Существование ВИЧ предполагает, что инфицированные клетки содержат уникальную вирусоспецифичную ДНК из 9150 нуклеотидов, которая не может быть обнаружена в ДНК неинфицированных клеток».

Геном ретровируса не может быть идентифицирован на основании длины фрагмента РНК (кДНК) и его присутствия в некоторых, но не в других клетках.

8.1.1 При использовании фрагментов «ДНК ВИЧ» в качестве зондов для гибридизации или праймеров положительные результаты как при стандартной гибридизации, так и при ПЦР были получены для ДНК «неинфицированных» клеток человека и насекомых (см. 6.4.4). Это факт, что: (а) гибридизация нуклеиновых кислот экзогенных ретровирусов «от разных видов дает образец, который аналогичен филогенному родству между их естественными хозяевами», (228) взаимосвязь, которая привела ретровирологов, включая Галло, к заключению, что экзогенные ретровирусы «происходят из клеточных генов»; (b) Существование эндогенных ретровирусов человека было доказано с помощью гибридизационных зондов, полученных из эндогенных и экзогенных ретровирусов животных. Если это так, и если «ДНК ВИЧ» является геномом экзогенного ретровируса человека, геном незараженного человека должен содержать последовательности, которые будут гибридизоваться с зондами «ДНК ВИЧ». Могут быть две причины, по которым о таких результатах не сообщают чаще: (i) Большинство исследователей ВИЧ игнорируют одно из самых фундаментальных требований фундаментальных экспериментальных исследований, а именно контроль. В редких случаях, когда используются средства управления, они не подходят (см. 6.1). В 1970-х годах Галло, Гиллепси и их коллеги говорили, что успех «гибридизационного теста, по-видимому, зависит от биологической истории вируса» и от физиологического состояния клеток. (125, 228) В большом исследовании, опубликованном в 1975, озаглавленный «Взаимосвязь между компонентами вирусов РНК опухолей приматов и цитоплазмы клеток лейкемии человека: последствия для лейкемогенеза», цель заключалась в том, чтобы показать, что клетки лейкемии человека, но не нормальные клетки, обладают свойствами, связанными с ретровирусами, включая геномные последовательности ретровирусов. Сообщалось, что «цитоплазматическая частица лейкозных клеток крови человека, которая содержит активность обратной транскриптазы, способна синтезировать ДНК in vitro, используя эндогенную РНК как в качестве матрицы, так и в качестве праймера. Эта эндогенная активность использовалась для изучения природы самой частицы. Многие внутриклеточные цитоплазматические частицы или органеллы (обычно описанные в Таблице 8) могут осуществлять эндогенный синтез ДНК in vitro. К ним относятся митохондрии, небольшие цитоплазматические частицы низкой плотности, 1,10-1,16 г / см3 в градиентах плотности сахарозы и маленькие цитоплазматические частицы более высокой плотности. плотность 1,17-1,19 г / см3 в градиентах плотности сахарозы... нормальные доноры... Эти частицы осуществляли эндогенный синтез ДНК, и полученная популяция ДНК содержала последовательности, связанные с геномами РНК-опухолевых вирусов... Последовательности, связанные с вирусами, были обнаружены у пациентов с несколькими типами лейкемии, включая AML, CML, CML -A и CLL... Попытки обнаружить вирусные последовательности в РНК лейкозных клеток путем гибридизации ДНК, синтезированной вирусами животных, с РНК, выделенной из небольших цитоплазматических частиц (эксперимент по взаимной гибридизации) в наших руках, не смогли найти различия в последовательностях в РНК лейкозных клеток. и деление нормальных [стимулированных PHA] лейкоцитов периферической крови человека. Сообщалось, что радиоактивные ДНК-зонды, синтезированные MuLVR, гибридизуются с цитоплазматической РНК лейкозных, но не нормальных лейкоцитов. Разница между нашими экспериментами и теми, о которых сообщалось ранее, состоит в том, что нормальные человеческие клетки, используемые в качестве источника РНК, активно делятся, в то время как большинство из тех, что использовались в предыдущих исследованиях, не делятся» (125) (курсив наш); (ii)«РНК ВИЧ «не является геномом экзогенного или эндогенного ретровируса или даже транскрибированным фрагментом ДНК, присутствующим в не«шоковых»клетках.

8.1.2. Большинство положительных результатов в «неинфицированных клетках» было обнаружено при использовании зондов и праймеров для одного или максимум двух генов или даже фрагментов генов. «Подавляющее большинство» исследований ВИЧ охватывает «от 2% до 30% генома» (163). Однако обнаружение фрагмента гена или даже гена не является доказательством существования генома ВИЧ.

