Посев на бациллы Леффлера, посев на BL, посев на дифтерийную палочку.

 

БИЛЕТ 10

1. Опишите морфологические признаки бактерий, предложенных препаратов (№ 1,2). Сделайте вывод. Дайте характеристику различным морфологическим группам.

 

2. Определите по предложенному биохимическому тесту семейство, род и вид возбудителя:

Сероводород – (-);

Мочевина – (-);

Лактоза – (-);

Индол – (+);

АгарСиммонса – (-);

Подвижность – (-);

Ацетатеыйагар – (-)

Семейство: Enterobactertaceace, род - Еscherichia, вид - coli

 

3. Из материала слизи, взятого у больного из зева, выросли колонии микробов, расщепляющих тирозин.

 Назвать семейство род, вид.

БИЛЕТ № 11

1. Определите тинкториальные свойства предложенной культуры микроорганизмов (ч. Петри № 4).

Сделайте вывод.

2. Произведите отбор проб методом смыва, посейте на МПА.

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Расскажите методику смыва с рабочего места – стола, халата.

 

В зависимости от целей исследования в смывах определяют:

1) наличие БГКП;

2) ОМЧ;

3) наличие S. Aureus.

 Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, детских, лечебно-профилактических учреждений, предприятий пищевой торговой сети определяют бактериологическую загрязненность рук работающего персонала и предметов окружающей обстановки. Эти исследования необходимы также при выявлении путей распространения инфекционных заболеваний. Метод смывов позволяет определить как присутствие жизнеспособных микроорганизмов на поверхности объекта, так и их количество на 1 см2.

Отбор проб: используют ватный тампон или салфетку 5х5см. кторую захватывают стерильным пинцетом

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: яэвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI. Перечислите факторы способствующие сохранению и колонизации H. Pylori на слизистой желудка.

БИЛЕТ 11

1. Определите тинкториальные свойства предложенной культуры микроорганизмов (ч. Петри № 4).

Сделайте вывод.

 

Тинкториальные свойства - свойства бактерий, грибов и простейших, характеризующие их способность вступать в реакцию с красителями и окрашиваться определенным образом.

Грамположительные бактерии хорошо удерживают комплекс генцианового фиолетового с йодом и устойчивы к обесцвечиванию спиртом. После обработки фуксином они окрашиваются в фиолетово-пурпурный цвет.

Грамотрицательные бактерии обесцвечиваются спиртом, то есть теряют комплекс генциа-нового фиолетового с йодом, и хорошо поглощают фуксин. В мазках они окрашиваются в малиново-красный цвет.

 Кислотоустойчивые бактерии. Клеточная стенка некоторых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Подобные бактерии называют кислотоустойчивыми, их трудно окрашивать по Граму (хотя кислотоустойчивые бактерии рассматривают как грамположительные). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена.

 

2. Произведите отбор проб методом смыва, посейте на МПА.

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Расскажите методику смыва с рабочего места – стола, халата.

Санитарно- показательные микроорганизмами – являются постоянными обитателями поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями что и патогенные микробы. Поэтому чем больше выделено СПМ, тем большая вероятность попадания патогенных микробов в окружающую среду.

 

Методика смыва с рабочего места – стола.

Цель: Исследование смывов с предметов проводится для оценки санитарно-гигиенического состояния предметов.

Смывы со стола: Делают из нескольких мест. Исследованные участки ограничивают рамкой трафарета с площадью 50 на 50 или 100 на 100 см². Трафарет изготавливают из проволки и перед употреблением прижигают под пламенем горелки.

Исследование на БГКП. 1 день: Смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда меняет цвет. При изменении среды материал пересевают на среду Эндо. 2 день: Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и м/с. Выявление S. aureus. Получение смывы засевают на ЖСА в ч Петри и параллельно на 6,5% солевого бульона (среда накопления). На ЖСА можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37ºС в течение 24 ч.  

Определение ОМЧ: 1 день: К 2 мл взятых смывов прибавляют 8 мл NaCl. Получить разведение 1:5. Тампоны тщательно отмывают встряхиванием. 1 мл засевают в ч Петри и заливают 12 мл расплавленного и остуженного до 45ºС агара. Чашки инкубируют в термостате при температуре 37ºС в течение 24 ч. 2 день: посевы вынимают, подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет на 1 см² исследуемой поверхности.

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: яэвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI. Перечислите факторы способствующие сохранению и колонизации H. Pylori на слизистой желудка.

Важным фактором колонизации H. pylori является подвижность, связанная с наличием мощных жгутиков, которые обеспечивают быстрое движение микроорганизма в слое густой слизи вдоль градиента рН и служат одним из факторов его вирулентности, а также способствуют агрегации H. pylori на поверхности эпителия.

