Трепонемы. Возбудитель сифилиса.

Для окраски используют метод Романовского — Гимзы (спирохеты окрашиваются в бледно-розовый цвет), негативное окрашивание раствором туши (спирохеты остаются неокрашенными и видны на темном фоне). Для выявления спирохет в инфицированных тканях используют метод импрегнации серебром (метод Левадити), при котором трепонемы, окрашенные в черный цвет, видны на фоне желтых клеток ткани.

Она тоньше других трепонем, способна сгибаться под углом и совершать характерные маятникообразные движения. Культивируется возбудитель сифилиса с трудом, в анаэробных условиях. Для выращивания используют среды, содержащие кроличью или лошадиную сыворотку (среды Уленгута и Терских). При этом культуральные (полученные на питательных средах) штаммы спирохет теряют вирулентность и изменяют антигенную структуру. Трепонемы содержат эндотоксин, имеют сложное антигенное строение.

Устойчивость. Бледная спирохета вне тканей больного быстро погибает, неустойчива при высушивании, действии обычных дезинфицирующих веществ и высокой температуры; даже при 40°С погибает через 2 ч. К низким температурам более устойчива: выдерживает замораживание до года.

Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки и кожа, имеющие самые незначительные повреждения. Инкубационный период продолжается в среднем 3—4 нед, после чего наступает первичный период сифилиса: на месте внедрения возбудителя появляется небольшая эрозия, приподнятая над кожей, с ровными краями, гладким блестящим дном, розового или красного цвета, часто безболезненная, с плотным инфильтратом у основания, из-за которого она и получила название «твердый шанкр». Возникают недомогание, головная боль. Лимфатические узлы увеличиваются, становятся плотными без видимых признаков воспаления. Они, как правило, не спаяны с окружающими тканями. Через 20—30 дней твердый шанкр заживает.

Спирохеты из лимфатических узлов проникают в кровь, размножаются и заносятся в органы и ткани и могут вызвать их поражения. Через 6—7 нед от начала заболевания развивается вторичный период сифилиса, характеризующийся генерализацией процесса и появлением обильных и разнообразных высыпаний на коже и

слизистых оболочках (сифилиды) розовых или красных тонов, Сифилиды могут возникать в виде розеол, папул, везикул, пустул. Если лечение не проводится, то через 2— 3 года наступает третий период сифилиса — гуммозный. Возникает бугорковый сифилид, или глубокий узловой сифилид (подкожная гумма). На коже и слизистых оболочках появляются плотные шаровидные бугорки. Они могут существовать неопределенно долгое время, а затем рассасываются или изъязвляются с последующим образованием рубца. При образовании сифилитической гуммы в подкожной жировой клетчатке появляется узел, который увеличивается, спаивается с окружающей клетчаткой и с кожей. Над центральной частью гуммы кожа истончается и она вскрывается. Гумма превращается в гуммозную язву с неприятным запахом: дно ее покрыто некротическим распадом. В течение нескольких месяцев язва заживает и на ее месте остается втянутый звездчатый рубец. В последнем, четвертом, парасифилитическом периоде, который может наступить через 10—20 лет после начала заболевания, наблюдаются специфические поражения центральной нервной системы в форме прогрессивного паралича или спинной сухотки.

                      

 

БИЛЕТ 16

1. Приготовьте, окрасьте и промикроскопируйте препарат по Цилю-Нильсену (с ч.Петри №3), сделайте вывод. 

Расскажите методику окраски ее цель, используемые красители и этапы окраски.

 

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.

Методика окраски:

1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат в течение 5 мин подогревают в пламени горелки до появления паров.

2. Препарат остужают, промывают водой.

3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты на 5 сек. Промывают водой.

5. Докрашивают мителеновой синью на 1- 2 мин.

6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета.

Не устойчивые- в синий.

2. Произведите смывы, посев с рук и с медицинского халата. Расскажите цель, последовательность и используемые материалы необходимые для проведения методики. 

