Архитектура электронного правительства: Единая архитектура – это методологический подход при создании системы управления государства, который строится...
Особенности сооружения опор в сложных условиях: Сооружение ВЛ в районах с суровыми климатическими и тяжелыми геологическими условиями...
Топ:
Выпускная квалификационная работа: Основная часть ВКР, как правило, состоит из двух-трех глав, каждая из которых, в свою очередь...
История развития методов оптимизации: теорема Куна-Таккера, метод Лагранжа, роль выпуклости в оптимизации...
Оценка эффективности инструментов коммуникационной политики: Внешние коммуникации - обмен информацией между организацией и её внешней средой...
Интересное:
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Лечение прогрессирующих форм рака: Одним из наиболее важных достижений экспериментальной химиотерапии опухолей, начатой в 60-х и реализованной в 70-х годах, является...
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Дисциплины:
2021-03-17 | 78 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Морфологи-ческие и биологичес-кие признаки | E. coli | Citrobac-ter | Kleb-siella | Entrobacter | Proteus | Sal-mo-nella | |||
E. cloa-sae | E. aere-ge-nes | E. lique faci-lus | P.vul-garis | P. mira-bilis | |||||
Подвижность | + или - | + реже- | - | + | + | + | + | + | + реже - |
Глюкоза | + | + | + | + | + | + | + | + | + кг (си-няя) |
Лактоза | + или - | + или - | + | + | + | (+) | - | - | - (сл. розо-вая) |
Сахароза | + или - | + или - | - | + | + | + | + | + или - | - (сл. розо-вая) |
Маннит | + | + | + | + | + | + | - | - | + кг (си-няя) |
Дульцит | + или - | + или - | + или - | - | - | - | - | - | + или - |
Адонит | - | - | + | +или- | + | - | - | - | - |
Инозит | - | + или - | + | - | + | (+) | - | - | + или - |
Индол | + реже- | + или - | - | - | - | - | + | - | - |
Сероводород | + реже- | + или - | - | - | - | - | + | + | + реже- |
Реакция с метилротом | + | + | - | - | - | + или - | + | + | + |
Реакция Фогес-Проскауэра | - | - | + | + | + | + или - | - | + или - | - |
Усвоение цитратных и аммонийных солей | - | + | + | + | + | + | + или - | + или - | + |
Разложение мочевины | - | + или - | (+) | - | - | - | + | + | - |
Разжижение желатины | - | - | - | (+) | + или - | + | + | + | + или - |
Мальтоза | + |
E. coli чаще изолируют из паренхиматозных органов (печень, легкие, почки), костного мозга, кишечника, желчного пузыря, крови, яичных фолликул и т.д. отобранных не позднее 6 часов после гибели уток. При отсутствии возможности быстрой доставки отдельных органов или их частей материалы консервируют, помещая в стерильный раствор глицерина или 10% раствор хлористого натрия.
Патологический материал отбирают не ранее, чем через 5 суток после обработки птицы антибиотиками или другими антибактериальными препаратами.
Выделение и идентификацию кишечной палочки проводят в следующем порядке:
1. Посев материала на жидкие (МПБ, ТСБ, ТГС) и плотные - МПА, Эндо или Левина среды, а также среды обогащения.
Из плотных сред чаще используют агар Эндо, агар Плоскирева, агар виспут-сульфитный, агар с эозинметиловым синим. Содержимое кишечника или фецес разводят 1:100 и вносят в селективно-дифференциальные среды – среды Эндо, Плоскирева и эозин-метиловый синий.
|
Отмечено, что кровь более пригодна для высева E. coli только при висцеральном колибактериозе с первых часов болезни. При септической форме концентрация бактерий может достигать 100 клеток в 1 мл крови.
Посевы выращивают при 37°C в течение 18-20 часов (на висмут-сульфитном агаре – 48 часов).
На МПБ рост E. coli вызывает равномерное помутнение с образованием рыхлого осадка. Типичные колонии эшерихий на плотной среде имеют округлую форму (S-форму) с выпуклой поверхностью. На среде Эндо колонии гладкие, с ровными краями, малинового цвета, на среде Левина – черного или фиолетового цвета.
2. Выделение чистых культур E.coli, изучение морфологических и тинкториальных свойств.
Две типичные S-формы колоний пересевают в МПБ, откуда через 4-6 часов бактерии переносят:
· в среды Гисса для изучения биохимических свойств и определения родовой принадлежности микроорганизма;
· 0,2-0,3% полужидкий МПА для выявления подвижности и дифференциальные среды;
3. Определение патогенности E. coli.
