Полужидкие питательные среды

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких к которым добавляют агар-агар, желатин.

По составу:

Простые – к ним относят мясопептонный бульон, мясопептонный агар, питательный желатин, пептонная вода.

Сложные – их готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы, и др.

По назначению:

Основные – это среды, которые служат для культивирования большинства микробов (МПА, МПБ).

Специальные – они служат для выделения и выращивания м/о не растущих на простых средах (добавляют сахар, бульон, среды с кровью).

Элективные среды – служат для выделения определённого вида м/о, задерживая или подавляя рост других м/о. Среды становятся элективными если к ним добавляют определённые антибиотики, соли, или изменяют pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.

Дифференциально-диагностические – они позволяют отличать 1 вид микробов от другого по ферментативной активности. (Пример ряд Гисса).

Консервирующие среды – они предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала. (Пример глицериновая смесь, предотвращает отмирание патогенных микробов и развитие сапрофитов.)

2. Оцените предложенный биохимический ряд для определения видовой принадлежности семейства энтеробактерий.

Эшерихия коли: расщепляет глюкозу, лактозу, манит, мальтозу, сахарозу и другие углеводы и спирты с образованием кислоты и газа. Протеолитические свойства: Образуют индол, желатин не расщепляют, створаживают молоко.

Сальмонеллы: расщепляют глюкозу, манит, мальтозу с образованием кислоты и газа (возбудители брюшного тифа расщепляют их только до кислоты). Не ферментируют лактозу и сахарозу. Протеолитические свойства: Расщепляют белковые среды с образованием сероводорода (кроме возбудителя паратифа А), индол не образуют, желатин не разжижают.

Шигеллы: Расщепляют углеводы без газообразования, не расщепляют сахарозу и лактозу (кроме шигеллыЗонне, которые на 2-3 сутки расщепляют их). Протеолитические свойства: мало выражены, образование индола и сероводорода непостоянно, молоко свёртывают, желатин не разжижают. По отношению к манниту делятся на расщепляющие и не расщепляющие манит.

3. В лабораторию поступила кровь больного с подозрением на сыпной тиф (14 суток заболевания).

Назовите метод исследования используемый для диагностической цели с учетом дифференциации эпидемического и эндемического сыпного тифа.

Эндемический сыпной тиф (крысиный, блошиный или американский сыпной тиф) вызывается риккетсиями R. mooseri.

Эпидемический сыпной тиф, известный также как классический, европейский или вшивый сыпной тиф, корабельная или тюремная лихорадка, вызывается риккетсиями Провачека, Rickettsiaprowazekii (по имени описавшего их чешского ученого).

Для подтверждения диагноза и дифференциации эпидемического и эндемического сыпного тифа используют различные серологические реакции. Сохранила некоторое значение реакция Вейля—Феликса — реакция агглютинации с протеем OXig, особенно при нарастании титра антител в ходе болезни. Чаще используют РСК с риккетсиозным антигеном, приготовленным из риккетсий Провачека (эпидемический сыпной тиф), диагностическим титром считается 1:160 и выше, а также нарастание титра антител. Используют и другие серологические реакции (реакция микроагглютинации, гемагглютинации и др.). В качестве рекомендуемой диагностической процедуры рекомендована непрямая реакция иммунофлюоресценции. В острую фазу болезни антитела связаны с IgM, что используется для отличия от антител в результате ранее перенесенной болезни. Антитела начинают выявляться в сыворотке крови с 4—7-го дня от начала болезни, максимального титра достигают через 4-6 нед от начала заболевания, затем титры медленно снижаются. После перенесенного сыпного тифа риккетсий Провачека в течение многих лет сохраняются в организме реконвалесцента, это обусловливает длительное сохранение антител (связаны с IgG также в течение многих лет, хотя и в невысоких титрах). В последнее время с диагностическими целями используют пробную терапию антибиотиками тетрациклиновой группы. Если при назначении тетрациклина (в обычных терапевтических дозах) через 24—48 ч не наступает нормализация температуры тела, то это

 

БИЛЕТ 4

1. Приготовьте препарат из культуры, выращенной на плотной питательной среде, окрасьте по ГР и промикроскопируйте препарат. Сделайте вывод.

Методика окраски по Граму

Цель: позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки, определить морфологические и тинкториальные свойства.

