Раздел 3. Питательные среды и методы стерилизации

Цель работы: ознакомиться с составом питательных сред и требованиями к ним.

Питательные среды должны удовлетворять следующим требованиям:

1. Питательная среда должна содержать все необходимые элементы питания – витамины, различные факторы роста.

2. Питательная среда должна иметь определенную реакцию среды (рН) – нейтральную или слабощелочную.

3. Питательная среда должна быть прозрачной.

4. Питательная среда должна быть стерильной.

5. Питательная среда должна быть достаточно влажной.

По составу питательные среды бывают: естественные, искусственные и синтетические.

К естественным питательным средам относятся продукты животного и растительного происхождения (молоко, мясной бульон, фрукты, овощи и т.д.).

Искусственные питательные среды готовят, добавляя к естественным настоям и отварам растительного или животного происхождения неорганические соли, углеводы и азотистые вещества.

Синтетические питательные среды состоят из химически чистых соединений в определённом соотношении с точно известным составом и количеством.

Применяют питательные среды различной консистенции: жидкие, плотные, полужидкие, сыпучие (пропаренное пшено, отруби, пропитанные питательным раствором, используются в промышленной микробиологии).

Для уплотнения питательных сред используют агар-агар и желатину.

Агар-агар – полисахарид, получаемый из водорослей.

Желатина – азотсодержащее органическое соединение, получаемое при выварке костей и хрящей животных.

К искусственным жидким питательным средам относится мясо-пептонный бульон (МПБ).

Мясо-пептонный агар – искусственная твёрдая питательная среда, мясо-пептонная желатина – искусственная полутвёрдая.

По назначению питательные среды делятся на обычные, специальные, элективные и дифференциально-диагностические, селекционные.

Обычные среды применяются для выращивания большинства микроорганизмов. К ним относятся бобово-пептонный (БПБ) и мясо-пептонный бульоны (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонная желатина (МПЖ), питательный агар сухой (ПАС).

Специальные среды применяются для выделения и культивирования определенных групп микроорганизмов. Например, среда Омелянского применяется для выделения возбудителей анаэробного разложения клетчатки; среда Чапека – для культивирования грибов.

Элективные среды используют для выделения и накопления микробов одного вида. Сопутствующие микроорганизмы или совсем не растут на таких средах, или развитие их задерживается. К таким средам относятся накопительные среды С.Н. Виноградского для изучения почвенных микроорганизмов.

Дифференциально-диагностические среды применяются для изучения биохимических свойств микроорганизмов, среда Эндо – для выделения бактерий кишечной палочки.

Селективные среды используют для селекции микроорганизмов (против какого-либо признака), например, среда с пенициллином для пенициллиноустойчивых бактерий.

 

Задание 1. Познакомиться с техникой приготовления готовых микробиологических сред.

Приготовление питательных сред

Взвешивание среды. Взвешивание среды производить на бумаге, включив и уравновесив электронные весы. Пользоваться стерильными совочками или стерильными пинцетами. При взвешивании не должно быть никакого перемещения!

Фильтрование. Взвесить количество питательной среды по рецептуре (например 3,7 г среды МПА) и отмерить 100 мл дистиллированной воды.

Среду высыпать в стерильный стакан и, приливая воду небольшими порциями, размешать стерильной стеклянной палочкой до получения однородной массы. Довести до кипения, постоянно помешивая, кипятить до полного расплавления агара – 2–3 мин, после чего стерилизовать кипячением в течение 5 мин, а затем горячую среду профильтровать в стерильные пробирки через ватный тампон с марлевой прокладкой (ватно-марлевый фильтр): на стеклянную воронку наложить марлевую салфетку так, чтобы ее края немного заходили за края воронки, поверх марли поместить слой гигроскопической ваты и профильтровать небольшую порцию горячей дистиллированной воды, чтобы фильтр был влажным. После фильтрования стерилизовать среду 20 мин при температуре 121 °С.

Методы разлива и посева. Среду охладить до 45–50 ^оС и разлить в чашки Петри слоем 4–5 мм (всего по 10–15 мл в каждую), а после отвердевания осуществить: посев из воздуха; поверхностный посев – 0,1 мл необходимого разведения распределить методом растирания по поверхности отвердевшей питательной среды; глубинный посев – в чашки предварительно внести по 1 мл болтушки – разведения определённой степени, а затем прилить питательную среду и осторожно перемешать, чтобы среда не оказалась на краях чашки или на внутренней поверхности крышки. Пластинка среды должна быть ровная и гладкая, без повреждённых участков!

Задание 2. Изучить состав и характеристики питательных сред для культивирования микроорганизмов, классифицировать их, ответить на вопросы.

Вопросы для самопроверки

1. Что такое питательная среда?

2. Требования, предъявляемые к питательным средам.

3. Классификация питательных сред.

4. Питательные среды по происхождению и их характеристика.

5. Питательные среды по составу и их характеристика.

6. Питательные среды по назначению и их характеристика.

7. Как проверяют стерильность питательной среды?

8. Для чего предназначены специальные среды?

9. Для чего предназначены дифференциально-диагностические среды?

10. Каково правильное положение чашки Петри с посевом при культивировании микроорганизмов. Какие условия в этом случае соблюдаются?

11. Из чего получают агар-агар, желатину, пептон? Их основные характеристики? Для чего их вводят в питательные среды?

12. МПБ, МПЖ, МПА – что это такое? Основные характеристики.

13. Для каких целей используют простые питательные среды?

14. Для каких целей используют питательные элективные среды?

Задание 4. на основе литературных данных заполните таблицу 1

Таблица 1