Готовят взвеси бактерий на ЗФР рН 7,2-7,6 для заражения белых мышей, морских свинок, утят восприимчивого возраста (1-3 и 40-50 суток), в аллантоисную полость утиных и куриных эмбрионов 11-13-суточной инкубации. Гибель подопытных животных и эмбрионов происходит на 2-5 сутки.
4. Идентификация Е. coli.
Получение бактериальных клеточных культур для реакции агглютинации (РА) с целью обнаружения К-, L-, B-антигенов проводят кипячением эшерихий при температуре 100°С в течение 60 минут, тогда как А-антиген - путём автоклавирования при 100 кПа (1 атм.) в течение 2 часов.
Методы постановки РА с поли- и моновалентными сыворотками, а также учет результатов описаны в соответствующих наставлениях.
Энтеропатогенные E. сoli серогрупп О111 содержат десять фаготипов, серогрупп О55 - восемь. Фаготип культуры бактерий не меняется при хранении. Существуют наборы, при помощи которых проводят фаготипирование изолятов.
|
Колибактериоз необходимо дифференцировать от сальмонеллеза, пастереллеза, вирусного гепатита утят, гриппа, коронавирусной болезни, парвовирусного энтерита мускусных уток и гусей, чумы, астровирусной инфекции и хламидиоза.
Иммунитет. При колибактериозе иммунитет у уток непродолжительный и ненапряженный.
Секреторные иммуноглобулины(Ig), подобные IgG, вместе с IgA и другими веществами предотвращают развитие и размножение E. coli на слизистой оболочке кишечника. Названные глобулины образуются после IgM на более поздней стадии инфекции или после вакцинации. IgG обладают лизирующей, нейтрализующей, агглютинирующей, преципитирующей активностью, фиксируют комплемент, а также участвуют в опсонизации. Например, низкий уровень неспецифических иммуноглобулинов в крови цыплят первых дней жизни служит одной из причин массового заболевания энтеротоксическим колибактериозом и другими желудочно-кишечными болезнями.
Лечение. После установления диагноза больную и подозреваемую птицу подвергают лечению. Рекомендуют применять синтомицин, колимицин, фурозалидон и формалин согласно разработанным схемам. Выбор лекарственного препарата проводят с учетом чувствительности к ним возбудителя. Фурозалидон, например, дают с кормом в дозе 3-5 мг на 1 кг живой массы утятам и 15-20 мг - уткам. Формалин, растворённый в воде (1:1000), обладает высокой эффективностью в дозе 0,1 мл на 1 кг живой массы 1 раз в сутки в течение 1-3 дней. Высокими лечебными свойствами обладают энтеросептол, окситетрациклин, стрептомицин, полимиксин М-сульфат и другие.
При колибактериозе активны и малотоксичны норсульфазол натрия, сульфазин натрия, сульфацил натрия, этазол натрия, сульфапиридазин натрия, сульфантрол, дисульформин, суметролим, сульфахлорпиридазин (Cosimix), тримеразин. Для превентивной терапии их назначают перорально в дозах 50-100 мг/кг на протяжении трех-пяти суток. Аэрозольно сульфамиды не применяют из-за высокой щелочной реакции. E. coli чувствительны к клиндамицину, левомицитину, ампициллину и другим антибиотикам.
При колибактериозе используют следующие лучшие сочетания препаратов: тилозин+эритромицин или хлорамфеникол, олеандомицин, тетрациклин. Затем хлорамфеникол+олеандомицин или спектимицин. Наименьший синергизм у тилозина и гентамицина.
|
E. coli, выделенные из проб патологического материала (желательно, крови), необходимо определить на чувствительность к наиболее широко используемым антибиотикам. Каждый вид или близкая группа бактерий обладает характерным спектром и уровнем чувствительности. Необходимо учитывать, что E. coli в результате мутации, рекомбинации или иммиграции могут даже во время инфекционного процесса приобретать измененную устойчивость к антибиотикам. В связи с этим чувствительность необходимо определять через каждые 5-7 суток. В настоящее время рекомендовано несколько методов: серийных разведений в бульоне или плотных питательных средах, «укола» или диффузии препарата в агар из бумажных дисков, а также исследование на куриных (вероятно, и на утиных) эмбрионах.