Дайте характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Смотреть билет 15

 

3. В микробиологическую лабораторию поступил исследуемый материал – мокрота от двух больных. Мокрота одного больного – кровянисто - тягучая, при микроскопии из нее нельзя было сделать вывод о характере возбудителя. Мокрота от другого больного гнойная, кровянистая. Опишите микроскопическую картину, по которой можно определить возбудителя пневмонии.

Возбудителем пневмонии является пневмококк. Пневмококки – это диплококки, имеют ланцетовидную форму (свечи), размер – 0,75-0,5*0,5-1 мкм. Часто образуют короткие цепочки. Не подвижны, не имеют спор, образуют капсулу. Грамположительны.

БИЛЕТ 17

1.Произведите посевы: петлей на скошенный агар, шпателем на ч.Петри.

 Объясните особенности культивирования спирохет, риккетсий, вирусов.

При посеве на скошенный агар материал растирают по поверхности среды зигзагообразными движениями сверху вниз начиная от границы конденсата.

Шпателем: левой рукой слегка приоткрыв крышку, держа её большим и указательным пальцем. Петлей, пипеткой или стекл палочкой вносят посевной материал. Тщательно втирают его круговыми движениями шпателя. Левой рукой при этом одновременно вращают чашку.

Спирохеты всех видов выращивают на искусственных питательных средах. Основой питательной среды является сыворотка крови кролика или лошади, как цельная, так и разведенная изотоническим раствором хлорида натрия в различных соотношениях. Иногда к сыворотке добавляют кусочки свернутого белка куриного яйца, почки или печени кролика, печени крупного рогатого скота, свежую цитратную кровь. Выращивание производят под слоем жидкого парафина или вазелина при рН среды 7,8—8,4. Оптимальная температура выращивания для трепонем 35°С, для лептоспир и боррелий 28—29°С.

Риккетсии культивируются в желточных мешках куриных эмбрионов, перевиваемых культурах клеток, легких белых мышей.

Для культивирования вирусов в лабораторных условиях используются следующие живые объекты:

1) культуры клеток (тканей, органов);

2) куриные эмбрионы;

3) лабораторные животные.

 

2.Произведите учет результатов реакции агглютинации объемным способом.

Расскажите методику постановки реакция агглютинации и ее использование.

Реакция агглютинации основана на специфическом взаимодействии антител (агглютининов) с целыми микробными или другими клетками. В результате такого взаимодействия образуются частицы-агломераты, выпадающие в осадок (агглютинат). В реакции агглютинации могут участвовать бактерии, простейшие, грибы, дрожжи, риккетсии, эритроциты и другие клетки, как живые, так и убитые. Протекает реакция в две фазы: первая — специфическое соединение антигена и антитела, вторая — кеспецифическая, т. е. образование видимого агглютината. Выпадение агглютината происходит в присутствии электролитов, например хлорида натрия. Находящиеся в агглютинате микроорганизмы остаются живыми, но теряют подвижность.

Реакцию агглютинации широко применяют для серо-логической диагностики инфекционных заболеваний и определения антигенной структуры выделенных микробов.

Учет начинают с контролей: контроль с-ки должен быть прозрачным, Аг - равномерно мутным (после встряхивания пробирки). Если контроли хорошие, устанавливают наличие и степень агглютинации во всех опытных пробирках, к-рую обозначают плюсами: большой осадок и полное просветление жидкости - 4 плюса; большой осадок и неполное просветление жидкости -3 плюса; заметный осадок и заметное просветление жидкости- 2 плюса. После этого определяют титр: наибольшее разведение с агглютинацией интенсивностью не менее 2 плюсов. Титр иссл. с-ки сравнивают с диагностическим титром для этого заболевания. Если титр иссл. с-ки в 2 раза ниже диагностического, реакцию оценивают как сомнительную; если титр равен диагностическому -как слабоположительную; если в 2-4 раза выше его- как положительную, если в 8 и более раз выше - как резко положительную

3. При семейной вспышке брюшного тифа мать была госпитализирована на 10-ый день заболевания, отец на 20-ый день, ребенок на 3-й день болезни.