8.1.3 нуклеотидные последовательности с использованием клона BH10, но с добавлением: «Последовательность оставшихся 182 п.н. провируса HTLV-III, не присутствующего в клоне BH10 (включая часть R, V5, сайт связывания праймера тРНК и часть последовательности заголовка), была полученный из клона HXB2... Следует отметить присутствие пятой открытой рамки считывания (нуклеотиды 8, 344-8991), обозначенной 3 'orf, которая присутствует в клоне BH8, но усечена в BH10». Они пришли к выводу: «Каждая полная нуклеотидная последовательность двух провирусных ДНК Т-клеточного лейкоза человека III типа (HTLV-III) имеет четыре длинные открытые рамки считывания, первые две соответствуют генам gag и pol. Четвертая открытая рамка считывания кодирует две функциональные полипептиды, крупный предшественник главного гликопротеина оболочки и меньший белок, полученный из 3 '

На сегодняшний день не сообщается о двух «ДНК ВИЧ» одинаковой длины, и, более того, считается, что большинство «геномов ВИЧ» являются дефектными. Даже если все гены могут быть амплифицированы с помощью ПЦР, это еще не означает, что присутствует «полноразмерный геном ВИЧ». Например, в 1995 г. ген nef 3 реципиентов крови из когорты Сиднейского банка крови и донора был амплифицирован с помощью ПЦР. «Полученные в результате амплифицированные фрагменты для 3 реципиентов имели размер от 410 п.н. до 680 п.н.. Один реципиент дал фрагменты двух размеров... Амплифицированный фрагмент от донора (D36) имел длину ~ 550 п.н., что указывает на делецию ~ 290 п.н.... по сравнению с фрагментом молекулярного клона pNL4-3 длиной ~ 840 п.н. "(231) В 1995 г. Дэвид Хо и его коллеги" проанализировали с помощью полимеразной цепной реакции и прямого секвенирования 57 вирусных последовательностей от 47 человек североамериканского, австралийского и гаитянского происхождения, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), сосредоточив внимание на областях V1 и V2 gp120. В области V1 наблюдался обширный полиморфизм длин, что затрудняло выравнивание последовательностей. Гипервариабельный локус V2 также демонстрирует значительные вариации длины, тогда как фланкирующие области были относительно консервативными». (232) Что касается Галло, то даже не требуется, чтобы геном«ВИЧ»обладал какими-либо генами, чтобы быть патогенными». предполагает, что дефектные вирионы, такие как частицы без РНК и / или вирусные белки, экспрессируемые в отсутствие образования частиц, способствуют патогенезу СПИДа»(114) Заражены вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) австралийского и гаитянского происхождения, сконцентрированным на областях V1 и V2 gp120. В области V1 наблюдался обширный полиморфизм длин, что затрудняло выравнивание последовательностей. Гипервариабельный локус V2 также демонстрирует значительные вариации длины, тогда как фланкирующие области были относительно консервативными». (232) Что касается Галло, то даже не требуется, чтобы геном«ВИЧ»обладал какими-либо генами, чтобы быть патогенными». предполагает, что дефектные вирионы, такие как частицы без РНК и / или вирусные белки, экспрессируемые в отсутствие образования частиц, способствуют патогенезу СПИДа»(114) Заражены вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) австралийского и гаитянского происхождения, сконцентрированным на областях V1 и V2 gp120. В области V1 наблюдался обширный полиморфизм длин, что затрудняло выравнивание последовательностей. Гипервариабельный локус V2 также демонстрирует значительные вариации длины, тогда как фланкирующие области были относительно консервативными». (232) Что касается Галло, то даже не требуется, чтобы геном«ВИЧ»обладал какими-либо генами, чтобы быть патогенными». предполагает, что дефектные вирионы, такие как частицы без РНК и / или вирусные белки, экспрессируемые в отсутствие образования частиц, способствуют патогенезу СПИДа»(114) В области V1 наблюдался обширный полиморфизм длин, что затрудняло выравнивание последовательностей. Гипервариабельный локус V2 также демонстрирует значительные вариации длины, тогда как фланкирующие области были относительно консервативными». (232) Что касается Галло, то даже не требуется, чтобы геном«ВИЧ»обладал какими-либо генами, чтобы быть патогенными». предполагает, что дефектные вирионы, такие как частицы без РНК и / или вирусные белки, экспрессируемые в отсутствие образования частиц, способствуют патогенезу СПИДа»(114) В области V1 наблюдался обширный полиморфизм длин, что затрудняло выравнивание последовательностей. Гипервариабельный локус V2 также демонстрирует значительные вариации длины, тогда как фланкирующие области были относительно консервативными». (232) Что касается Галло, то даже не требуется, чтобы геном«ВИЧ»обладал какими-либо генами, чтобы быть патогенными». предполагает, что дефектные вирионы, такие как частицы без РНК и / или вирусные белки, экспрессируемые в отсутствие образования частиц, способствуют патогенезу СПИДа»(114)

