Тема 3. Аллергическая и серологическая диагностика инфекционных заболеваний.

Применяемые в хозяйстве-это -Сыворотки и глобулины - препараты, содержащие антитела к определенным возбудителям болезней, получаемые от гипериммунизированных или переболевших животных и предназначенные для пассивной иммунизации или лечения, а также диагностики инфекционных болезней.

Сыворотки выпускают нативными и консервированными, жидкими и сухими. Примерами биопрепаратов: антитоксические сыворотки против столбняка, ботулизма энтеротоксемии и других анаэробных инфекций; антибактериальные сыворотки — содержащие антитела, способствующие фагоцитозу и лизису бактерий; противовирусные — содержащие вируснейтрализующие антитела; иммуноглобулины — против сибирской язвы, бешенства, болезни Ауески, столбняка, а также неспецифические; сыворотки реконвалесцентов против ринотрахеита, аденовироза, хламидиоза.

2. Перечислить биопрепараты, применяемые для профилактики в хозяйстве, их назначение и применение

Иммунопрофилактика. Вакцины — специфические антигенные биопрепараты, полученные из микроорганизмов, их компонентов или продуктов жизнедеятельности и предназначенные для создания активного иммунитета к инфекционным болезням в организме животных.

Живые вакцины – наиболее эффективные биопрепараты: быстро формируется иммунитет, достаточно малых доз антигены и, как правило, однократной вакцинации.

Недостатки: достаточно высокие реактогенность, питрогенность, остаточная вирулентность. Живые вакцины изготавливают из авирулентных или слабовирулентных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов, не способных возвращаться к первоначальным свойствам (реверсии), но сохранивших иммуногенность; дефектных мутантов; вирулентных (не ослабленных) микроорганизмов; гетерогенных возбудителей. К основным методам аттенуации относят следующие:

• ослабление возбудителя многократными пассажами на невосприимчивых или слабовосприимчивых животных и адаптация к ним (вакцины Конева против рожи; антирабическая Пастера: АСВ из штамма К против чумы свиней; из штамма ЛТ против чумы КРС);
• ослабление путем многократных пассажей на куриных эмбрионах (вирусные вакцины: сухая ВГНКИ против болезни Ауески, 668-КФ против чумы собак, многие вакцины против болезней птиц);
• ослабление возбудителя путем культивирования на питательных средах с добавлением неблагоприятных веществ (БЦЖ против туберкулеза);
• ослабление возбудителя посредством ультрафиолетового облучения - УФО (против ИРТ КРС-ВИЭВ, листериоза из штамма АУФ);
• отбор авирулентных штаммов: естественных или полученных путем селекции в лабораториях (вакцины из штамма 55 ВНИИВВиМ против сибирской язвы; из штаммов 19 и 82 против бруцеллеза; ВР-2 против рожи).

Инактивированные вакцины, как правило вырабатывают менее напряженный иммунитет, чем живые. Особенности использования: необходимость значительно большего количества антигена, а также повторных вакцинаций (ревакцинаций) и депонирующих веществ (адъювантов) при введении - для усиления иммуногенности. Преимущества инактивированных вакцин: они более безопасны, так как не способны спровоцировать заболевание у животных, общие реакции слабее, чем при иммунизации живыми вакцинами. В то же время местная реактогенность при иммунизации депонированными вакцинами (особенно эмульгированными) может быть достаточно высокой.

Субъединичные и генно-инженерные вакцины распространены в ветеринарии недостаточно широко (наработки по сальмонеллёзу, эшерихиозу, бруцеллёзу, ящуру). Их иммуногенность уступает живым и инактивированным вакцинам, но они лишены их недостатков, поэтому могут применяться для иммунизации молодняка, беременных и ослабленных животных.

Вакцины выпускают в жидком или сухом (лиофилизированные) виде. Различают 3 вида иммунизации в зависимости от способа формирования иммунитета:

• активная – применяют вакцины, при этом иммунитет вырабатывается самим организмом;
• пассивная — применяют сыворотки или иммуноглобулины, при этом в организм вводят готовые антитела (полученные при иммунизации других животных — продуцентов);
• смешанная (пассивно-активная) — при которой вначале вводят сыворотку или глобулин (пассивная вакцинация), а через некоторое время вакцину (активная вакцинация). При этом способе пассивные антитела в организме могут отрицательно влиять на формирование активного иммунитета.