Назвать методы исследования, материал необходимый для исследования каждого члена семьи, применяемые для бактериологического подтверждения брюшного тифа.

 

Лабораторная диагностика прежде всего заключается в бактериологическом исследовании крови, кала, мочи, желчи. Метод гемокультуры можно использовать с первых дней заболевания и до конца лихорадочного периода, желательно до начала лечения. Для этого 5-10 мл крови из локтевой вены у постели больного засевают на 20 % желчный бульон или среду Рапопорта, мясопептонный бульон с 1 % глюкозы, либо даже в стерильную дистиллированную воду. Объем среды — 50-100 мл. Соотношение материала и среды должно быть 1:10. Кал, мочу, дуоденальное содержимое исследуют со 2-й недели от начала заболевания, засевая на среды Плоскирева, Левина, Мюллера и др. Предварительный результат этих исследований получают через 2 дня, окончательный — через 4 дня.

Для выявления брюшной тифозной палочки в фекалиях, моче, дуоденальном содержимом используют РИФ с меченными сыворотками к О- и Vi-антигенам. Предварительный ответ может быть получен в течение 1 ч, окончательный — через 5-20 ч.

Из серологических методов используют РА (Видаля) и РПГА с цистеином. Реакцию Видаля ставят с Н- и О-антигенами с 7-9-го дня заболевания повторяют на 3-4-й неделе для определения нарастания титра (от 1:200 до 1:400-1:800-1:1600). Последнее имеет значение для исключения положительного результата реакции, который может быть обусловлен предшествовавшей иммунизации против брюшного тифа. Ответ может быть получен через 18-20 ч. При постановке РПГА учет результатов проводят после инкубирования пластин при 37° С в течение 1,5-2 ч и повторно — через 24 ч нахождения при комнатной температуре. Положительный считается реакция в титре 1:40 и выше.

 

БИЛЕТ 18

1.Проведите выделение чистой культуры по Дригальскому.

Дайте понятие «чистой культуре», штамму, сероварианту, фаговарианту, хемовариант и биоварианту.  

Чистая культура — совокупность микроорганизмов одного вида, имеющие одинаковые морфологические, биохимические и культуральные свойства.

Штамм — чистая культура вирусов, бактерий, других микроорганизмов или культура клеток, изолированная в определённое время и в определённом месте.

Серовариант — группа микроорганизмов одного вида, объединяемые общей антигенной структурой, определяемой серологическими методами диагностики.

Фаговариант — вариант определенного вида (подвида) бактерий, отличающийся отдругих вариантов этого же вида по спектру чувствительности к типовым фагам.

Хемовариант — инфраподвидовая систематическая категория для обозначенияштамма или группы штаммов бактерий, представители которой отличаются от типового штамма повышенным образованием какого-либо специфического химического вещества.

Биовариант - внутривидовая систематическая категория, вариант, отличающийся от др. вариантов этого вида какими-либо существенными биол. св-вами.

Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.

I этап.

1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).

2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.

3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.

II этап.

1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии.

2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).

3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.

4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.

Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:

- ферментативным свойствам.

- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам

 

2. Произведите отбор проб из распределительной сети системы городского водопровода и расскажите методику.

Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы.

 

В ТЕТРАДКЕ!

 

3. В микробиологическую лабораторию поступил исследуемый материал – мокрота кровянисто – тягучая.

 Предположите по макроскопической картине в данном случае характер возбудителя. Обоснуйте ответ.

Назовите материал необходимый для диагностики, у больных с патологией дыхательной системы при скудном выделении мокроты

 

            БИЛЕТ 19

1. Приготовьте и промикроскопируйте препарат «висячая капля» (из пробирки №4), сделайте вывод. 