8.1.4 При поиске литературы по ВИЧ поразительно, что на сегодняшний день не было секвенировано ни одного «полноразмерного генома ВИЧ» длиной 9150 п.н. или любой длины из свежих некультивируемых клеток. «Низкое содержание провирусной ДНК ВИЧ-1 в клинических образцах является препятствием для полногеномного анализа провируса ВИЧ-1, как это происходит in vivo». Все «полноразмерные геномы ВИЧ», секвенированные до сих пор, были получены из культивируемых клеток на самом деле «Полностью секвенированные полноразмерные геномы ВИЧ-1 в текущей базе данных Лос-Аламоса были получены, почти без исключения, из принятых изолятов ВИЧ-1. для роста в непрерывных [лейкемических или трансформированных] линиях Т-клеток». По состоянию на конец 1995 г. «было зарегистрировано только 19 последовательностей, охватывающих полный геном ВИЧ-1 размером 10 КБ, и большинство из них происходит от изолятов ВИЧ-1 генотипа B, экспрессированных в непрерывных клеточных линиях. Пять из восьми наиболее распространенных генетических подтипов ВИЧ не имеют единого полноразмерного секвенированного прототипа». (193) В настоящее время также известно, что: (а) пациенты, принадлежащие к группам риска СПИДа, подвергаются воздействию высоких доз окислители и что эти агенты оказывают сильное воздействие на ДНК и РНК; (74,79) (b) в культурах «ВИЧ» не может быть обнаружен, если культуры не обрабатываются химическими или физическими окислителями, включая PHA; (c) существуют структурные и функциональные аномалии в геноме лимфоцитов у больных СПИДом ". У больных СПИДом обнаружен повышенный уровень синтеза спонтанной репарации ДНК (в 3 раза выше), увеличенное количество разрывов одноцепочечной ДНК (11-18%), снижение способности восстанавливать повреждения ДНК (2 -2. даже если бы все они имели одинаковую длину 9150 п.н. и идентичные последовательности, это не более чем случайная находка среди множества молекулярных видов, присутствующих в культурах, или даже некультивируемых лимфоцитов, которые не имеют ничего общего с ретровирусным геномом и которые выглядят как в результате условий in vivo или in vitro или того и другого и естественного отбора?; (ii) если существует такая высокая скорость рекомбинации между геномами ВИЧ, не возможно ли, чтобы тот же процесс имел место между эндогенными ретровирусными геномами? Если это также так, то как можно узнать, что 19 «полноразмерных геномов ВИЧ» - это не что иное, как рекомбинации между эндогенными ретровирусными последовательностями, эндогенными ретровирусными последовательностями и клеточными последовательностями, например, неретровирусными ретроэлементами? Как уже отмечалось, Исследователи ВИЧ редко используют контроли и датируют те, которые не использовали соответствующие контроли, то есть ткани или культуры, полученные от больных, не страдающих СПИДом, с идентичными экспериментальными методами и условиями, за исключением наличия предполагаемого ретровирусного материала. Однако, если бы исследователей ВИЧ или других лиц, способных проводить такие эксперименты, побудили бы приложить столько же усилий, сколько они вложили в изучение «ВИЧ» из лимфоцитов пациентов из группы риска, в изучение лимфоцитов пациентов, не входящих в группу риска, но: (а) которые подвергаются воздействию агенты (кроме «ВИЧ») и дозы, аналогичные таковым в группах высокого риска; (b) которые имеют структурные и функциональные аномалии, сходные с лимфоцитами больных СПИДом или лиц из группы риска; (в) использование тех же методов и условий культивирования, что и исследователи «ВИЧ»; Можно ли исключить возможность того, что еще через десять лет эти исследователи не смогут сообщить о «19 полноразмерных геномах ВИЧ» у этих людей?

8.2 «Например, Джексон и др. Проверили клетки крови 409 с положительными антителами, в том числе 144 больных СПИДом и 265 здоровых людей. Кроме того, были протестированы 131 антитела с отрицательным результатом. Подмножества ВИЧ-специфической ДНК, размер и последовательность которых определяются ВИЧ- специфические праймеры (стартовые сигналы для селективной амплификации) были обнаружены у 403 из 409 положительных по антителам, но ни у одного из 131 человека с отрицательными антителами (Jackson et al., 1990)».

