Гликопротеины ВИЧ», gp160, gp120 и gp41.

(a) В 1983 г. (20) и снова в 1984 г. Монтанье и его коллеги (29) заявили, что, хотя p45 / 41 реагировал с сывороткой пациентов, этот белок был не вирусным, а повсеместно распространенным клеточным белком, актином. Интересно, что даже в этом году Монтанье использовал следующие критерии для определения положительного результата Вестерн-блоттинга: «наличие антител против продуктов гена env (gp160, gp120) и реактивность хотя бы с одним продуктом гена gag (критерии ВОЗ) "(30). Однако на сегодняшний день никакие другие критерии, даже критерии ВОЗ, не исключают p41. Критерии ВОЗ: «2 полосы env (предшественник, внешний gp или трансмембранный gp» с любыми другими полосами или без них (трансмембранный = gp41) (31) В отличие от Монтанье, Галло считает gp41 наиболее специфичным белком ВИЧ.

345 аминокислот, которые могут быть гликозилированы. Размер этих предсказанных продуктов согласуется с обнаружением большого гликозилированного белка Mr 120-160K в инфицированных HTLV-III клетках, который, вероятно, является гликозилированным предшественником гена env, и меньшим, ассоциированным с вирионом gp41, который, вероятно, является мембранным белком».. (32) Однако в исследовании, опубликованном в 1987 году Галло и его коллегами, они выполнили "компьютерный анализ" "аминокислотных последовательностей комплексов белков оболочки, полученных из нуклеотидных последовательностей семи изолятов вируса СПИДа". Сообщалось, что «Хотя общие размеры и структуры семи поверхностных белков довольно похожи, полученные аминокислотные последовательности существенно различаются. В среднем, Фактически, доказательства «изоляции» HL23V превзошли доказательства HTLV-I и ВИЧ по крайней мере в двух аспектах. В отличие от ВИЧ, группа Галло: (a) сообщила об обнаружении активности обратной транскриптазы в свежих, некультивируемых лейкоцитах; (34) (b) опубликовала электронную микрофотографию вирусоподобных частиц, образующих полосы при плотности сахарозы 1,16 г / мл. (35) После открытия HL23V некоторые исследователи попытались определить его распространенность с помощью тестов на антитела (36), в то время как другие были заинтересованы в определении специфичности реакций антител. В число первых вошли два самых известных эксперта по ВИЧ Райнхард Курт и Робин Вайс и их коллеги, которые для этой цели использовали " вспомогательный вирус, связанный с саркомой обезьяны (SSAV), и штамм M7 эндогенного вируса павиана (BEV) для исследования сыворотки человека на предмет специфических антител. Также включен вирус (HL23V-1), первоначально выделенный из культивированных лейкоцитов периферической крови пациента с острым миелогенным лейкозом. Было показано, что HL23V-1 содержит смесь двух вирусов, один из которых тесно связан с SSAV, а другой - с BEV ", и обнаружено, что" исследование сывороток человека от здоровых людей выявило присутствие встречающихся в природе антител, которые реагируют с белками в анализах радиоиммунопреципитации. вирусов млекопитающих типа C, «включая внутренние (gag) и оболочечные (env) белки HL23V, SSAV и BEV, и в заключение,»