Расскажите методику приготовления препарата, ее цель.

1.Для изучения формы и выявления подвижности бактерии изучают в живом состоянии в препаратах раздавленной капли.

на предметное стекло наносят каплю бульонной культуры. При обильном росте микробов культуру предварительно разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и опускают, постепенно вытесняя воздух, находящийся между предметным и покровным стеклами, чтобы избежать образования в ней пузырьков воздуха. В правильно приготовленном препарате раздавленной капли стекла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.

2.на середины обезжиренного покровного стекла наносят небольшую, с четкими краями каплю бульонной культуры. Каплю материала покрывают предметным стеклом с лункой, края которой предварительно смазываютвазелином. Предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом перевертывают. Капля оказывается висячей в герметически закрытой влажной камере, из которой жидкость испаряется очень медленно и поэтому препарат долгое время остается пригодным для наблюдения.

висячую каплю микроскапируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой. При малом увеличении находят край капли, отчетливо видный в затемненном поле зрения. По одну сторону линии видно множество мельчайших капелек конденсата, осевших на внутренней поверхности покровного стекла, по другую сторону линии фон равномерно серого цвета- искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении и, не сдвигая препарата, переходят на более сильную(40Х) или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа.

подвижные бактерии проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения микроскопа, вращаясь вокруг своей оси.

2. Укажите колонии с ростом, характерным для Е.со li и ЭПКП. Их отличительные биохимические свойства.

Е.соli- короткие палочки, в среднем 0,5-3*0,5-0,8 мкм. Грамотрицательные. В большенстве случаев подвижные, перетрихи. Некоторые варианты не подвижны. Многие штаммы образуют капсулу, спор не образуют.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, растут при температуре 370С и pH 7,2-7,8. Хорошо растёт на простых питательных средах. На МПА образует мутноватые, слегка выпуклые влажные колонии с ровным краем. На МПБ даёт равномерное помутнение. Для идентификации Е.соli используют дифференциально-диагностические среды: Эндо и агар с эозинметиленовым синим (ЭМС). На Эндо растёт в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском. На ЭМС – в виде тёмно-фиолетовых колоний.

ЭПКП – энтеропатогенная E.coli – вызывают энтероколиты у детей 1-го года жизни, передается в основном контактно-бытовым путем.

Клинически – поражается эпителий тонкого кишечника.

Патогенность связана с белками наружной мембраны, синтезом термолабильного и термостабильного энтеротоксина. Биохимические свойства энтеробактерий. Кишечная палочка обладает наиболее высокой ферментативной активностью

- Ферментируют углеводы до кислоты или кислоты и газа («Пестрый ряд»-среды Гисса)

- протеолитически мало активны.

-Она утилизирует ацетат в качестве единственного источника углерода, восстанавливает нитраты в нитриты.. -Большинство штаммов ферментирует лактозу с образованием кислоты и газа. Однако встречаются варианты, медленно сбраживающие лактозу или вовсе не обладающие этой способностью.

3. В лабораторию поступил материал (отделяемое раны) от больного с подозрением на газовую анаэробную инфекцию.

Назвать методы посева для выделения чистой культуры анаэробов.

Укажите питательные среды, применяемые для культивирования анаэробов.

 

Обычно для выделения чистых культур анаэробов используются методы Цейсслера или Вейнберга, реже метод Фортнера и метод Перетца.

Дифференциально — диагностические питательные среды

1.Среды Гисса («пестрый ряд»)

2.Среда Ресселя (Рассела)

3.Среда Эндо

4.Среда Плоскирева или бактоагар «Ж»

5.Висмут-сульфитный агар

Общие питательные среды для анаэробных организмов

1.среда Вильсона — Блера

2. Среда Китта — Тароцци

 

 

БИЛЕТ 20

1. Приготовьте и промикроскопируйте препарат «раздавленная капля» (из пробирки №5), сделайте вывод. 