8.2.1. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) от 409 человек, которые были антителами к ВИЧ-1 по данным вестерн (иммуно) блоттинга (56 пациентов со СПИДом, 88 пациентов с ARC и 265 бессимптомных лиц) были культивированы ". Используя ранее описанный чувствительный метод", анализ p24, указанный выше, они сообщили, что «ВИЧ-1 может быть изолирован от 100% (56 из 56) пациентов со СПИДом, 99% (87 из 88) пациентов с ARC и 98% (259 из 265) ВИЧ-инфицированных. 1 человек без симптомов с положительной реакцией на антитела ". Ни один из «131 человека с отрицательными антителами к ВИЧ-1 не имеет положительной культуры». Используя тот же анализ p24 (Abbot), они протестировали сыворотку у 403 из 409 человек. Тест был положительным у 23/56 (42%) пациентов со СПИДом, 31/88 (57%) пациентов с ARC и 44/259 (17%) лиц с бессимптомным положительным антителом. По неустановленным причинам положительный анализ сыворотки считается доказательством обнаружения «антигена ВИЧ-1 в сыворотке», в то время как такой же положительный тест на культуру считается доказательством «выделения ВИЧ-1» из культуры. Есть много причин сомневаться в интерпретации анализа p24: (a) Анализ p24 представляет собой реакцию антитело / антиген и подвержен повсеместной фоновой реактивности. В этом контексте, даже если «два последовательных отбора надосадочных жидкостей с последующим отбором образцов, показывающим большую реактивность», даже если они будут двойными или тройными, например, 30 и 60 или 30 и 90, оба показания могут быть не чем иным, как фоновыми показаниями. Критерии Джексона и его коллег даже не согласуются с критериями, используемыми Хо и др., Которые столь же произвольны; " удельная реактивность ниже отсечки. Единственный способ решить эту проблему - сравнить реактивность с наличием или отсутствием ВИЧ, определяемой путем выделения вируса. На сегодняшний день об этом не сообщается. Даже без золотого стандарта неспецифичность теста на антиген p24 настолько очевидна, что он признан не меньшим авторитетом в области тестирования на ВИЧ, чем Филип Мортимер и его коллеги из Лабораторной службы общественного здравоохранения Великобритании». Опыт показал, что ни Культура ВИЧ и тесты на антиген p24 не имеют большого значения в диагностическом тестировании. Они могут быть нечувствительными и / или неспецифическими». (236) Тот факт, что в экспериментах с«исследованиями серийных разведений супернатантов культур»тест p24 более вероятен. быть положительным, чем RT не является доказательством того, что тест p24 " (237) (b) Нет никаких научных причин и, по сути, никаких здравых причин, по которым реакции, такие как обратная транскрипция или реакции антитело / антиген, даже если они специфичны для ретровирусов, могут считаться доказательством выделения вируса. Если эти явления считаются доказательством выделения вируса, тогда как тест на беременность (измерение белка áHCG в крови или моче с использованием антител), так и оценка сердечных ферментов при подозрении на инфаркт миокарда также должны считаться доказательством «изоляции» плаценты. или сердце соответственно. (237) (b) Нет никаких научных причин и, по сути, никаких здравых причин, по которым реакции, такие как обратная транскрипция или реакции антитело / антиген, даже если они специфичны для ретровирусов, могут считаться доказательством выделения вируса. Если эти явления считаются доказательством выделения вируса, тогда как тест на беременность (измерение белка áHCG в крови или моче с использованием антител), так и оценка сердечных ферментов при подозрении на инфаркт миокарда также должны считаться доказательством «изоляции» плаценты. или сердце соответственно.

8.2.2 Чтобы улучшить анализ p24, ДНК, экстрагированную из замороженных некультивируемых PBMC их семи «субъектов с отрицательными антителами в культуре» и «23 здоровых гетеросексуальных лиц с отрицательными антителами к ВИЧ-1 и отрицательными культурами», анализировали с помощью ПЦР. Кроме того, «Чтобы сравнить чувствительность и специфичность» двух тестов, ПЦР и культивирования, в обоих тестах были проанализированы PBMC 59 серопозитивных и 20 серонегативных индивидуумов. «Амплификации ВИЧ-1 были выполнены с использованием пары праймеров SK38-39, которая амплифицирует консервативную область из 115 пар оснований гена gag (нуклеотиды 1551–1665 ВИЧ SF23: номер доступа в GenBank K02007). продукт был обнаружен гибридизацией олигомеров, метод, при котором зонд, меченный 32р-концом (SK19), с нуклеотидной областью gag от 1595 до 1635 гибридизуется в растворе с одной цепью амплифицированной последовательности. Затем дуплекс зонд-мишень разделяли электрофорезом на 10% полиакриламидном геле и проводили авторадиографию». Ни у одного из серонегативных индивидов не было зарегистрировано положительных результатов ПЦР-теста.«Все исходные образцы ДНК из 7 культур с положительными антителами к ВИЧ -отрицательные пациенты»были зарегистрированы как положительные. При сравнении тестов ПЦР и посевов 57 из 59 пациентов имели положительный результат ПЦР, а 57 из 59 пациентов имели положительный посев. 2 человека с отрицательным результатом ПЦР имели положительные посевы, а два отрицательных посева. у людей был положительный результат ПЦР. Авторы пришли к выводу, что " Мы выделили последовательности ДНК ВИЧ-1 или обнаружили последовательности ДНК ВИЧ-1 из PBMC всех 409 антител к ВИЧ-1. Ни один из 131 человека с отрицательными антителами к ВИЧ-1 не был положительным по культуре ВИЧ-1, а последовательности ДНК ВИЧ-1 не были обнаружены с помощью ПЦР в образцах крови 43 серонегативных лиц. Кроме того, ПЦР на ВИЧ-1 и посев на ВИЧ-1 сравнивали при тестировании PBMC 59 больных гемофилией с положительными антителами к ВИЧ-1 и 20 отрицательных по антителам ВИЧ-1. Было обнаружено, что чувствительность и специфичность обоих методов составляет не менее 97 и 100% соответственно... Наша способность напрямую демонстрировать ВИЧ-1-инфекцию у всех людей с положительной реакцией на антитела к ВИЧ-1 дает определенную поддержку того, что положительность антител к ВИЧ-1 связана с представляют инфекцию ВИЧ-1»(52). Другими словами,