(b) К 1989 году исследователи из Нью-Йорка показали, что в ходе вестерн-блоттинга «компоненты, визуализированные в области 120–160 кДа, не соответствуют gp120 или его предшественнику, а представляют собой олигомеры gp41». Также было показано, что полученная картина WB зависит от многих факторов, включая температуру и концентрацию додецилсульфата натрия, используемого для разрушения «чистого вируса». "Путаница в идентификации этих полос привела к неверным выводам в экспериментальных исследованиях. Точно так же некоторые клинические образцы могли быть ошибочно идентифицированы как серопозитивные, исходя из предположения, что эти полосы отражают специфическую реактивность против двух различных вирусных компонентов и соответствуют критерию истинности или вероятная позитивность. доказал наличие в культурах бесклеточных частиц, имеющих выступы (шипы). В одной из своих последних публикаций Гелдерблом и его коллеги подсчитали, что сразу после высвобождения «частицы ВИЧ» имеют в среднем 0,5 выступа на частицу, но также отметили, что «возможно, что структуры, напоминающие выступы, могут наблюдаться даже при наличии gp120 отсутствует, т. е. ложные срабатывания». (46) Принято, что gp120 присутствует только в выступах (шипах). Поскольку нет доказательств присутствия выступов в бесклеточных частицах, даже сразу после высвобождения из клетки, gp120 не может присутствовать в Вестерн-блоте. В одной из своих последних публикаций Гелдерблом и его коллеги подсчитали, что сразу после высвобождения «частицы ВИЧ» имеют в среднем 0,5 выступа на частицу, но также отметили, что «возможно, что структуры, напоминающие выступы, могут наблюдаться даже при наличии gp120 отсутствует, т. е. ложные срабатывания». (46) Принято, что gp120 присутствует только в выступах (шипах). Поскольку нет доказательств присутствия выступов в бесклеточных частицах, даже сразу после высвобождения из клетки, gp120 не может присутствовать в Вестерн-блоте. В одной из своих последних публикаций Гелдерблом и его коллеги подсчитали, что сразу после высвобождения «частицы ВИЧ» имеют в среднем 0,5 выступа на частицу, но также отметили, что «возможно, что структуры, напоминающие выступы, могут наблюдаться даже при наличии gp120 отсутствует, т. е. ложные срабатывания». (46) Принято, что gp120 присутствует только в выступах (шипах). Поскольку нет доказательств присутствия выступов в бесклеточных частицах, даже сразу после высвобождения из клетки, gp120 не может присутствовать в Вестерн-блоте.

Белок pol HIV», стр. 31/34.

В 1987 году Хендерсон выделил p30-32 и p34-36 «ВИЧ, очищенного двойным связыванием» в градиентах плотности сахарозы. Сравнивая аминокислотные последовательности этих белков с белками DR гистосовместимости класса II, они пришли к выводу, что «альфа- и бета-цепи DR оказались идентичными белкам p34-36 и p30-32 соответственно»; (47)

Gag-белок ВИЧ», p24

Что касается Монтанье, p24 - это белок ВИЧ, и в течение как минимум трех лет после введения теста на антитела к ВИЧ, полоса p24, обнаруженная в WB, рассматривалась большинством лабораторий, включая CDC, как доказательство того, что ВИЧ-инфекция. В настоящее время имеется достаточно доказательств того, что антитела, которые реагируют с p24, повсеместно встречаются как в сыворотке крови человека, так и в сыворотке животных, что можно интерпретировать только как то, что либо p24, либо антитела, либо и то и другое не являются ВИЧ-специфичными, или значительная часть как людей, так и людей животные инфицированы ВИЧ. Например, если полоса p24 в WB считается доказательством ВИЧ-инфекции, то в результате заражаются около 30% людей, которым переливают ВИЧ-отрицательную кровь. (48) Поскольку, по данным Группы клинических испытаний вакцины AID, (49) " ВИЧ-инфекция должна быть распространена среди здоровых людей без риска. Фактически, из-за таких доказательств, начиная с 1987 года, за исключением, возможно, всего двух, Монтанье и исследователей, проводящих многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в WB. SERA, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! ВИЧ-инфекция должна быть обычным явлением среди здоровых людей без риска. Фактически, из-за таких доказательств, начиная с 1987 года, за исключением, возможно, всего двух, Монтанье и исследователей, проводящих многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в WB. SERA, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! Монтанье и исследователи, проводящие многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в сыворотке крови, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! Монтанье и исследователи, проводящие многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в сыворотке крови, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция происходит между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством изоляции ВИЧ!