Для определения чувствительности E. coli методом серийных разведений используют МПБ с рН 7,2-7,6 с конечной концентрацией антибиотиков от 100 мкг до 1 мкг, а микроорганизмов 200 тыс. в 2 см3 бульона. Основной раствор готовят из 1000 мкг (ED) препарата в 1 см3. Необходимо учитывать, что антибиотики тетрациклинового ряда (вес указан в наставлении) предварительно разводят в 0,01 Н растворе соляной кислоты, 10 г левомицетина - в 1 см3 96° этилового спирта, тогда как стрептомицин сернокислый, полимиксин, неомицин - в ФБР рН 6,0-6,2, 10 г сульфаниламидных препаратов в 1 см3 0,1 Н раствора NaOH с последующим добавлением 49 см3 дистиллированной воды, чтобы получить конечную концентрацию 200 мкг/см3. После смешивания рабочих разведений антибиотиков и исследуемой культуры E. coli результаты учитывают через 18-24 часа при 37°С. Микроорганизм считается чувствительным, если антибиотик в концентрации до 25 мкг/см3 бульона подавляет рост культуры. Метод серийных разведений в плотной среде базируется на способности растворенного в МПА антибиотика ингибировать культуры E. coli. В лунки агара с каждой из трех концентраций антибиотика вносят по 5 капель 3-4-суточной культуры. Посевы инкубируют при 37°С до появления роста бактерий в контроле. Задержка роста в присутствии трех концентраций антибиотика определяет его высокую, среднюю и умеренную активность.
|
Метод «укола» основан на внесении сухого антибиотика в слой МПА или среды Хоттингера спустя 20-30 минут после нанесения на поверхности 1 см3 4-5-суточной бульонной культуры или взвеси колоний в концентрации 1 млрд/см3. Укол проводят пастеровской пипеткой, предварительно смоченной ЗФР рН 7,2-7,4. Оценку результатов проводят по диаметру зон задержки: до 10 мм – малая чувствительность, более 10 мм – чувствительная, нет зоны - бактерии устойчивые.
Исследования методом бумажных дисков проводят с применением МПА и двухмиллиардной взвеси бактерий на МПА. После нанесения бактерий на поверхность агара в чашке Петри размещают стандартные 5 дисков с интервалом более 2 см. Результаты учитывают по диаметру задержки роста: менее 15 мм – малочувствительные, 15-25 мм – чувствительные и более 25 мм – высокочувствительные.
Во ВНИВИП разработан метод определения активности препаратов на КЭ 9-11-суточной инкубации, которым вводят в разведениях антибиотики в аллантоисную полость или на ХАО. Затем через 6 часов в то же место вносят культуру E. coli.
На каждое разведение препарата (5, 10, 50, 100 мг/кг массы эмбриона) используют не менее 4 эмбрионов.
Оценку проводят через 2-3 суток. Определено, что в дозе 10мг/кг препарат высокоэффективен, 25 - достаточно эффективен, 50 мг/кг – эффективен.
Исследования, проведенные во многих странах, показывают, что большинство штаммов E. coli обладает множественной лекарственной устойчивостью, обусловленной наличием К-плазмид бактерий.
Во время лечения проводят мероприятия, направленные на укрепление резистентности организма птицы.
В России производят препарат «Ромакол», полученный методом генной инженерии в Институте молекулярной генетики РАН и ВИЭВ с использованием штамма E. coli М17 (р74). Биотехнологически производят полипептидное вещество – микроцин, ингибирующий развитие энтеробактерий (эшерихии, сальмонеллы и т.д.). Применение препарата «Ромакол» с 1994 года показало его высокую лечебную и профилактическую эффективность (4).
Изучено лечебно-профилактическое действие гипохлората натрия при колибактериозе утят. Установлено, что вещество является малотоксичным препаратом при выпаивании 600 мг/л в течение 7 суток. Препарат обладает слабой антимикробной активностью.
Профилактика и меры борьбы. Опыты, проведенные в СССР и России, показали возможность использования формол-вакцины из штамма E. coli серогруппы 02 для профилактики колибактериоза птиц. Данный препарат обладает эффективностью и при болезни, обусловленной кишечной палочкой других серогрупп - 08, 01, 0128. Профилактика колибактериоза заключается в постоянном сохранении естественной резистентности организма уток. Важными факторами для предотвращения болезни являются: полноценное кормление птицы, использование корма, свободного от патогенной E. coli; отдельное содержание возрастных групп уток; строгое соблюдение занятости помещений по принципу - "все пусто, все занято"; тщательная уборка помещений от помета и подстилки после сдачи каждой партии птицы; создание оптимальных режимов вентиляции воздуха; проведение механической очистки, мойки и дезинфекции оборудования, стен и пола, а также бактериологический контроль во время санитарных разрывов, которые должны быть не менее 14 суток. Дезинфекцию можно проводить 2-3% растворами едкого натрия, 1% раствором формальдегида, 20% взвесью свежегашеной извести при экспозиции от 2 до 3 часов, хлорамином, гипохлоридом натрия и т.д.
|
Важным фактором в профилактике колибактериоза является прединкубационная двукратная дезинфекция яиц и обработка инкубаторов после вывода каждой партии утят.