Расскажите методику приготовления препарата, ее цель.

 

 Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.

Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тканей на предметное стекло наносят каплю суспензии клеток в культуральной жидкости. Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100—1:1000 и т. д.); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах.

 

2. Произведите отбор проб - смывы с рук.

Поясните последовательность взятия проб методом смывов с рук (используемый материал).

Изучение бактериальной загрязненности рук и различных предметов инвентаря производится в целях:

•         Оценки нитарно-гигиенического состояния исследуемого объекта

•         Установление путей распространения инфекции при эпидемиологических обследованиях

•         Лабораторного контроля эффективности обработки кожи рук(главным образом хирургов)

В зависимости от цели проводимого исследования и характера контролируемых объектов в полученных смывах определяют:

•         Общую микробную обсемененность обычно с пересчетом на 1 см2 исследуемой поверхности

•         Наличие бактерий группы кишечной палочки как показатель фекального загрязнения, свидетельствующих о нарушении санитарного режима

•         Наличие патогенных бактерий кишечной группы, обнаружение которых является безусловным показателем эпидемического неблагополучия

•         Наличие стафилококков и других микроорганизмов

Для получения смывов пользуются стерильными ватными тампонами или марлевыми салфетками. В день взятия смыва в каждую пробирку с тампоном наливают по 2 мл стерильной воды или изотонического раствора хлорида натрия так, чтобы ватный тампон находился над уровнем жидкости. Марлевые салфетки размером 5х5 см завертывают по одной в бумажные пакеты. К каждой салфетке готовят заранее пробирку с 2 мл стерильной воды для смачивания. Непосредственно перед взятием смыва пробирку наклоняют, увлажняя находящийся в ней тампон. В случае применения салфеток их захватывают кончиком стерильного пинцета, прокаленного над пламенем горелки, и увлажняют стерильной водой из пробирки.

Увлажненный водой тампон или салфетку дают в руки обследуемому, предлагая протереть им сначала кожу левой, а затем правой руки в такой последовательности(от участков с меньшей к участкам с большей загрязненностью): тыл, кисти, ладонную поверхность, межпальцевые пространств, ногтевые ложа. По окончании процедуры салфетки или тампоны помещают в пробирку, в которой они находились.

3.Группа студентов отправляется в район эндемичный по клещевому энцефалиту. Перечислить необходимые профилактические мероприятия для студентов. Рассказать патогенез этого заболевания.

Необходимые профилактические мероприятия:

1.        Перед поездкой в район, эпидемичный по клещевому энцефалиту, необходимо поставить прививку.

2.        Применять репелленты

3.        Следует надевать одежду с длинными рукавами и штанинами, штанины желательно заправлять в длинные носки. Волосы следует прятать под головной убор. Чтобы клещей было легче заметить, предпочтительно надевать светлую одежду.

4.        Во время пребывания в лесу рекомендуется регулярно осматривать одежду.

5.        По возвращении из леса производится осмотр одежды и тела. Поскольку некоторые участки тела недоступны самоосмотру, следует прибегнуть к помощи друзей или близких для осмотра спины и волосистой части головы.

6.        Поскольку личиночные формы клещей очень мелки, их можно не заметить на одежде. Во избежание их присасывания одежду рекомендуется простирать в горячей воде.

7.        При обнаружении присосавшегося клеща, его следует немедленно удалить. Чем раньше клещ удален, тем меньше вероятность заражения. Удалять клеща можно маникюрным пинцетом или нитью, обвязав ее вокруг головы паразита. Клещ удаляется раскачивающе-выкручивающими движениями. Избегайте раздавливания клеща! Ранку можно обработать любым дезинфицирующим раствором (хлоргексидин, раствор йода, спирт, и т. п.).

 

БИЛЕТ 21