Способы вакцинации:

• простая вакцинация — применяют одну вакцину (но не против одной инфекционной болезни).
• комплексная вакцинация — применяют нескольких вакцин (при этом их вводят раздельно или смешивают перед введением).

Методы введения вакцин могут быть парентеральными — подкожный, внутрикожный, внутримышечный, интраназальный, внутрицистернальный, накожный (скарификационный), аэрозольный (респираторный, ингаляционный), инсталляционный (введение по каплям в отверстия) и энтеральный.

В данное время в хозяйстве используют инактивированные вакцины в простой а так же комплексной вакцинации.

3. Описать способы и методы утилизации биопрепаратов.

Остатки вакцин в ампулах или флаконах, использованные одноразовые иглы, шприцы, скарификаторы, ватные тампоны, салфетки, перчатки после инъекции сбрасывают в контейнеры с дезинфицирующим раствором, приготовленным в соответствии с инструкцией по его применению.

После дезинфицирующей обработки медицинские отходы утилизируют в соответствии с санитарными правилами и нормами СанПиН 2.1.7.728-99 "Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений".

Задание 2. Прием больных животных и оказание лечебно-профилактической помощи при инфекционных болезнях. Специфическая терапия, введение сывороток, иммуноглобулинов. Антибиотикотерапия в хозяйствах.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Провести прием животного, данные занести в журнал приема форма №1-вет (приложение 8)

2. Записать какая проводилась специфическая терапия. Записать какая проводилась вакцинотерапия:

На 8-й день жизни телят прививали от диклококка, на 10-й от парагриппа, на 12-й против вирусной диареи. Ровно в месяц делали укол от трихофитии, а в два месяца от пастереллеза. На сроке 90-95 дней жизни прививали от эмкара и сибирсокй язвы, а на 120-130 сутки от бруцеллеза и ящура. Последняя прививка (против ящура) повторялась еще и на 10-й месяц жизни животного.

Взрослым коровам лептоспироз прививался дважды в год, через каждые шесть месяцев, точно по той же схеме делалась и прививка от пастереллеза, то есть два раза в году.

Прививка от колибактериоза делалась двукратно: в первый раз за 100 дней до отела и во второй - за 90 дней. Вакцинация от паратифа делалась за 80 дней до отела и затем повторная ревакцинация за 70 дней. Вакциной "Комбовак" прививали коров за 40 - 50 дней до отела в первый раз и за 14 - 21 день до отела во второй, телят, рождённых от вакцинированных коров, для предотвращения инфицирования возбудителей ОРВИ КРС так же вакцинировали вакциной «Комбовак» двухкратно в возрасте 30 дней и 44 дней в дозе 0,2 мл внутрикожно, далее в возрасте 3 месяца двухкратно интервалом в 14 дней прививали всех телят в дозе 0,4 мл внутрикожно и далее в 6 и 12 месяцев однократно в дозе 0,2 мл внутрикожно.

3. Записать какая проводилась серотерапия (применение специфических сыво­роток и гамма-глобулинов).

Лечение специфическими гипериммунными сыворотками занимает важное место в оздоровительной работе при инфекционных болезнях животных. Лечебное действие их связано с введением в организм специфических антител, обезвреживающих болезнетворные микроорганизмы или их токсины. С другой стороны, неспецифические компоненты сыворотки, ее белково-солевой комплекс, активизируя клетки и ткани, усиливают общую иммунореактивность макроорганизма и его защитные механизмы в борьбе с возбудителем инфекции. Лечебные сыворотки получают от гипериммунизированных животных и реконвалесцентов.

По механизму действия, зависящему от свойства антител, специфические сыворотки разделяют на антимикробные и антитоксические. Первые главным образом воздействуют на возбудителей болезней, подавляя их жизнедеятельность, вторые – обезвреживают ядовитые продукты метаболизма микробов. К антимикробным сывороткам относятся сыворотки против сибирской язвы, рожи свиней, пастереллеза, септицемии и др., а к антитоксическим – сыворотки против столбняка, анаэробной дизентерии ягнят, инфекционной энтеротоксемии овец и др.