В неблагополучном по колибактериозу хозяйстве проводят следующие мероприятия: больных, подозрительных по заболеванию и слабых уток уничтожают и утилизируют внутри хозяйства, тогда как клинически здоровую птицу обрабатывают антибиотиками или другими бактерицидными препаратами.
При массовом заболевании молодняк и взрослое поголовье подвергают убою и утилизации на мясоперерабатывающих комбинатах с соблюдением установленных правил, исключающих распространение инфекции.
Завоз новых уток и яиц проводят из благополучных хозяйств, размещают их в заведомо подготовленные помещения.
Во ВНИВИП выпускают вакцину против колибактериоза птиц инактивированную сорбированную, а также вакцину против колибактериоза и пастереллеза птиц ассоциированную инактивированную и тоже сорбированную.
НПП «АВИВАК» производит вакцину против сальмонеллеза, колибактериоза и пастереллеза инактивированную «АВИВАК – САЛЬМО – КОЛИ – ПАСТОВАК». Вакцина изготовлена на основе поверхностных антигенов вирулентных штаммов Р.мультоцида, Салм. ентеритидис С – 5 – АТ и адгезивных антигенов токсигенных штаммов Е коли в смеси с масляным адъювантом. Биопрепарат предназначен для уток, гусей, кур и индеек.
Список литературы
Артемьева, С.А. Колибактериоз птиц / С.А. Артемьева. - Л.: Колос, 1977. - 96 с.
1. Виноходов, В.О. Колибактериоз водоплавающих. Биотехнология профилактики колибактериоза птиц / В.О. Виноходов // Архив вет. наук. - СПб, Ломоносов, 2000. - Т. 2 (49). - С. 314-320.
2. Жолобова, И.С. Эффективность применения раствора гипохлората натрия при диарейных заболеваниях птиц (колибактериоз, сальмонеллёз и микоплазмоз) / И.С. Жолобова // Тр. Куб. гос. аграр. ун-та. – 1999. – Вып. 375. – С. 157-161.
3. Промышленное изготовление лиофилизированного бактерийного препарата "Ромакол" для профилактики колибактериоза сельскохозяйственных животных и птицы / Н.И. Зенов, Н.Д. Скичко, Э.А. Шигидевич [и др.] // Пробл. инфекц. патол. с.-х. ж-ных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия ящура. - Владимир, 1997. - С. 208-209.
4. Шагинян, И.А. Идентификация и типирование патогенных бактерий: современные подходы / И.А. Шагинян // Вестник РАМН. – М., 2000. – С. 22-28.
5. Шахов, А.Г. Системно-экологический подход к защите животных от инфекций, вызываемых условно-патогенными возбудителями / А.Г. Шахов, В.С. Бузламова // 100 лет Курской биофабрике и агробиол. пром-сти России: тез. докл. науч.-произв. конф. - Курск, 1996. - С. 348-352.
КОРОНАВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ УТОК
Коронавирусная болезнь (инфекционный гепатонефрит утят, энтерогепатит утят, коронавирусный энтерит уток) – контагиозная инфекция, характеризующаяся асфиксией и параличом ног, признаками энтерита, гепатита, нефрита, воспалением железистого желудка и легких с проявлением генерализованного расстройства гемодинамики паренхиматозных органов.
Историческая справка. Болезнь зарегистрирована в феврале 1987 г. Князевым В.П. в Московской области РФ. Первые сообщения о болезни опубликованы в 1987 году Князевым В.П., Карасевой Е.М., Лагуткиным Н.А., Вишняковым И.Ф., Ерохиной Л.М. и др. Они описали болезнь и установили ее распространенность в России, Украине и Белоруссии. С 1987 по 1999 гг. болезнь зарегистрирована в большинстве крупных утководческих хозяйств стран СНГ: России – Ставропольский край (1987), Омская (1988), Московская (1989, 1991-1999), Астраханская (1991-1992), Владимирская (1991), Липецкая (1991-1992), Оренбургская (1999) области; Украине – Ивано-Франковская (1987, 1989), Черниговская (1988-1990), Черкасская (1989, 1990, 1995), Николаевская (1989), Сумская (1991, 1992), Луганская (1992) и Крымская (1992) области и Белоруссии – Брестская область (1991) (3,4, 9, 10, 12, 15).