Заявления Джексона и др. Не подтверждаются даже другими лабораториями. Согласно Джексону и др., До 1990 года только три небольших исследования сообщали о «100% -ной изоляции ВИЧ-1 от больных СПИДом». Во всех других исследованиях «ВИЧ-1 не был изолирован от 6 до 50% зарегистрированных серопозитивных случаев СПИДа с ВИЧ-1. Скорость восстановления культуры ВИЧ-1 у бессимптомных пациентов с положительными антителами к ВИЧ-1 в целом была еще ниже, только От 20 до 42% в некоторых исследованиях». Последнюю ситуацию лучше всего иллюстрирует крупное исследование ВОЗ, опубликованное в 1994 году. В период с 1992 по 1993 год в Бразилии, Руанде, Таиланде и Уганде было собрано 224 образца у бессимптомных «ВИЧ-инфицированных» людей. Серостатус был сначала подтвержден в стране происхождения, а затем в " снижение уровня антигена p24 не обязательно связано с положительным клиническим исходом». В связи с этим для«Мониторинга бремени вируса иммунодефицита человека типа 1 в плазме человека»авторы использовали«анализ амплификации сигнала разветвленной ДНК», который«предлагает улучшенная чувствительность»и по сравнению с«двумя другими стандартными анализами вирусной нагрузки»; плазменная культура с конечным разведением и антиген p24 сыворотки с диссоциированным иммунным комплексом (ICD)». Они сообщили, что«анализ ДНК ВИЧ-1 и сывороточного антигена p24 по ICD проводился на образцах сыворотки 102 серопозитивных (подтвержденных вестерн-блоттингом) пациентов, которые были проходя скрининг для включения в клинические испытания... из 102 пациентов 75 (74%) были положительными на РНК ВИЧ по анализу bDNA и 61 (60%) были положительными по тесту ICD p24. Только подгруппа пациентов (n = 56: диапазон клеток CD4, 29–394; медиана 160) была протестирована на виремию плазмы с помощью культивирования вирусов; 34 (61%) были положительными по культуре, в то время как 50 (89%) были положительными при анализе bDNA и 39 (70%) были положительными при анализе ICD p24 ". (239) Как тогда можно утверждать, что" практически все люди, содержащие ДНК ВИЧ, также содержат антитела против штамма ВИЧ Монтанье»и«большинство, но, конечно, не все люди, у которых отсутствует ДНК ВИЧ, не содержат таких антител»?

ЗАКЛЮЧЕНИЕ И КОММЕНТАРИИ

Поскольку Джексон и др. Не тестировали всех 409 пациентов и всех 131 человека с отрицательными антителами на наличие «ДНК ВИЧ» с помощью ПЦР, а тестировали только 66 пациентов и максимум 43 человека с отрицательными антителами; не секвенировали амплифицированные сегменты и не определяли специфичность ПЦР с использованием единственного действительного золотого стандарта, выделения ВИЧ, они не могли сообщить «ВИЧ-специфические подмножества ДНК... в 403 из 409 положительных антител», но ни один из 131 человека с отрицательными антителами». Более того, Джексон и др. Признали, что их метод ПЦР не доказал существование полноразмерного генома ВИЧ, а только «что пациенты со СПИДом, а также бессимптомные люди с положительной реакцией на антитела к ВИЧ-1 имеют генетический материал ВИЧ-1». Кроме того, для их ПЦР-определений Джексон и др. Использовали небольшой фрагмент гена gag в качестве праймера. Но: (а) поскольку самые известные эксперты в области ВИЧ согласны с тем, что гены gag ретровирусов гомологичны, отрицательный результат ПЦР Джексона и др. Дает все 43 «отрицательных по антителам» индивидуума, у которых, по крайней мере, должен быть ретровирус, присутствующий «во всех нас. ", остается необъяснимым; (b) обнаружение положительного результата ПЦР с использованием небольшого фрагмента гена gag в качестве праймера не является доказательством существования «полноразмерного генома ВИЧ» или даже существования «полноразмерного гена gag ВИЧ». Как уже упоминалось, к 1989 году исследователи из Института Пастера пришли к выводу, что «задача определения ВИЧ-инфекции в молекулярных терминах будет сложной». Фактически, еще в 1973 году ретровирологи знали, что необычная природа ретровирусов «станет камнем преткновения для любого генетического анализа РНК-опухолевых вирусов». (240) Тем не менее, по крайней мере, некоторые эксперты по ВИЧ, включая Джексона и др., настаивают на определении ВИЧ-инфекции в терминах генетики. С другой стороны, анализ имеющихся в настоящее время данных о ретровирусах показывает, что все ретровирологи, похоже, согласны с тем, что единственным наиболее решающим фактором в доказательстве существования уникального ретровируса является наличие специфических антител, важность которого хорошо иллюстрируется историей открытие и последующая гибель HL23V (см. 5.4). Что касается ВИЧ, хорошо известно, что единственное доказательство, которое считается доказательством теории СПИДа, связанной с ВИЧ, - это корреляция между клиническим синдромом и положительным тестом на антитела. Менее известен тот факт, что в четырех статьях, опубликованных в Science в мае 1984 г., Галло и его коллеги утверждали, что в отличие от Монтанье и его коллег, он и его коллеги достигли «истинной изоляции». Однако принципиально важно то, что единственное различие между экспериментами, проведенными двумя группами, состоит в том, что группа Галло использовала лейкемическую клеточную линию, из которой они смогли получить обильные «антигены ВИЧ» и, таким образом, могли выполнить значительно больше тестов на антитела. Учитывая решающий статус, который ретровирологи придают специфическим антителам, доказывающим существование уникального ретровируса и его роль в патогенности, доказательство специфичности антител может оказаться обязательным. Специфичность тестов на антитела к ВИЧ может быть определена только путем использования изоляции ВИЧ в качестве золотого стандарта. На сегодняшний день это не было сделано и в настоящее время кажется невозможным, потому что никто не выполнил даже первый шаг в единственном научно обоснованном методе выделения ретровирусов, то есть электронно-микроскопическая демонстрация частиц с морфологическими характеристиками ретровирусов, разбивающихся в градиенты плотности сахарозы. при плотности 1,16 г / мл. Кроме того, «ВИЧ» можно «изолировать» только от меньшинства людей, у которых есть положительный тест на антитела. электронно-микроскопическая демонстрация частиц с морфологическими характеристиками ретровирусов в градиентах плотности сахарозы при плотности 1,16 г / мл. Кроме того, «ВИЧ» можно «изолировать» только от меньшинства людей, у которых есть положительный тест на антитела. электронно-микроскопическая демонстрация частиц с морфологическими характеристиками ретровирусов в градиентах плотности сахарозы при плотности 1,16 г / мл. Кроме того, «ВИЧ» можно «изолировать» только от меньшинства людей, у которых есть положительный тест на антитела.

