Взятие материала от лабораторных животных

Способвзятия крови опреде­ляется требуемым количеством ее. Большое количество получают путем пунк­ции сердца или из наружной яремной, бедренной, подкрыльцовой вен. Неболь­шое количество крови берут из ушной и хвостовой вен, из гребня и ретробульбарного венозного сплетения.

Пункцию сердца делают у мышей, крыс, хомяков, кроликов, морских сви­нок, собак и кур. При этом методе бывают смертельные случаи, особенно у мышей, крыс, хомяков и морских свинок.

Из наружной яремной вены кровь берут у хомяков, морских свинок, хорьков, кроликов, собак и кур в тех случаях, когда не удается взять кровь путем пункции сердца. Вена должна быть обнажена, животные (кроме кур) находятся под нар­козом. Из бедренной вены кровь берут у мышей, крыс, хомяков. Для этого животное фиксируют в положении на спине под наркозом. После подготовки операцион­ного поля разрезают кожу на внутренней стороне бедра и обнажают сосуд. У мелких лабораторных животных пункция этого сосуда невозможна, поэтому венунадрезают и кровь собирают в кожном кармане. После тампонады рану закрыва­ют. У собак кровь берут из v. saphena parva после фиксации животного в положе­нии на боку. Сдавливают бедро. Пункцию по возможности следует делать дистально в нижней трети голени на латеральной стороне.

У кур кровь берут из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris). С этой целью фиксируют птицу на спине, распрямляют крыло и сдавливают вену. Обрабатывают кожу спиртом. Так как ввести иглу в вену трудно, прокалы­вают ее скальпелем и собирают появившуюся кровь. Из гребня кровь берут, прокалывая его или отрезав зубец. Чтобы предупредить кровотечение, рану пос­ле взятия крови следует прижечь или обработать хлоридом железа.

У кроликов кровь получают из ушной вены после сдавливания у основания уха. У мышей, крыс и хомяков кровь обычно берут из хвостовой вены. Опера­цию выполняют под наркозом. Обрабатывают хвост спиртом, ксилолом или по­гружают его в теплую воду (45 °С) на 1 мин и удаляют кончик хвоста ножница­ми. У мышей, крыс и хомяков можно взять кровь (поднаркозом) ретробульбарного сплетения. Животных фиксируют между большим и указательным пальца­ми. Надавливая на шею, задерживают кровообращение в сосудах головы, о чем свидетельствует выпячивание глаз. В медиальный угол глаза вводят капилляр­ную пипетку и направляют ее в сторону гортани. При повреждении венозного сплетения кровь попадает в пипетку. После взятия крови животным подкожно вводят стерильный физиологический раствор: кроликам – 20 мл, морским свин­кам – 10, мышам – 1–2 мл.

Для получения сыворотки кровь около 1 ч выдерживают в теплом месте (30 – 37 °С), сгусток обводят металлической или стеклянной палочкой и ставят на ночь в холодильник. Сыворотку отсасывают пипеткой в стерильный сосуд, филь­труют или добавляют антибиотики (по 100–200 ЕД пенициллина и стрептоми­цина на 1 мл) и консервируют (мертиолат натрия, тимол, азид натрия и др.). Хранят сыворотку на холоде, лучше при замораживании (минус 10 – 20 °С).

По методу Робино для получения взвеси лейкоцитов к 30 мл крови добавляют гепарин из расчета 0,0001 мг на 1 мл крови. Смесь инкубируют в наклонном положении под углом 45 °С при 37 °С до полного оседания эритроцитов. Для уси­ления оседания добавляют 3 % взвесь поливинилпирролидона из расчета 20–40 % от объема крови. Полностью эритроциты оседают в течение 30–40 мин. Надосадочную жидкость центрифугируют при 1500 об/мин 2 мин, при этом лейкоциты выпадают в осадок. После удаления надосадочной жидко­сти осадок разводят 5 мл физраствора (рН 7,0), который добавляют по каплям. Лейкоциты осаждают в течение 30 мин. Осадок дважды отмывают физраство­ром. Получают гомогенную массу, состоящую из лейкоцитов.

По методу Ванцетти и Каудиана к 6 мл крови в градуированной пробирке добавляют 1,5 мл 3%-ной суспензии гуммиарабика и 1,5 мл 3%-ного цитрата натрия нейтральной реакции. Смесь взбалтывают и оставляют на 30 – 40 мин для осаждения эритроцитов. Снимают поверхностный слой и центрифугируют при 1000 об/мин 3 мин. Осадок суспендируют в физиологическом растворе.

Операцию по обескровливанию животных выполняют под наркозом. Мы­шей, хомяков и крыс обескровливают путем вскрытия шейных сосудов и соби­рают вытекающую из раны кровь. Морских свинок, собак, кроликов фиксируют на спине и после соответствующей подготовки обнажают сонную артерию, на­кладывают две лигатуры и между ними рассекают. Конец сосуда, идущий к сер­дцу, обнажают и, направив его в стерильную посуду, снимают лигатуру. Можно использовать также иглу для пункции.