Экономический ущерб, причиняемый болезнью, значителен. Он определяется снижением продуктивности птицы, в том числе: яйцекладки - до 40%, выводимости утят - с 87 до 50%, возрастанием неоплодотворенности яиц - с 3 до 52%, летальностью утят - до 90%, а также затратами на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий по ограничению распространения и ликвидации инфекции (1, 4, 8, 10).
Возбудитель. Коронавирус (Coronavirus). Этиологическая роль установлена Князевым В.П. Патоген впервые изолирован в октябре 1987 г. из проб органов павших утят, принадлежащих хозяйствам Ивано-Франковской области Украины и Ставропольского края РФ. Предварительно он классифицирован как представитель рода Coronavirus семейства Coronaviridae. Вирионы полиморфные: шаровидной, вытянутой или изогнутой формы. Размеры вирусных частиц сферической формы от 80 до 200 нм, вытянутой - 70-300 нм. На оболочке по всей поверхности расположены пепломеры длиной от 7 до 12 нм, образующие корону. Плавучая плотность в сахарозе - 1,19-1,20 г/см3, хлористом цезии - 1,20-1,26 г/см3 (3, 9, 11).
Вирус чувствителен к воздействию хлороформа, эфира, формальдегида (в конечной концентрации не менее 0,15%), бета-пропиолактона (1:750), перекиси водорода, температуры 58±2оC в течение 30 минут и лиофилизации без стабилизаторов под вакуумом. Пяти-семикратное замораживание при минус 35-40оС с последующим оттаиванием при плюс 22-35оС снижает активность с lg 6,0 до 2,0 ЭЛД50 /см3. Он не обладает гемагглютинирующей активностью к эритроцитам уток, цыплят, кур, овец, морских свинок, кроликов, крыс и человека с 0(I) группой крови. Вирус агглютинирует эритроциты самцов белых мышей (Мусукаева Ф.Б. и др., 1996) (10).
Антигенная структура не изучена. Изоляты вируса, выделенные с 1987 по 1999 год, в антигенном отношении идентичны между собой. С антигенами коронавируса реагируют два вида моноклональных антител к нуклеопротеину и белку Е возбудителя трансмиссивного гастроэнтерита свиней(14). Установлено перекрестное антигенное родство между гемагглютининами коронавируса уток и возбудителя коронавирусного энтерита крупного рогатого скота (10). Автор статьи неоднократно получал положительные результаты в РДП при использовании САТ гипериммунной сыворотки морской свинки (на КВУ из УЭ) и САГ КВ штамма Массачусетс 41 из набора для диагностики ИБК. Контроли реакции были действительными (1990 – 1994гг).
В мае 2003 г. на канале НТВ телевидения России высказана версия о том, что коронавирус уток является предшественником возбудителя атипичной пневмонии человека (SARS), изолированного от жителей Китая, Канады и других стран в зимний период 2002-2003 гг.Филогенетические тесты, проведённые в более10 странах показали следующие результаты, отбражённые на рисунке.
Филогенетическое дерево с максимально возможной достоверностью, построенное на основе выравненных последовательностей 405 нуклеотидов открытой рамки считывания 1b гена полимеразы коронавируса (номера нуклеотидов с 15173 по 15578 на основе полного генома коронавируса крупного рогатого скота инвентарный номер NC_003045), для сравнения коронавируса SARS с другими коронавирусами человека и животных.
На дереве видны три основные антигенные группы в Роду коронавирусов (I, II и III), представленные человеческим коронавирусом 229E (HcoV-229E), собачьим коронавирусом (CcoV), вирусом инфекционного кошачьего перитонита (FIPV), вирусом инфекционного гастроэнтерита свиней (TGEV), вирусом эпидемической диареи свиней (TGEV), человеческим коронавирусом OC43 (HcoV-OC43), коронавирусом крупного рогатого скота (BcoV), гемагглютинирующим вирусом энцефаломиелита свиней (HEV), вирусом крысиного сиалодакриоаденита (SDAV), вирусом гепатита мышей (MHV), коронавирусом индюков (TcoV) и вирусом инфекционного бронхита птиц (IBV). КВ уток, выявленный в России, не был использован для исследований.Значения бутстрепов для автоматической компенсации погрешностей (на основе 100 повторов), полученные из дерева консенсуса на основе 50 % принципа большинства, показаны на основных внутренних ветвях филограммы. Длины ветвей пропорциональны количеству нуклеотидных замен.
