В 1983 году Монтанье и др. Выделили ретровирус».

В 1983 году Монтанье и др. Выделили ретровирус».

В 1983 году Монтанье и др. исследования нет доказательств выделения вируса «самым строгим из доступных на сегодняшний день методов». Не следовали они и «традиционным... правилам Пастера». Как же тогда они выделили ретровирус? Даже если бы Монтанье и его коллеги или другие следовали «правилам Пастера», поскольку «вирусные и клеточные белки и клеточные контаминанты... очищаются с вирусом, очищенным с помощью обычных градиентов плотности», (1) нет оснований принимать какие-либо утверждения об изоляции ВИЧ любой исследовательской группой, которая не использовала «самый строгий метод, доступный на сегодняшний день, т.е. молекулярное клонирование инфекционной ДНК ВИЧ». Однако, чтобы доказать, что ВИЧ «был изолирован» с помощью «самого строгого метода, доступного на сегодняшний день», клонирования вируса, нужно начать с РНК (ДНК) ВИЧ.

Антигены или белки ВИЧ, связанные с такими частицами».

На сегодняшний день никто не представил доказательств того, что «антигены или белки ВИЧ» являются составными частями ретровируса или даже ретровирусоподобной частицы, не говоря уже об уникальном ретровирусе, ВИЧ.

Белок pol HIV», стр. 31/34.

В 1987 году Хендерсон выделил p30-32 и p34-36 «ВИЧ, очищенного двойным связыванием» в градиентах плотности сахарозы. Сравнивая аминокислотные последовательности этих белков с белками DR гистосовместимости класса II, они пришли к выводу, что «альфа- и бета-цепи DR оказались идентичными белкам p34-36 и p30-32 соответственно»; (47)

Gag-белок ВИЧ», p24

Что касается Монтанье, p24 - это белок ВИЧ, и в течение как минимум трех лет после введения теста на антитела к ВИЧ, полоса p24, обнаруженная в WB, рассматривалась большинством лабораторий, включая CDC, как доказательство того, что ВИЧ-инфекция. В настоящее время имеется достаточно доказательств того, что антитела, которые реагируют с p24, повсеместно встречаются как в сыворотке крови человека, так и в сыворотке животных, что можно интерпретировать только как то, что либо p24, либо антитела, либо и то и другое не являются ВИЧ-специфичными, или значительная часть как людей, так и людей животные инфицированы ВИЧ. Например, если полоса p24 в WB считается доказательством ВИЧ-инфекции, то в результате заражаются около 30% людей, которым переливают ВИЧ-отрицательную кровь. (48) Поскольку, по данным Группы клинических испытаний вакцины AID, (49) " ВИЧ-инфекция должна быть распространена среди здоровых людей без риска. Фактически, из-за таких доказательств, начиная с 1987 года, за исключением, возможно, всего двух, Монтанье и исследователей, проводящих многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в WB. SERA, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! ВИЧ-инфекция должна быть обычным явлением среди здоровых людей без риска. Фактически, из-за таких доказательств, начиная с 1987 года, за исключением, возможно, всего двух, Монтанье и исследователей, проводящих многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в WB. SERA, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! Монтанье и исследователи, проводящие многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в сыворотке крови, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция имеет место между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством. изоляции ВИЧ! Монтанье и исследователи, проводящие многоцентровое когортное исследование СПИДа в США, ни одна лаборатория в мире не рассматривает реакцию между p24 в WB и антителами, присутствующими в сыворотке крови, как доказательство ВИЧ-инфекции. Тем не менее, когда такая же реакция происходит между антителом к ​​p24 WB и сывороткой пациента, это считается доказательством виремии, а когда между антителом к ​​p24 и материалом, присутствующим в культуре клеток, такая же реакция считается доказательством изоляции ВИЧ!