Колонизация желудка H. Pylori- он наделен достаточно плотной гладкой клеточной стенкой, кнаружи от которой определяется капсулоподобная оболочка — гликокаликс и способностью к образованию уреазы. Гликокаликс способствует невосприимчивости бактерии к антибиотикотерапии и защищает микроорганизм от иммунного ответа хозяина. В его состав входят углеводсодержащие полимеры (липополисахариды) и белки, необходимые для адгезии H. pylori на поверхности эпителиоцитов, вызывающие развитие воспаления слизистой желудка.

Продукция большого количества фермента уреазы способствует расщеплению мочевины с образованием углекислого газа и аммиака, который нейтрализует соляную кислоту желудочного сока, создавая вокруг бактерии локальную среду с рН 7, наиболее благоприятную для его существования.

Уреаза, вырабатываемая H. pylori, представляет собой никель-содержащий гексадимер и является собственно маркером инфекции. Наличие уреазы представляет собой основу для проведения различных диагностических тестов с целью обнаружения H. Pylori

БИЛЕТ 12

1. Приготовьте 50 мл МПА.

МПА. В готовый МПБ добавляют 3% нарезанного агара, агар расплавляют в текучем паре в аппарате Коха, устанавливают рН 7,6, осветляют яичным белком, фильтруют через бумажный фильтр, стерилизуют 30 мин при 120.

Расскажите этапы приготовления питательных сред и классификацию.

Классификация:

I. По исходным компонентам:

· Натуральные- их готовят из продуктов животного и растительного происхождения (рыбная мука, костная мука, дрожжи, сгустки крови, кусочки мяса, печени).

· Синтетические- их готовят из определенных химических соединений, взятых в точно указанной концентрации и растворяют в 10 л воды. Приемущество: их состав постоянен.

 

II. По консистенции:

· Жидкие бульоны

· Плотные

· Полужидкие

Плотные и полужидкие питательные среды готовят из жидких к которым добавляют агар- агар (полисахарид, получаем из определенных сортов морских водорослей, служит для уплотнения среды, плавится при 80- 100 градусах, застывает при 45), желатин (белок животного происхождения, плавится при 30 градусах, является питательным веществом).

III. По составу:

· Простые (МПБ, МПА, питат желатин, пептонная вода)

· Сложные (готовят путем прибавления к простым средам кровь, сыворотку, углеводы).

IV. По назначению:

· Основные- служат для выращивания большинства микроорганизмов- мпа, мпб.

· Специальные- для выявления микроорганизмов, не растущих на простых средах- сахарный бульон, среды с кровью.

· Элективные- избирательные, для выделения определенного вида микроорганизмов, задерживая или подавляя рост других микроорганизмов. В среды добавляют аб, соли или изменяют ph.

· Дифференциально- диагностические: позволяют отличить один вид микроорганизмов от др по ферментат активности (среды Гисса).

· Консервирующие- для первичного посева и транспортировки иссл матер (глицериновая смесь).

Этапы приготовления.

1) варка. На открытом огне, на водяной бане, в автоклавах или варочных котлах.

2) Установление ph. С помощью индикаторной бумаги.

3) Осветление. С помощью куриного яйца, среду подогревают до 50 град, вливают белок яйца, который предварительно взбит с двойным количеством воды. Перемешивают и кипятят. Свертываясь белок увлекает за собой взвешенные частицы.

4) Фильтрация. Если среда жидкая то через бумажный фильтр, если агаровая- отстаиванием.

5) Разлив. В пробирки, колбы, не более чем на 2/3 объема. Закрывают ватно- марлиевыми пробками и прикрепляют этикетки с датой приготовления и названием.

6) Стерилизация.

7) Контроль. Контроль стерильности: среды ставят в термостат на 2 суток после чего просматривают не появилось ли роста. Хим контроль: проверяют ph и количество основных ингридиентов. Биологический контроль: среды засевают спец подобранными микроорг и по их росту судят о питат свойствах среды.  

Приготовление обычных питательных сред. МПБ. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% химическо чистого NaCl, кипятят на слабом огне 10-15 мин, для растворения веществ. Устанавливают рН среды 7,6—7,8, и снова кипятят 30-40 мин до выпадения осадка. Фильтруют через бумажный фильтр, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют при 120 С в течение 20 мин.

2. Произведите посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектор и с плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой. Покажите способ приготовления микробной взвеси.

 

Произвести посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектора.

Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру. Необходимо следить, чтобы штрихи не заходили на соседние сектора.

Посев плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой.