1.        Приготовить фиксированный мазок

2.        На мазок кладём фильтровальную бумагу

3.        На бумагу капнуть 1-2 капли генцианвиолета и окрасить в течение 1 минуты

4.        Краску вместе с бумагой смыть (промывать водой не надо)

5.        Окрасить препарат раствором Люголя на фильт. бумаге в течение 1 минуты

6.        Краску слить и на мазок с фильтр. Бумагой капнуть на 0,5 минуты этилового спирта

7.        Промыть препарат водой

8.        Окрасить разведённым фуксином Циля в течение 2 минут также на фильтровальной бумаге

9.        Промыть водой, подсушить и промикроскопировать

Грам «+» окрашиваются в синий цвет, грамм «-» в розовый.

Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

Приготовить рабочий стол → Зажечь спиртовку и прокалить бактериальную петлю → Петлёй нанести на предметное стекло каплю воды → Петлю обжечь → Петлёй взять небольшое количество исследуемого материала, соблюдая правила стерильности → Перенести материал в каплю воды на предметном стекле и тщательно растереть, чтобы получилось мутное пятно → Петлювновь обжечь → Зафиксировать мазок, проведя над пламенем 3-4 раза → Дать мазку подсохнуть → Окрасить.

Дайте характеристику ГР(+) и ГР(-) бактериям.

Отличия ГР(+) и ГР(-) бактерий

Отношение к окраске по Граму – важный для систематики признак бактерий, который зависит от структуры и химического состава клеточной стенки бактерий. Выделяют две большие группы - грамположительные (“грам+”) и грамотрицательные (“грам-“) бактерии. Стенка грамположительных бактерий после окраски по Граму сохраняет комплекс йода с генциановым фиолетовым (окрашены в сине-фиолетовый цвет), грамотрицательные бактерии теряют этот комплекс и соответствующий цвет после обработки и окрашены в розовый цвет за счет докрашивания фуксином.

Особенности клеточной стенки грамположительных бактерий.

Мощная, толстая, несложно организованная клеточная стенка, в составе которой преобладают пептидогликан и тейхоевые кислоты, нет липополисахаридов (ЛПС), часто нет диаминопимелиновой кислоты.

Особенности клеточной стенки грамотрицательных бактерий.

Клеточная стенка значительно тоньше, чем у грамположительных бактерий, содержит ЛПС, липопротеины, фосфолипиды, диаминопимелиновую кислоту. Устроена более сложно - имеется внешняя мембрана, поэтому клеточная стенка трехслойная.

2. Укажите на предложенной чашке с ЖСА один из дифферинциально-диагностических признаков.

Назовите признак, являющиеся дифференциально-диагностическими для стафилококков.

Дифференциально – диагностический признак: при росте стафилококки образуют пигмент: золотистый лимонно-желтый или белый, который не растворяется в воде и растворяется в ацетоне, эфире, спирте.

На МПА колонии стафилококка выпуклые, круглые, непрозрачные, блестящие, размером 2-4 мм с ровными краями. На агаре с кровью вокруг колонии образуется зона гемолиза. На бульоне – равномерное помутнение и осадок на дне.

На ЖСА вокруг колоний выявляется продукция лецитиназы - мутная зона и «радужные» венчики.

 

3. Через 10 лет после перенесенного сыпного тифа у больного без повторного заражения появились симптомы этого заболевания. Назвать это явление и используемые методы диагностики.

Рецидив - повторение болезни после кажущегося полного выздоровления.

Основным методом лабораторной диагностики сыпного тифа являются серологические реакций: агглютинации, связывания комплемента и непрямой гемагглютинации. Реакция агглютинации со специфическим диагностикумом из риккетсий Провачека высокочувствительна и становится положительной на 3—5-й день. Диагностическим титром антител считают разведение сыворотки 1: 100—1: 160. Антитела исчезают в течение года после заболевания. РСК бывает положительной с 7—8-го дня болезни; титр антител максимальный к 12—14-му дню, а затем наблюдается медленное снижение. Небольшое количество комплемент- связывающих антител обнаруживают долгие годы. РНГА становится положительной на 7—8-й день заболевания. Диагностическим считают титр антител 1: 160 — І: 200 при условии его дальнейшего нарастания при повторной постановке РНГА.

БИЛЕТ 5

1. Окрасьте препарат метиленовой синью, промикроскопируйте, сделайте вывод.

 Расскажите методику приготовления мазка из культуры, выращенной на ЖПС.

Окрасить препарат метиленовой синью:

1.        препарат положить на поверхность исследуемым материалом вверх;

2.        пипеткой нанести на препарат р-р красителя на 5-7 мин;

3.        краску слить, промыть водой;

4.        просушить;

5.        м/с с иммерсией.

Для приготовления мазка необходимо иметь:

• Чистое обезжиренное предметное стекло.

• Бактериологическую петлю

• Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.

• Спиртовку.

• Набор красок.

Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры на­носят петлей на предметное стекло.