Гамма-глобулин получают из сыворотки крови крупного рогатого скота (КРС) в возрасте 1,5 - 2 года массой 250 - 280 кг. Гипериммунизацию животных возбудителем болезни осуществляют в два цикла с интервалом в 30 дней. Во время первого цикла антиген вводят животным однократно в течение 3 дней в дозе по 4 мл, включающей 1 мл водной суспензии гриба (50 млн/мл), 1 мл физраствора и 2 мл 1%-ного раствора сапонина. Во время второго цикла антиген вводят животным также однократно в течение 2 дней в дозе по 8 мл, включающей 2 мл водной суспензии гриба, 2 мл раствора и 4 мл 1%-ного раствора сапонина. Через 5 дней после окончания второго цикла гипериммунизации животных подвергают обескровливанию. Из полученной крови отделяют гипериммунную сыворотку, pH которой устанавливают в пределах 6,9 - 7,2. В сыворотку добавляют 50%-ный водный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 20% и после двухчасовой экспозиции при 10^oC сыворотку подвергают центрифугированию при 2500 об/мин в течение 30 мин для выделения гамма-глобулина с последующей его лиофилизацией для обеспечения стабильности свойств препарата при хранении. Перед использованием сухой гамма-глобулин разводят в 10 мл физраствора.
В данном случае в хозяйстве давно не наблюдалось возникновения тяжёлых инфекций, поэтому и лечения их не требовалось.

4.Записать какая проводилась неспецифическая терапия.

Из неспецифической терапии применялась аутогемотерапия.

Аутогемотерапия является простым и доступным методом неспецифической стимулирующей терапии. Осуществляют ее следующим образом. Берут кровь из яремной вены больного животного шприцем Жанэ и сразу же инъецируют ее этому же животному внутримышечно или подкожно. Дозы крови крупному рогатому скоту составляют от 30 до 150 мл. Кровь вводят три раза с интервалом между инъекциями 2—4 сут. В первый раз вводят 30 мл крови, во второй — 50 мл, в третий — 75 мл.

Действие аутогемотерапии на организм животных аналогично действию аутопротеинотерапии, применяемой в комбинации с ауто-серотерапией и аутовакцинацией.

Задание 3. Принципы аллергической диагностики туберкулеза. Оформление документации

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения туберкулина различным видам сельскохозяйственных животных и птице.

Туберкулез (Tuberculosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь всех видов животных и человека, характеризующаяся образованием в различных органах специфических узелков, подвергающихся казеозному некрозу и обызвествлению.

При внутрикожном методе туберкулинизации туберкулин вводят крупному рогатому скота, буйволам, зебу видному скоту, оленям (маралам) в середину шеи, быкам-производителям — в под хвостовую складку, верблюдам -в область наружной поверхности уха в 2см от его основания, козам -в толщу нижнего века; собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; норкам — интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам — в область внутренней поверхности уха курам — в бородку; индейкам -в подчелюстную сережку; гусям, уткам- в подчелюстную складку; фазанам –самцам -в кавернозные тела головы; павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго- в область наружной стороны голени на 1...2см выше голеностопного сустава. Перед введением туберкулина шерсть (волос) в месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Читку реакции на внутрикожное введение туберкулина проводят у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов и оленей через 72ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей через 48ч; у птицы через 30-36ч. В неблагополучных по туберкулезу пунктах крупному рогатому скоту и верблюдам допускается вводить туберкулин повторно через 72ч после первого введения в той же дозе и в то же место. Учет и оценку реакции на повторное введение проводят через 24ч. При учете внутрикожной реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина, у норок визуально сравнивают веки левого и правого глаза. При обнаружении во время читки утолщения кожи на месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов, оленей берем кутиметр и измеряем толщину складки в миллиметрах и определяем величину ее утолщения, сравнивая ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина.

2. Описать основное оборудование и материалы для туберкулинизации животных и птицы. Методы стерилизации инструментов.