(242) (d) распознавание gp120 антителами к синтетическому пептиду того же антигена «частично отменялось, если он абсорбировался общей полисахаридной фракцией C. albicans», в то время как распознавание антигена антителами к «gp120 из Т-клеток человека» лимфотропный вирус типа IIIB»,«был полностью заблокирован». На основании этих данных авторы пришли к выводу: «Эти результаты показывают, что остатки маннана C. albicans могут служить антигенами для выработки нейтрализующих антител против ВИЧ-инфекции; (242) (e)«нормальная человеческая сыворотка содержит антитела, способные распознавать углеводную составляющую ВИЧ. гликопротеины оболочки... из 100 мл сыворотки человека было выделено приблизительно 200 мкг MBIgG [MBIgG = маннан-связывающий IgG]... MBIgG, связанный с гликопротеинами оболочки gp160, gp120 и gp41»; (243) (f) исследователи из Римского университета инфицировали здоровых мышей липополисахаридом E. coli (LPS) и прореагировали на их сыворотки двумя синтетическими пептидами, один из которых включает петлю v3 gp120 «MN ВИЧ-1», а другой», представляющий иммунодоминантный эпитоп gp41». «Мыши, получавшие LPS, показали значительную реактивность антител» с двумя пептидами. (V Colizzi et al., Личное сообщение). (g) Kashala, Essex и их коллеги показали, что антитела к углеводсодержащим антигенам, таким как липоарабиноманнан и фенольный гликолипид, которые составляют клеточную стенку Mycobacterium leprae, бактерии, которая «имеет несколько общих антигенных детерминант с другими видами микобактерий», вызывают «значительный перекрестный контакт». реактивность с pol и gag белками ВИЧ-1».

Не только микобактерии (M. leprae, M. tuberculosis, M. avium-intracellulare), но и стенки всех грибов (Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, включая Pneumocystis carinni), (245-247) содержат углеводы (245-247). маннаны). Сто процентов пациентов со СПИДом (даже у тех, у кого кандидоз клинически отсутствует) имеют антитела против Candida albicans, что позволяет исследователям из больниц Св. Варфоломея и Св. Стефана констатировать: "Возможно, что Candida может действовать как кофактор в развитии явный СПИД у ВИЧ-инфицированных». (248) Также может быть интересно отметить, что у мужчин-геев единственный половой акт, который является фактором риска сероконверсии, - это пассивный анальный половой акт (контакт со спермой) (249), в котором присутствует манноза как в сперме, так и в семенной плазме. (250) Поскольку антитела к маннанам реагируют с «белками ВИЧ», то, как Эссекс и его коллеги указали на микобактериальную инфекцию в Африке, можно ожидать, что сыворотки всех людей, инфицированных грибами и микобактериями, будут перекрестно реагировать с «белками ВИЧ». Гликопротеины ВИЧ-1», а также вызывают«значительную перекрестную реактивность с pol и gag белками ВИЧ-1». Учитывая тот факт, что у людей с грибковыми и микобактериальными инфекциями есть антитела, которые могут давать положительный результат теста на антитела к «ВИЧ» даже в отсутствие «ВИЧ», как можно утверждать, что: (а) PCP, кандидоз, криптококкоз, кокцидиоидомикоз, гистопламоз, tuberculosis или Mycobacterium avium-intracellulare, то есть подавляющее большинство оппортунистических инфекций (88% случаев СПИДа, диагностированных в период с 1988 по 1992 год, имели одну или несколько грибковых или микобактериальных инфекций251), которые означают, что СПИД вызван ВИЧ на основании положительного теста на антитела? (б) что положительный тест на антитела у людей с грибковыми и микобактериальными инфекциями доказывает наличие ВИЧ-инфекции?