 

2.Выберите культуры с характерным для сальмонелл ростом на двухсахарной среде.

 Перечислите и охарактерактеризуйте исследования для дифференциации этого возбудителя.

 

3.У больного был взят мазок из зева и посеян на питательную среду. Для фаготипирования был использован стафилококковый бактериофаг, но зоны подавления роста через 24 часа инкубации не появилось.

 Дать заключение по этим данным.

 

БИЛЕТ 6

1.Промикроскопитуйте готовый препарат, сделайте вывод.

 Расскажите устройство и правила работы со световым микроскопом.

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 х в рабочее положение, т. е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте - точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

 

 

2. Произведите учет реакции связывания комплемента (Реакция Вассермана). Назовите цель проводимой реакции и перечислите используемые ингредиенты.

Реакция Вассермана (RW), или ЭДС (экспресс-диагностика сифилиса) — метод диагностики сифилиса

Для постановки реакции необходимы следующие ингредиенты: 1) исследуемая сыворотка, 2) антигены, 3) комплемент, 4) гемолитическая сыворотка, 5) эритроциты барана.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берут в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл.

Степень положительности реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов + + ++ полная задержка гемолиза, жидкость не окрашена, все эритроциты в осадке; + + + выраженная задержка гемолиза, жидкость розовая, эритроциты в осадке; + + частичная задержка гемолиза, жидкость окрашена интенсивно, осадок эритроцитов ясно виден; + слабая задержка гемолиза, жидкость интенсивно окрашена, осадок незначительный, слабо заметен; — полный гемолиз, жидкость окрашена интенсивно, осадка нет

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: язвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI.Методы микробиологического исследования используемые для анализа данной пробы.Методика взятия биоптата со слизистой желудка и 12 – перстной кишки.

ПЦР обычно дает положительный (возбудитель есть) или отрицательный результат (возбудителя нет). Метод ПЦР позволяет выявить даже ничтожно малое количество хеликобактерпилори с целью прогнозирования заболевания, выявления возможной склонности к язвенной болезни, гастриту или раку желудка.

БИЛЕТ 7

1. Промикроскопируйте и опишите морфологические признаки бактерий, из предложенных препаратов (№ 1,2). Дайте характеристику различным морфологическим группам.

По внешнему виду бактерии делятся на три формы: палочковидные, шаровидные (кокки) и извитые (вибрионы и спириллы). 

Кокковые формы различаются по форме деления и расположению в мазках. Они делятся в одной, двух, трех и более взаимно перпендикулярных плоскостях. При делении в одной плоскости они располагаются парами (диплококки) или цепочками (стрептококки); в двух плоскостях — по четыре (тетракокки), в трех плоскостях образуют пакеты (сарцины); при беспорядочном делении располагаются одиночно (микрококки) или в виде гроздьев винограда (стафилококки). Извитые формы имеют вид спирали. Микроорганизмы палочковидной формы подразделяются на бактерии, бациллы и клостридии.

К бактериям относятся палочковидные микроорганизмы, не образующие спор (кишечная палочка, сальмонеллы, возбудители туберкулеза и т.д.).

К бациллам и клостридиям (лат. closter — веретено) принадлежат микробы, образующие споры (сибиреязвенная, столбнячная палочки, возбудители анаэробной инфекции).

По форме палочковидные бактерии бывают короткими, длинными или средних размеров: с закругленными (большинство палочек), заостренными (фузобактерии), обрубленными (сибиреязвенная палочка) и булавовидными (коринебактерии) концами. Некоторые бактерии могут образовывать ветвления в виде боковых выростов (микобактерии туберкулеза).

По взаимному расположению палочковидные формы распределяются на три подгруппы:

диплобациллы и диплобактерии располагаются попарно; стрептобактерии и стрептобациллы — цепочками; беспорядочно расположенные бактерии и бациллы — в виде римских цифр II, V и т.д.

Извитые формы бактерий. К этой группе относятся вибрионы, спириллы и спирохеты.

Вибрионы — изгиб клетки равен 1/3—1/4 завитка спирали, имеющие вид запятой (холерный вибрион).

Спириллы имеют изгибы с одним или несколькими оборотами спирали.

Спирохеты имеют штопороподобную форму, размеры колеблются в больших пределах (ширина 0,3— 1,5 мкм и длина 7 — 500 мкм).

Палочковидные формы бактерий, подобно коккам, располагаются по длине парами — диплобактерии или цепочками — стрептобактерии. Палочковидные формы могут быть прямые и искривленные, строго цилиндрические и неравномерно утолщенные, с концами закругленными, заостренными или обрубленными.