Основные методы консервации вирусов

Применяют следующие методы консервация вирусов:

1) при хранении плотного вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный раствор на физиологическом растворе), который обладает бактериостатическим действием и в то же время защищает вирусы. В этом случае вирус можно хранить при 4°С несколько месяцев;

2) чаще всего вирусы хранят в холодильниках, обеспечивающих температуру минус 20, минус 30, минус 70 °С. При этой температуре некоторые вирусы без добавки защитных веществ сравнительно быстро теряют инфекционность. Известно, что чем меньше белка в вируссодержащей взвеси, тем меньше стабильность вирусов, поэтому очищенные вирусы быстро теряют свою биологическую активность. Хорошее защитное действие при замораживании и хранении вирусов оказывает добавка одного из следующих компонентов: инактивированной сыворотки крови, обезжиренного молока (от 10 до 30 %), желатина (0,5–1,5 %), ДМСО (10 %) и др. При быстром замораживании вируса до минус 196 °С (жидкий азот) с последующим хранением при этой температуре титр вируса в течение нескольких месяцев не снижается. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замораживать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов (NaH₂PO₄ или КН₂РО₄), которые обладают кислой реакцией и имеют более низкую точку замерзания, чем двузамещенные фосфаты (Na₉HPO₄ или К₂НРО₄) с щелочной реакцией.

Скорость оттаивания вируса существенно не влияет на его активность. Размораживать вирусы можно как при комнатной температуре, так и в водяной бане при температуре 37 °С. Во избежание частого замораживания и оттаивания одного и того же вируссодержащего материала необходимо хранить его маленькими порциями, достаточными для одноразового титрования или использования, например для реакции нейтрализации;

3) лиофилизация, т. е. высушивание в замороженном состоянии в условиях вакуума, – очень хороший способ консервирования вирусов. Для лиофилизации необходимы соответствующая аппаратура, определенный (в зависимости от вида вируса) наполнитель и тщательное выполнение процедуры сушки. На стойкость лиофилизированного вируса влияет не только выбор соответствующего наполнителя, но и состав газа в ампуле (уже 0,5 % кислорода вызывают быструю гибель вируса, в то время как влажность в границах 2–3 % существенно не влияет) и температура хранения лиофилизата – не выше 4 °С. Лиофилизацию лучше проводить в учреждениях, хорошо знакомых с этой методикой. В лиофилизированном виде вирусы могут храниться несколько лет.

ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ ДОЛЖНА ИМЕТЬ СЛЕДУЮЩУЮ ДОКУМЕНТАЦИЮ:

– журнал вирусологических исследований (экспертиз, сельхозучета, формы № 13-вет);

– журнал учета зараженных животных;

– журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения;

– журнал учета движения производственных или музейных штаммов и другие книги учета согласно утвержденной инструкции.

Задания

1. Ознакомиться с вирусологической лабораторией и ее основным оборудованием.

2. Изучить правила работы с вируссодержащим материалом.

Самостоятельная работа студентов

а) подготовка бокса для работы;

б) отработка навыков работы с пипеткой и стерильными инструментами;

в) изучение документации лаборатории.

Подведение итогов занятия

Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы

1. Какова роль вирусов в инфекционной патологии животных?

2. Что вы знаете о технике безопасности и правилах работы в вирусологической лаборатории?

3. Какие методы консервации вирусов вы знаете?

4. Какие способы уничтожения вирусов существуют в лабораторной практике?

 

ТЕМА 2. ПОЛУЧЕНИЕ, ТРАНСПОРТИРОВКА И ПОДГОТОВКА

ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

 

Цель занятия

Ознакомить студентов с правилами взятия и транспортировки патологического материала для лабораторных исследований. Приготовить вируссодержащую суспензию из органов павших или вынужденно убитых животных. Подготовить смывы, полученные от больных животных, для вирусологического исследования.

Оборудование и материалы

Стерилизаторы со стерильными ножницами и пинцетами; спиртовки; стерильные ватные тампоны; вата; спирт-ректификат; пенициллиновые флаконы с 3–4 мл раствора Хенкса; термос с охлаждающей смесью; лейкопластырь; графитные карандаши; кювета; пенициллиновые флаконы с кусочками паренхиматозных органов; стерильные ступки с пестиками; стерильный песок; пипетки на 5 и 10 мл, стерильные центрифужные пробирки; антибиотики (пенициллин и стрептомицин); МПА; МПБ; раствор Хенкса или Эрла, центрифуга, мультимедийное оборудование, презентации MS Office Power Point по теме занятия.