В самом деле, как и в случае с HL23V, является ли только вопрос времени, когда исследователи ВИЧ признают, что не может быть таких сущностей, как специфические антитела к ВИЧ? Как следствие, перейдет ли совокупность явлений, считающихся доказательством существования вируса иммунодефицита человека, в историю как «вообще невирусный материал»? *

БЛАГОДАРНОСТЬ

Мы хотели бы поблагодарить всех наших коллег и особенно Брюса Хедланд-Томаса, Ричарда Фокса, Ливио Мину, Алан Дафти, Барри Пейдж, Эндрю Кэмпбелл, Дженни Брукс, Гордану Пелемис, Дафну Петерс, Глэдис Пауэлл, Рона Хирша, Дэвида Доусона, Джун Райдер. -Джонс, Кристин Сибли, персонал библиотеки Королевской больницы Перта и канцелярский персонал Департамента медицинской физики. Мы также благодарим Тодда Миллера, Кристин Джонсон, Филипа Джонсона, Харви Биали, Чарльза Томаса, Джона Лауритсена, Невилла Ходжкинсона, Гордона Стюарта, Хью Кристи, Джеймса Уайтхеда, Волкера Гильдемейстера, Майкла Баумгартнера, Майкла Верни Эллиота, Джоан Шентон, Стефана Ланка, Майкла Ристоу, Фабио Франки, Джамель Тахи, Ричард и Розалинда Чиримуута, Удо Шуленк, Брайан Пичи, Филип Адамс и Хирам Катон.

ССЫЛКИ

1. Дюсберг PH. Питер Дюсберг отвечает. Continuum 1996; 4: 8-9.

2. Сарнгадхаран М.Г., Роберт-Гурофф М., Галло Р.С. ДНК-полимеразы нормальных и неопластических клеток млекопитающих. Biochim Biophysica Acta 1978; 516: 419-487.

3. Вайсбах А., Балтимор Д., Боллум Ф. и др. Номенклатура эукариотических ДНК-полимераз. Наука 1975; 190: 401-402.

4. Роберт-Гурофф М., Шрекер А.В., Бринкман Б.Дж. и др. ДНК-полимераза гамма лимфобластов человека. Biochem 1977; 16: 2866-2873.

5. Льюис Б.Дж., Абрелл Дж.В., Смит Р.Г. и др. ДНК-полимераза III человека (R-ДНК): отличие от ДНК-полимеразы I и обратной транскриптазы. Наука 1974; 183: 867-869.

6. Gallo RC. Первый ретровирус человека. Sci Am 1986; 255: 78-88.

7. Каннингем А.Л., Дуайер Д.Е., Миллс Дж. И др. Структура и функции ВИЧ. Med J Aust 1996; 164: 161-173.

8. Барр-Синусси Ф. ВИЧ как причина СПИДа. Ланцет 1996; 348: 31-35.

9. Varmus HE. Обратная транскрипция у бактерий. Cell 1989; 56: 721-724.

10. Ласкано А., Вальверде В., Эрнандес Г. и др. О раннем возникновении обратной транскрипции: теоретические основы и экспериментальные данные. Дж. Мол Evol 1992; 35: 524-536.

11. Вармус Х. Ретровирусы. Наука 1988; 240: 1427-1435.

12. Чанг Л.Дж., Прайчак П., Ганем Д. и др. Биосинтез обратной транскриптазы вирусов гепатита В включает инициацию трансляции de novo, а не сдвиг рамки рибсомы. Nature 1989; 337: 364-368.

13. Мицуя Х., Бродер С. Антиретровирусная химиотерапия против инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ): перспективы лечения инфекции вируса гепатита В. Обнаружение рака Prev 1989; 14: 299-308.

14. Нейрат А.Р., Стрик Н., Спроул PSO. Поиск рецепторов клеток вируса гепатита В обнаруживает сайты связывания интерлейкина 6 на белке оболочки вируса. J Exp Med 1992; 175: 461-469.

15. Саррия Л., Гальего Л., де лас Херас Б. и др. Продукция вируса гепатита В из лимфоцитов периферической крови, стимулированная фитогемагглютинином. Enferm Infect Microbiol Clin 1993; 11: 187-189.