Следующие предметы должны быть подготовлены для того, чтобы провести туберкулинизацию:

1. Кутиметр

2. шприц Hauptner Syntena II туберкулина для бычьего туберкулина

3. шприц Hauptner Syntena II туберкулин для птичего туберкулина

4. Новые канюли

5. машинка для стрижки с запасным аккумулятором и запасной головкой для стрижки

6. флакон масла для смазывания ножей для стригательной машинки

7. из холодильника взятый туберкулин, либо уже установлены в шприцах, или ещё во флаконах, чтобы набрать локально (не входит в комплект)

8. лампочка для мест с неблагоприятными условиями освещения

9. маркировачный карандаш для документирования толщины кожи

Четкая маркировка каждого шприца для туберкулина (бычий и птичий) облегчает различие (у нас способом разными цветами отмечены кнопки) в условиях низкой освещенности чтобы не перепутать.

Список животных для проверки заранее выпечатать.

Инъекции птичево и бычьего туберкулина должны быть в направлении, параллельной линии от плеча. Инъекции бычьего туберкулина осуществляется около 12,5 см ниже, чем инъекция птичего. Как правило "Птица летит сверху".

Места инъекций должны быть выбритые и чистые!

На каждом выбритом месте необходимо сформировать складку кожи помощью большим и указательным пальцами и измерить их толщину с кутиметром и записать результаты. Документация должна осуществляться непосредственно с помошью помошника.

Короткой стерильную иглой, на градуированном шприце Хауптнер фиксируется, на искасок ввести в глубокие слоя кожи. Туберкулин вводят. Инъекции выполнены правильно, если можно найти небольшую горошину, как припухлость в каждом месте инъекции при проверке пальцами.

Через 72 часов (+/- 4 часа) после инъекции проводится контрольное измерение и также записывается.

Каждый флакон с туберкулином перед применением просматривают. При нарушении целостности стекла или укупорки, отсутствии надписей на флаконах их выбраковывают.

Для внутрикожного и пальпебрального введения туберкулина используют шприцы с бегунком вместимостью 1 - 2 см и иглы для внутрикожных инъекций или безыгольные инъекторы БИ-7. ИБВ-02 и другие.

Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки, для внутривенного введения - шприцы вместимостью 5 - 10 см3 и иглы для подкожных инъекций.

Туберкулин используют только в день вскрытия флакона, остатки туберкулина инактивируют кипячением в течение 10 минут.

Инструменты, используемые для туберкулинизации, не разрешается применять для введения животным других вешеств.

Шприцы, иглы и глазные пипетки до и после их использования стерилизуют кипячением в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих вешеств. Безыгольные инъекторы стерилизуют в соответствии с наставлением по их применению.

Во время проведения внутрикожной, пальпебральной и внутривенной туберкулинизации для каждого животного используют отдельную стерильную иглу.

3. Описать методы оценки реакции.

4. Оформить документы о проведении туберкулинизации. (Приложение 9)

Задание 4. Диагностическое исследование на бруцеллез.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения бруцеллезных аллергенов различным видам сельскохозяйственных животных.

Для исследования на бруцеллез животных разных видов применяют следующие методы:

крупного рогатого скота, яков, зебу, буйволов

- серологический: реакция агглютинации в пробирках (РА),

реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного

связывания комплемента (РДСК), пластинчатая реакция

агглютинации с Роз-Бен галантигеном - роз бенгал проба

(РБП), кольцевая реакция с молоком (КР), реакция

иммунодиффузии с О-ПС антигеном (РИД);

овец, коз, оленей, маралов, лошадей, верблюдов

- серологический: РА, РСК/РДСК, РБП;

свиней

- серологический: РСК/РДСК, РБП;

- аллергический;

собак и животных других видов

- серологический: РА, РСК.

Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическими методами через 15-30 дней, а аллергическим - через 25-30 дней.

Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов - с 4-месячного возраста.

Крупный и мелкий рогатый скот, подвергавшийся иммунизации против бруцеллеза, исследуют на эту болезнь в порядке и в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины, и дают оценку их состояния по бруцеллезу.

Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.

2. Описать основное оборудование и материалы для диагностического исследования на бруцеллез. Методы стерилизации инструментов.

Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) - один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) - протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

3. Описать методы оценки реакции.

4. Описать технику разведения и применения бруцеллезной вакцины. Способы метки вакцинированных животных.

5. Описать технику взятия крови у разных видов сельскохозяйственных животных и птицы.

Взятие крови для исследования у сельскохозяйственных животных производится разными способами. У лошадей, крупного и мелкого рогатого скота ее берут обычно из яремной вены, расположенной над тра