также значение адсорбционная способность материала, из которого сделан фильтр. Обычно фильтруют жидкости, не выдерживающие нагревания (сыворотки, растворы антибиотиков и т.д.). Фильтры бывают твердые – керамические (цилиндрической формы в виде «свечей»), асбестовые (в виде пластинок) и мембранные (с наиболее точной калибровкой пор).

Керамические фильтры (фильтры Шамберлана, Беркефельда, отечественного производства) изготовляют из каолина, кварцевого песка. Более широко используют фильтры Зейтца – плотные пластины, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой. Отечественные асбестовые фильтры обозначаются марками Ф и СФ. Стерилизующими являются фильтры марки СФ.

Мембранные ультрафильтры (коллодийные мембраны) имеют вид тончайших листков белой бумаги. Готовят их из гемицеллюлозы, обработанной соответствующими реактивами, температурой и прессованием. Эти фильтры различают по диаметру и величине пор.

Стерильность полученных фильтратов проверяют посевом на питательные среды с последующим выдерживанием в термостате несколько дней.

9. Химическая стерилизация используется для сохранения вакцин, сывороток, в которые добавляют фенол в количестве 0,25–0,5%, хлороформ – 0,5%, формалин – 0,05% и др. Питательные среды консервируют хлороформом, толуолом, эфиром. Для освобождения от консерванта среду нагревают до 56 ^оС. Для дезинфекции используют 1–3% раствор хлорамина, 3–5% раствор фенола, 70% этиловый спирт.

Вопросы для самопроверки

1. Что такое стерилизация, дезинфекция?

2. Цель стерилизации.

3. Требования к стерилизации.

4. Методы стерилизации. Классификация.

5. Физическая стерилизация. Её классификация.

6. Что такое химическая стерилизация?

7. Суть и особенности холодных и горячих методов стерилизации.

8. Суть методов дробной стерилизации.

9. В каком случае применяют пастеризацию, кипячение, фламбирование?

10. Стерилизация сухим жаром, её режим. Для каких объектов она используется?

11. Стерилизация паром под давлением (её название, режим, особенности, кто предложил данный метод).

12. Особенности стерилизации текучим паром.

13. Дробная стерилизация (её суть).

14. Разновидности дробной стерилизации, их суть?

15. Имя учёного, предложившего один из видов дробной стерилизации, цель данного вида стерилизации.

16. Неполная стерилизация (название). В каком случае её применяют? Имя учёного, предложившего данный вид стерилизации.

17. Стерилизация фильтрованием (её суть). В каких случаях её используют?