16. Вегненте А., Гуида С., Лобо-Йео А. и др. Активация Т-лимфоцитов связана с репликацией вируса при хронической инфекции вируса гепатита В у детей. Clin Exp Immunol 1991; 84: 190-194.

17. Дулиттл Р.Ф., Фэн Д.Ф., Джонсон М.С. и др. Происхождение и эволюционные отношения ретровирусов. Quart Rev Biol 1989; 64 (1-30).

18. Вайс Р.А. Классификация ретровирусов и клеточные взаимодействия. Журнал Antimicrob Chemother 1996; 37: B. 1-11.

19. Mommaerts EB, Sharp DG, Eckert EA, et al. Вирус эритромиелобластного лейкоза птиц. I. Связь определенных частиц плазмы с дефосфорилированием аденозинтрифосфата. Институт рака Дж. Нат 1954; 14: 1011-1025.

20. Барр-Синусси Ф., Черманн Дж. К., Рей Ф. Выделение Т-лимфотрофного ретровируса от пациента с риском развития синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). Science 1983; 220: 868-871.

21. Попович М., Сарнгадхаран М.Г., Рид Э. и др. Обнаружение, изоляция и непрерывное производство цитопатических ретровирусов (HTLV-III) от пациентов со СПИДом и пре-СПИДом. Наука 1984; 224: 497-500.

22. Пападопулос-Элеопулос Э., Тернер В.Ф., Пападимитриу Дж.М. Доказал ли Галло роль ВИЧ в СПИДе? Emerg Med [Австралия] 1993; 5 (№ 2): 113-123.

23. Вайс Р., Теддер Р., Чингсонг-Попов Р. Усовершенствования, касающиеся вирусных изолятов и их использования. Заявка на патент: Word Intellectual Property Organization. Соединенное Королевство: Институт исследования рака, Лондон, 1986.

24. Джонсон П.М., Лайден Т.В., Мвенда Дж. М.. Экспрессия эндогенных ретровирусов в плаценте человека. Am J Reprod Immunol 1990; 23: 115-120.

25. Коэн М., Пауэрс М., О'Коннелл С. и др. Нуклеотидная последовательность гена env из человеческого провируса ERV3, а также выделение и характеристика ERV3-специфической кДНК. Virol 1985; 147: 449-458.

26. Thiry L, Sprecher-Goldberger S, Hard RC, et al. Экспрессия антигена ретровируса при беременности. I. Антигены, перекрестно реагирующие с обезьяньими ретровирусами в тканях плода человека и лимфоцитах пуповинной крови. J Reprod Immunol 1981; 2: 309-322.

27. Schupbach J, Popovic M, Gilden RV и др. Серологический анализ подгруппы Т-лимфотрофных ретровирусов человека (HTLV-III), ассоциированных со СПИДом. Наука 1984; 224: 503-505.

28. Монтанье Л., Клавель Ф., Краст Б. и др. Идентификация и антигенность основного гликопротеина оболочки вируса, ассоциированного с лимфаденопатией. Virol 1985; 144: 283-289.

29. Montagnier L, Gruest J, Chamaret S, et al. Адаптация вируса, ассоциированного с лимфаденопатией (LAV), к репликации в трансформированных EBV линиях B-лимфобластоидных клеток. Science 1984; 225: 63-66.

30. Chamaret S, Squinazi F, Courtois Y, et al. Наличие антител к ВИЧ в использованных шприцах, оставленных в общественных местах, на пляжах или собранных в рамках программ обмена. XI Международная конференция по СПИДу 1996 г., Ванкувер.

31. ВОЗ. Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Предлагаемые критерии интерпретации результатов вестерн-блоттинга на ВИЧ-1, ВИЧ-2 и HTLV-I / HTLV-II. Wkly Epidem Rec 1990; 65: 281-298.

32. Ратнер Л., Хазелтин В., Патарка Р. и др. Полная нуклеотидная последовательность вируса СПИДа, HTLV-III. Nature 1985; 313: 277-284.

33. Modrow S, Hahn B, Shaw GM и др. Компьютерный анализ последовательностей белков оболочки семи изолятов вируса иммунодефицита человека: прогнозирование антигенных эпитопов в консервативных и вариабельных областях. J. Virol 1987; 61: 570-578.

34. Gallo RC, Wong-Staal F, Reitz M, et al. Некоторые доказательства наличия инфекционного вируса типа C у людей. В: Балимор Д., Хуанг А.С., Фокс С.Ф., ред. Вирусология животных. Нью-Йорк: Academic Press Inc., 1976: 385-405.

35. Gallagher RE, Gallo RC. Опухолевый вирус РНК типа C, выделенный из культивируемых клеток острого миелогенного лейкоза человека. Наука 1975; 187: 350-353.

36. Тейч Н.М., Вайс Р.А., Салахуддин С.З. и др. Инфекционная передача и характеристика вируса С-типа, высвобождаемого культивированными клетками миелоидного лейкоза человека. Nature 1975; 256: 551-555.