Чашку с посевным материалом ставят перед собой крышкой вверх, левой рукой приоткрывают крышку и вводят под неё обожженную петлю. Остудив петлю, набирают посевной материал с отмеченного участка. Вынимают петлю, закрывают крышку и в левую руку берут пробирку со средой, снимают крышку, обжигают кроя пробирки над спиртовкой, погружают петлю с материалом в среду, и 3-5 сек ополаскивают в ней. Методика приготовления микробной взвеси.

Микробную взвесь готовят путем суспендирования в физиологическом растворе изолированных колоний из 24-часовой культуры, выращенной на неселективных средах до определённой концентрации по Мак-Фарланду.

 

3. При заборе материала у ребенка 6 лет, медсестра, вынимая ватный тампон из зева, задела небные миндалины и корень языка.

 Расскажите правила забора материала при коклюше ватным тампоном и перечислить методы диагностики.

Для взятия материала пользуются двумя тампонами. Один сухой, второй смоченный питательной средой КУА. Перед взятием материала томпон вынимают из пробирки, сгибают его под углом 120º. Ребёнку предлагают открыть рот, стерильным шпателем надавливают на корень языка и вводят тампоном в полость рта до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки. При этом у ребёнка появляется кашлевой рефлекс, который сопровождается выделением слизи. Затем помпон осторожно вынимают и делают посев на поверхность среды КУА в чашки Петри: сначала несколько штрихов на одном месте, а затем растирают по всей поверхности среды. Засеянные чашки ставят в термостат. Второй тампон дважды смачивают средой КУА (KH2PO4 и Na2NPO4, агар и активированный уголь). Эту смесь разливают во флаконы, перед смачиванием её растапливают на водяной бане. Материал собирают так же, как и сухим тампоном, но после взятия материала тампон помещают обратно в пробирку и доставляют в лабораторию, где производят посев.

 

БИЛЕТ 13

1. Приготовьте, окрасьте и промикроскопируйте препарат (ч. Петри № 2), сделайте вывод.

Расскажите методику окраски по Граму. Назовите цель и используемые красители, этапы окраски. 

 

1. приготовить фиксированный мазок;

2. на мазок налить Генциан-Виолет на 1-2 мин;

3. слить окраску, препарат не промывать водой;

4. налить р-р Люголя на 1 мин;

5. слить окраску, препарат не промывать водой;

6. нанести на препарат спирт на 0,5-1 мин;

7. препарат промыть водой;

8. окрасить препарат разведенным фуксином на 1-2 мин;

9. промыть водой, просушить, м/с с иммерсией;

Результат: Гр(-) красные бактерии, Гр(+) синие бактерии.

Цель: структура бактериальной клетки.

 

2. Выберите из выросших на трехсахарном агаре культуры, характерные для ЭПКП. Назовите признаки являющиеся дифференциально-диагностическими. Ответ поясните.

 

Материал из изолированных колоний засевают по поверхности скошенной части и путем прокалывания столбика среды. Посевы инкубируют при температуре 37 С в пробирках с неплотно закрытыми пробками 24 часа.

ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ В случае ферментации только глюкозы скошенная часть среды становится красной (щелочной), среда в столбике – желтой (кислой).

Желтый цвет скошенного агара и столбика означает, что тестируемый организм ферментирует все три сахара.

Красный цвет скоса и столбика указывает на то, что микроорганизм не является ферментером.

В случае образования сероводорода: наблюдается почернение в столбике среды.

На образование газа указывает появление пузырьков или трещин в среде.

Для итоговой идентификации проведите биохимические или другие тесты с чистой культурой организма.  

После проверки рН, цвета, глубины, и стерильности, следующие организмы используют для определения качества приготовленной среды. Инокубировать свежими культурами и выдерживать при 35 ± 2 ºС 18 – 24 часа.

 

3. При проведении микробиологического исследования на брюшной тиф на ч. Петри со средой Эндо после посева испражнений выросли колонии красного цвета с металлическим блеском.

 Перечислить необходимые исследования для подтверждения данного возбудителя.

 

Если бы был выявлен возбудитель брюшного тифа (Salmonella typhy), то на ЭНДО выросли бы бесцветные колонии.

Методы: исследовать сахаролитические свойства, определение антигенной структуры (Vi-антиген).

 

БИЛЕТ 14

1. Приготовьте и промикроскопируйте препарат (с ч. Петри №1),используя простой метод окраски, сделайте вывод.

Расскажите этапы окраски, используемые красители и цель, методику приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

 

При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную — фуксин, или синюю — метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1—2 мин.), метиленовый синий — медленнее (3—5 мин.).

Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней.

 Наибольшее практическое значение имеет окраска по Граму и окраска по Цилю- Нильсону.