Cравнение полных геномов коронавирусов не позволяет выявить наиболее близкий к вирусу SARS геном, хотя наибольшее число совпадающих линий наблюдается между SARS и бычьим коронавирусом 2-ого типа. Поэтому эволюционные сравнения необходимо проводить по кластерам генов. Хотя и здесь разбиение на кластеры также сопряжено с трудностями. В некоторых участках генома вируса SARS наблюдается наибольшее сходство с бычьим коронавирусом, в других участках генома вируса SARS, наоборот, сходство между птичьим коронавирусом и вирусом SARS выше. Правда, при этом степень гомологии очень низка со всеми известными коронавирусами. Блочный тип эволюции (и возможные точки рекомбинации) можно просчитать более точно, но для этого необходимо время и информация по структуре большего числа штаммов коронавирусов. Возбудитель SARS (ТОРС) наиболее близок к бычьему коронавирусу. Известно, что так называемые «бычьи» вирусы, как правило, оказываются также и вирусами мелких грызунов и даже кошек, живущих вместе или рядов с коровами. Поэтому гипотеза о кошачьей природе возбудителя ТОРС (SARS), а не утиной (птичьей), имеет законные права на существование.
Однако, все КВ, в том числе и SARS вирус, очень быстро мутируют, поэтому необходимы тщательные изучения многих штаммоввозбудителей, чтобы создать точные диагностические тесты и эффективные способы лечения. Коронавирусы обладают потенциалом изменяться больше, чем другие РНК-вирусы, главным образом, потому, что их геном значительно больше и высокая частота рекомбинации является их особенностью. Рекомбинация, вероятно, ограничивается лишь обменом фрагментами генома с близкородственными вирусами животных.
Выделение КВУ п роводили с учетом постулатов Коха: возбудитель должен обнаруживаться у всех больных с данным заболеванием; он должен быть выделен из хозяина и культивирован в чистой культуре; и культура, выделенная таким образом должна воспроизводить болезнь у других организмов, с подъемом уровня специфических антител после заражения.
Оптимальной биологической системой для выделения и культивирования вируса являются развивающиеся утиные эмбрионы 9-12-суточной инкубации. Вирус максимально накапливается в хориоаллантоисной оболочке (ХАО) и печени эмбриона (до 6,0 lg ЭЛД50), аллантоисной жидкости (lg 3,0), тушке и головном мозге (до lg 2,0). Последовательные 3 - 5 пассажей (при введении изолятов вируса в аллантоисную полость или наслоении на ХАО) способствуют повышению активности возбудителя с lg 2,0 до 4,0-6,0 ЭЛД50/см3. Куриные эмбрионы менее пригодны для культивирования: исходная летальность снижается с lg 5,0-6,0 ЭЛД50/см3 до 2,0 в первых двух пассажах и остаётся на таком уровне в последующих десяти, сохраняя патогенность для УЭ и утят.
В первично трипсинизированных культурах клеток ХАО, фибробластов УЭ и КЭ, а также перевиваемых – ПСГК, МДВК, РК-15, ПЭЛ, ПС, CV-1 и VERO коронавирус не вызывает цитопатического действия, трех-четырехкратное пассирование в этих культурах снижает концентрацию вируса и его патогенность для УЭ.
Парентеральное введение концентрированного, очищенного в градиенте плотности сахарозы вируса индуцирует образование специфических антител у белых крыс, кроликов, морских свинок и свиней.
Князевым В.П. разработан метод получения специфичных сывороток крови животных, включающий следующие этапы:
1. Репродукция вируса в УЭ 10-12-суточной инкубации.
2. Сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости с активностью не менее lg 5,5 ЭЛД50. Хранение супернатанта при температуре от плюс 40 до минус 70ºС.
3. Получение надосадка аллантоисной жидкости при 10000-13000 об/мин. Хранение при плюс 4-8ºС.
4. Очистка вируса путём осаждения его через раствор сахарозы при 40000-90000 об/мин в течение 60-120 минут. Ресуспендирование осадка вируса в 3ФР рН 7,2-7,4. Отбор проб вируса для определения биологической активности.
5. Смешивание 1:1 иммуногена (коронавируса) с полным адъювантом Фрейнда для четырёхкратного парентерального введения по 0,5 см3 крысам, кроликам и морским свинкам. Уткам вводят осветлённую аллантоисную жидкость, содержащую коронавирус с активностью не менее 6,0 lg ЭЛД50.