Очевидно, что обнаружение белка, даже если известно, что он специфичен для вируса, в сыворотке или даже в культуре, не является доказательством выделения или виремии. То, что такой вывод не является конкретным, лучше всего проиллюстрировать несколькими примерами. В 1992 году Йорг Шупбах, главный автор одной из первых четырех статей 1984 года, опубликованных группой Галло по выделению ВИЧ, сообщил, что посевы цельной крови у 49/60 (82%) «предположительно неинфицированных, но серологически неопределенных лиц и 5 / 5 серонегативных доноров крови оказались положительными на p24». (50) Если p24 является белком ВИЧ, то он должен присутствовать у всех пациентов со СПИДом, если не у всех серопозитивных пациентов и не у людей, не подверженных риску развития СПИДа. В 1989 г. Дэвид Хо и его коллеги использовали измерения p24 в сыворотке и культурах неинфицированных клеток, культивируемых с плазмой «инфицированных» пациентов, для оценки активного вируса, «инфекционного ВИЧ-1», виремии, вирусной нагрузки. Сыворотка 14 из 53 пациентов, чьи плазматические культуры были положительными, была отрицательной на p24. Они пришли к выводу: «Таким образом, плазменная культура была более чувствительной, чем измерение сывороточного антигена p24 при обнаружении наличия бесклеточного ВИЧ-1 в крови». Они также сообщили, что лечение AZT в течение четырех недель вызывало «94-процентное снижение нагрузки внеклеточного вируса». (51) Даже Джексон и др., Которые заявляют, что общий уровень «изоляции ВИЧ» составляет 98,3%, могут обнаружить p24 в сыворотке крови. 42% больных СПИДом, 37% пациентов с ARC и 17% бессимптомных серопозитивных лиц (52), что намного ниже, чем у реципиентов трансплантатов органов, не инфицированных ВИЧ. «У одного реципиента почки (донор был отрицательным по антигену p24), у которого через 3 дня после трансплантации развились лихорадка, слабость, миалгии, кашель и диарея, все» бактериологические, паразитологические и вирусологические образцы оставались отрицательными [включая ПЦР на ВИЧ]. Единственным положительным результатом был антигенемический p24, положительный с наборами антигенов Abbot с очень высокими титрами 1000 пг / мл для поликлональных и 41 пг / мл для моноклональных анализов. Эта антигенемия была полностью нейтрализована с помощью антисыворотки Abbot к p24... Через 2 месяца после трансплантации все анализы на p24-антиген дали отрицательный результат без появления антител против ВИЧ. Наблюдение за связыванием белка 25-30 кДа с поликлональными сыворотками человека против ВИЧ после иммуноблотов с реактивными сыворотками вызывает несколько вопросов. Этот белок может быть связан с иммунным ответом хозяина на трансплантаты или трансплантаты... Его раннее обнаружение после трансплантации может указывать на последствия иммуносупрессивной терапии... Таким образом, белок 25-30 кДа можно сравнить с антигеном p28, недавно описанным с человеческим T лимфотропно-эндогенная последовательность вируса, связанного с клетками... Характеристика этого белка размером 25-30 кДа может внести важный вклад в обнаружение эндогенных ретровирусов, связанных с ВИЧ-1». (54) Разногласия между Монтанье и Галло по поводу того, какие белки на самом деле белки «ВИЧ» не ограничивались gp41, но включали p24. Монтанье всегда упоминал, что»

Галло всегда утверждал, что существует гомология между генами gag HTLV-I, II и ВИЧ (56), и что многие черты, присущие всем «человеческим ретровирусам», включают «небольшой (p24 / p25) главный капсидный белок; p24 перекрестно-реактивный антигенный детерминант. детектируется либо гетерологичной (кроличьей) антисывороткой, либо человеческими моноклональными антителами». (57) Действительно, gag обозначает группоспецифичные антигены. Еще в 1974 году Гелдерблом и его коллеги писали: «В то время как антигены оболочки вируса в первую очередь специфичны к вирусному штамму, основная масса внутренних белков вириона с молекулярной массой (mw) от 10 000 до 30 000 дней является групповой (gs) для вирусов, происходящих от данного вида животных (gs-spec. антигены). Было обнаружено, что основной белковый компонент онкорнавирусов С-типа [ретровирусов] млекопитающих с молекулярной массой в диапазоне 30 000 дней, помимо gs spec. антиген, антигенная детерминанта, которая является общей для вирусов C-типа многих видов млекопитающих, включая обезьян, и поэтому была названа межвидовым антигеном gs (gs-interspec.)»(58). В 1989 году Уильям Блаттнер, известный эксперт по ВИЧ / СПИДу, заявил: «Возможно, было бы целесообразно использовать зонды вирусного антигена для поиска перекрестно-реактивных антител, поскольку некоторые вирусные белки, особенно белки полимеразы и gag, могут быть высококонсервативными между подтипами вируса». (59) Таким образом, даже если p24 должен был быть специфичным для ретровирусов, он не может быть ВИЧ-специфичным. Если p24, обнаруженный в супернатантах культур, является компонентом подобных частиц, вирусных или невирусных, тогда в градиентах плотности весь p24 должен находиться по крайней мере в одной полосе (фракции), даже если не при плотности 1,16 г / мл. То, что это не так, было продемонстрировано самим Монтанье. В одном эксперименте Монтанье и его коллеги разделили градиент плотности на шестнадцать фракций. Пик RT был обнаружен во фракциях пять и шесть, в то время как p24 и gp110 присутствовали во всех фракциях, кроме трех (1, 2, 3). (28)