 Метод окраски по Цилю является основным для окраски кислотоустойчивых бактерий. Здесь применяются два красителя: карболовый фуксин Циля и метиленовый синий. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, все некислотоустойчивые формы — в синий.

Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов: 1) приготовление мазка; 2) высушивание мазка; 3) фиксацию мазка; 4) окраску; 5) высушивание.

 Мазок готовят на чистых предметных стеклах, на середину которых наносят небольшую каплю воды и в нее с помощью бактериологической петли помещают исследуемый материал. Материал распределяют на стекле равномерным тонким слоем, размер мазка —1—2 см2.

 Препарат обычно высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.

 Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный — фиксация жаром — нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта и эфира — по Никифорову). После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2—5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой.

 

методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

-подготовить предметное стекло,

-нанести петлей каплю физ раствора

-петлю обжечь и остудить

-в пробирке или чашке осторожно снять петлей культуру микроорганизмов

-перенести культуру микроорганизма в каплю изотонич раств на стекле

-петлю обжечь

-зафиксировать мазок

 

2. Выберите культуры, выросшие на двухсахарном агаре, характерные для шигелл. Охарактеризуйте их биохимические свойства.

 

 

1.        обжечь петлю;

2.        подозрительные колонии(полупрозрачные) пересевают на среду Рассела, манит. Посев производится штрихами по скошенной поверхности и уколом в агаровый столбик;

3.        параллельно делают посев на селинитовый бульон;

4.        колонии не расщеп лактозу красят по Грамму;

5.        пестрый ряд с инд бумажкой и на лакмусовое молоко;

6.        серодиагностика;

Биохимические свойства: расщепляют углеводы без образования газа, рамнозу, ксилозу; не расщепляют лактазу, сахаразу; молоко свертывается, желатин не разжижает.

 

3. В пробирку №1 с МПБ внесена культура микробов и фаг, в №2 внесена культура микробов. Через 24 часа инкубации в термостате, в пробирке №1 и №2 прозрачное содержимое. Оцените данные исследования.

Учет результатов проводят только при наличии роста микробов в контроле (№2) – помутнение среды. Отсутствие видимого роста или последующее просветление среды в пробирке с исследуемым материалом свидетельствует о присутствии фага.

 

БИЛЕТ 15

 

1. Приготовьте, окрасьте препарат (из пробирки №2) используя метод Бурри-Гинса, промикроскопируйте, сделайте вывод. 

Назовите цели, этапы окраски и используемые красители.

 

Целью является выделение капсул микроорганизмов

 На середину предметного стекла наносят каплю черной туши и рядом каплю физ р, в которую внесены исследуемые микроорганизмы. Взвесь микробов тщательно смешивают с тушью. Краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

Окрашивают 1-2 мин водным фуксином.

Осторожно промывают водой, высушивают. Микроскопируют с иммерсией.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, окружены светлой зоной- капсулой. Черный фон.

 

2. Произведите отбор смывов с поверхности стола. Расскажите о цели и последовательности проводимого исследования. 

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам.

Санитарно- показательные микроорганизмами – являются постоянными обитателями поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями что и патогенные микробы. Поэтому чем больше выделено СПМ, тем большая вероятность попадания патогенных микробов в окружающую среду.

 

Методика смыва с рабочего места – стола.

Цель: Исследование смывов с предметов проводится для оценки санитарно-гигиенического состояния предметов.

Смывы со стола: Делают из нескольких мест. Исследованные участки ограничивают рамкой трафарета с площадью 50 на 50 или 100 на 100 см². Трафарет изготавливают из проволки и перед употреблением прижигают под пламенем горелки.

Исследование на БГКП. 1 день: Смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда меняет цвет. При изменении среды материал пересевают на среду Эндо. 2 день: Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и м/с. Выявление S. aureus. Получение смывы засевают на ЖСА в ч Петри и параллельно на 6,5% солевого бульона (среда накопления). На ЖСА можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37ºС в течение 24 ч.  

Определение ОМЧ: 1 день: К 2 мл взятых смывов прибавляют 8 мл NaCl. Получить разведение 1:5. Тампоны тщательно отмывают встряхиванием. 1 мл засевают в ч Петри и заливают 12 мл расплавленного и остуженного до 45ºС агара. Чашки инкубируют в термостате при температуре 37ºС в течение 24 ч. 2 день: посевы вынимают, подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет на 1 см² исследуемой поверхности.

 

3. При микроскопии мазка обнаружены микробы, имеющие вид тонкой извитой нити, размером 15х0,5-0,5мм, состоящий из 8-14 равномерных витков спирали, расположенных близко друг к другу.

Назвать микроорганизмы, имеющие такую форму, используемый метод окраски. Назвать заболевание, вызываемое этим видом микроорганизмов.