6. Испытание полученных специфических сывороток в РДП, РСК, ИФА и РН. Для обнаружения антигена в печени павших утят были пригодны РДП и непрямой ИФА. Антитела сывороток всех животных не обладали комплементсвязывающей и вируснейтрализующей активностью.
Эпизоотологические данные. Сезонность проявления болезни не отмечена. В естественных условиях к коронавирусной болезни восприимчивы утки пекинской и мускусной пород с 3-суточного возраста. Заболевание других видов птиц, млекопитающих и человека не выявлено. Источником возбудителя инфекции является больная птица. У уток-вирусоносителей, больных и переболевших особей в содержимом кишечника и фецесе патогенный коронавирус содержится в концентрации до 1х108 вирионов/см3. Установлена прямая корреляция между концентрацией возбудителя в кишечнике, летальностью и результатами обнаружения специфического антигена вируса в пробах паренхиматозных органов павших уток.
Возбудитель болезни выделяется во внешнюю среду из желудочно-кишечного тракта. Установлен трансовариальный путь передачи вируса и заболевание утят в 3-суточном возрасте в изолированных условиях.
Проявлению инфекции в клинически выраженной форме способствует некачественное и ограниченное кормление, а также низкий уровень зоогигиенических условий содержания птицы. Практическими ветеринарными специалистами утководческих хозяйств Московской и Оренбургской областей Калашниковым В.А. и Будкиным Ю.Е. в 1991 –1999 гг. было замечено влияние качества корма на возникновение, проявление коронавирусной болезни уток и повышение уровня летальности. Наблюдения свидетельствуют о том, что использование в качестве основного корма для утят комбикормов ПК 1 - (3 Ф) – 3150.01 – 97 – 211 и ПК 1 – (3 Ф) – 3189. 98 – 99 – 220, предназначенных для кур-несушек 15–18-месячного возраста, с содержанием в рецептуре 7,5–9,5% соевых шрот и до 8,5% известковой муки может провоцировать острое течение коронавирусной болезни уток на фоне неконтролируемого латентного вирусоносительства. В зависимости от физиологического состояния уток и вирулентности вируса течение болезни в отдельных группах продолжается от 4 до 35 суток с летальностью от 5 до 90%; пик массовой гибели чаще отмечают у 12-30-суточного молодняка.
В естественных условиях определена ассоциация коронавирусной болезни с колибактериозом и сальмонеллезом.
Течение и симптомы болезни. Коронавирусная болезнь протекает в острой, подострой и хронической формах. Первые две чаще наблюдают у молодняка, тогда как хроническую – у уток маточного поголовья.
Острая форма более отчетливо выражена у утят 5-30-суточного возраста. Продолжительность инкубационного периода и время проявления симптомов составляют от 1 до 7, реже 10 суток. Внезапно, сначала у отдельных особей, обнаруживают полупараличи и параличи ног (основной клинический признак). Затем количество больных увеличивается, и процент заболевших составляет 5-20% от общего поголовья птицы. Утята медленно передвигаются на полусогнутых конечностях или ползают на плюснах. Перед гибелью становятся апатичными, малоподвижными, ограниченно принимают корм и воду. У большинства заболевших утят отмечают серозно-катаральный коньюнктивит, ринит, синусит и диарею. В некоторых случаях регистрируют круговые движения головой и периодическое вытягивание крыльев. Затем наступает коматозное состояние и гибель. При острой форме погибает от 8 до 40% утят (1, 3, 6, 9, 10,12, 14, и 15).
Подострая форма. Угнетенное состояние, полупараличи и параличи ног, ограниченный прием корма и воды, прогрессирующее исхудание и диарею у больного молодняка регистрируют в течение 8-15 суток. Одновременно в неблагополучных группах можно выявить здоровых, больных и переболевших (маловесных) утят. Период гибели продолжается до 1-3 месяцев, летальность составляет от 30 до 90%. В связи с отсутствием напряженного иммунитета у утят-реконвалесцентов нередко наблюдали повторное проявление болезни с летальностью до 100%.
В хозяйствах, где ежегодно регистрировали болезнь молодняка, постоянно отмечали хроническую форму течения болезни у маточного поголовья, проявляющуюся, в основном, снижением уровня яйценоскости на 25-30%. У некоторых уток родительского стада развивались серозно-катаральный сальпингит и клоацит.
При нарушении зоогигиенических условий и ограничении в кормлении в группах уток-вирусоносителей возможно выявить птицу с острой и подострой формами течения болезни. При катарах летальность достигает 12%.
В экспериментальных условиях инкубационный период продолжается от 6 до 30 суток. После парентерального введения вируса с активностью не менее lg 3,0 ЭЛД50/см3 у утят и взрослых уток в 10-20% случаев развивались острая или подострая формы болезни, идентичные наблюдаемым в естественных условиях. Ассоциированное трех-четырехкратное внутримышечное и пероральное введение с интервалом 24-48 часов повышает вероятность заболевания, сокращает инкубационный период до 4-10 суток, способствует проявлению острой формы болезни и более высокому уровню летальности. В ранней стадии острой формы у уток отмечали неустойчивость походки и медленное передвижение на полусогнутых конечностях или плюснах. В дальнейшем из-за паралича ног птица лежит и ограниченно принимает корм. У некоторых особей наблюдается серозно-катаральный коньюнктивит, катаральный или катарально-геморрагический ринит, диарея с эвакуацией фекалий темно-зеленого цвета. В состоянии выраженного угнетения птица погибает на 3-10 сутки после начала проявления клинических признаков.
Многолетние наблюдения показали, что в естественных условиях доминирует форма болезни с поражением желудочно-кишечного тракта, тогда как в экспериментальных дополнительно раскрывается лёгочная, характерная для искусственного многоразового заражения птицы (Князев В.П., 1987-1992 гг.).
При подострой форме в течение 5-12 суток дополнительно отмечают прогрессирующее исхудание, задержку роста и отсутствие блеска перьевого покрова, вогнутость поверхности кожи над синусами. Вокруг глаз образуется ореол из влажного или высохшего пера. Из носовых отверстий выделяется серая мутная слизистая масса, в 5-10% случаев (перед гибелью) с примесью крови.
Переболевшие утки длительное время (20-60 дней) восстанавливают свой кондиционный вес. При этом до 10-20% реконвалесцентов в течение данного периода погибают из-за деструкции и нарушения функций внутренних органов. Искусственное заражение переболевших уток вызывает повторное их заболевание после инкубационного периода в 4-7 суток с последующим проявлением острой формы болезни и летальностью до 100%. Заражение цыплят с 5-суточного и старше возраста, а также взрослых кур, не вызывает развития коронавирусной болезни.
Патогенез. Изучен недостаточно. Трансовариальным и, предположительно, алиментарным путем коронавирус попадает в кишечник, адсорбируется на клетках эпителия ворсинок и репродуцируется в них, что сопровождается их истончением, фрагментацией и отторжением. Активное воспроизводство вирусных частиц и распад энтероцитов приводит к интенсивному возрастанию концентрации возбудителя в содержимом кишечника. Коронавирус проникает в кровеносные сосуды, депонируется в печени, селезенке, почках и легких, где индуцирует воспалительный процесс и резкое расстройство гемодинамики (Князев В.П., 1990 г.).
Патологоанатомические изменения. После 1-2-суточного периода болезни внешний вид павших утят чаще не имеет изменений. Трупы утят и уток не истощены, с тусклым, загрязненным перьевым покровом. У многих отмечается цианотичное окрашивание клюва и нижних частей ног (лап). В носовых полостях содержится прозрачная слизистая жидкость или густая серозная масса. В 20-60% случаев регистрируют катаральный или катарально-геморрагический ринит, синусит и коньюнктивит. Цвет мышц бледно-розовый, объем их меньше, чем у контрольных особей. Веретенообразное расширение пищевода некоторых утят переполнено кормом.
При острой форме на слизистой оболочке трахеи видимых изменений не отмечают, тогда как при подострой – катар или, реже (на 10-15 сутки течения болезни), дифтеритическое наложение фибрина на верхней 1/3 части органа.
Легкие интенсивно-розового или темно-красного цвета. В 20-30% случаев регистрируют катаральную пневмонию.
В железистом желудке отмечают катаральное воспаление и обильное содержание серо-белой слизи. В 40-80% наблюдают катарально-геморрагический энтерит, чаще 12-перстной кишки и тонкого отдела кишечника. На слизистой оболочке клоаки и прямой кишки постоянно присутствуют
|
|
Типы сооружений для обработки осадков: Септиками называются сооружения, в которых одновременно происходят осветление сточной жидкости...
Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...
История развития хранилищ для нефти: Первые склады нефти появились в XVII веке. Они представляли собой землянные ямы-амбара глубиной 4…5 м...
История развития пистолетов-пулеметов: Предпосылкой для возникновения пистолетов-пулеметов послужила давняя тенденция тяготения винтовок...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!