Очевидно, что обнаружение белка, даже если известно, что он специфичен для вируса, в сыворотке или даже в культуре, не является доказательством выделения или виремии. То, что такой вывод не является конкретным, лучше всего проиллюстрировать несколькими примерами. В 1992 году Йорг Шупбах, главный автор одной из первых четырех статей 1984 года, опубликованных группой Галло по выделению ВИЧ, сообщил, что посевы цельной крови у 49/60 (82%) «предположительно неинфицированных, но серологически неопределенных лиц и 5 / 5 серонегативных доноров крови оказались положительными на p24». (50) Если p24 является белком ВИЧ, то он должен присутствовать у всех пациентов со СПИДом, если не у всех серопозитивных пациентов и не у людей, не подверженных риску развития СПИДа. В 1989 г. Дэвид Хо и его коллеги использовали измерения p24 в сыворотке и культурах неинфицированных клеток, культивируемых с плазмой «инфицированных» пациентов, для оценки активного вируса, «инфекционного ВИЧ-1», виремии, вирусной нагрузки. Сыворотка 14 из 53 пациентов, чьи плазматические культуры были положительными, была отрицательной на p24. Они пришли к выводу: «Таким образом, плазменная культура была более чувствительной, чем измерение сывороточного антигена p24 при обнаружении наличия бесклеточного ВИЧ-1 в крови». Они также сообщили, что лечение AZT в течение четырех недель вызывало «94-процентное снижение нагрузки внеклеточного вируса». (51) Даже Джексон и др., Которые заявляют, что общий уровень «изоляции ВИЧ» составляет 98,3%, могут обнаружить p24 в сыворотке крови. 42% больных СПИДом, 37% пациентов с ARC и 17% бессимптомных серопозитивных лиц (52), что намного ниже, чем у реципиентов трансплантатов органов, не инфицированных ВИЧ. «У одного реципиента почки (донор был отрицательным по антигену p24), у которого через 3 дня после трансплантации развились лихорадка, слабость, миалгии, кашель и диарея, все» бактериологические, паразитологические и вирусологические образцы оставались отрицательными [включая ПЦР на ВИЧ]. Единственным положительным результатом был антигенемический p24, положительный с наборами антигенов Abbot с очень высокими титрами 1000 пг / мл для поликлональных и 41 пг / мл для моноклональных анализов. Эта антигенемия была полностью нейтрализована с помощью антисыворотки Abbot к p24... Через 2 месяца после трансплантации все анализы на p24-антиген дали отрицательный результат без появления антител против ВИЧ. Наблюдение за связыванием белка 25-30 кДа с поликлональными сыворотками человека против ВИЧ после иммуноблотов с реактивными сыворотками вызывает несколько вопросов. Этот белок может быть связан с иммунным ответом хозяина на трансплантаты или трансплантаты... Его раннее обнаружение после трансплантации может указывать на последствия иммуносупрессивной терапии... Таким образом, белок 25-30 кДа можно сравнить с антигеном p28, недавно описанным с человеческим T лимфотропно-эндогенная последовательность вируса, связанного с клетками... Характеристика этого белка размером 25-30 кДа может внести важный вклад в обнаружение эндогенных ретровирусов, связанных с ВИЧ-1». (54) Разногласия между Монтанье и Галло по поводу того, какие белки на самом деле белки «ВИЧ» не ограничивались gp41, но включали p24. Монтанье всегда упоминал, что»

Галло всегда утверждал, что существует гомология между генами gag HTLV-I, II и ВИЧ (56), и что многие черты, присущие всем «человеческим ретровирусам», включают «небольшой (p24 / p25) главный капсидный белок; p24 перекрестно-реактивный антигенный детерминант. детектируется либо гетерологичной (кроличьей) антисывороткой, либо человеческими моноклональными антителами». (57) Действительно, gag обозначает группоспецифичные антигены. Еще в 1974 году Гелдерблом и его коллеги писали: «В то время как антигены оболочки вируса в первую очередь специфичны к вирусному штамму, основная масса внутренних белков вириона с молекулярной массой (mw) от 10 000 до 30 000 дней является групповой (gs) для вирусов, происходящих от данного вида животных (gs-spec. антигены). Было обнаружено, что основной белковый компонент онкорнавирусов С-типа [ретровирусов] млекопитающих с молекулярной массой в диапазоне 30 000 дней, помимо gs spec. антиген, антигенная детерминанта, которая является общей для вирусов C-типа многих видов млекопитающих, включая обезьян, и поэтому была названа межвидовым антигеном gs (gs-interspec.)»(58). В 1989 году Уильям Блаттнер, известный эксперт по ВИЧ / СПИДу, заявил: «Возможно, было бы целесообразно использовать зонды вирусного антигена для поиска перекрестно-реактивных антител, поскольку некоторые вирусные белки, особенно белки полимеразы и gag, могут быть высококонсервативными между подтипами вируса». (59) Таким образом, даже если p24 должен был быть специфичным для ретровирусов, он не может быть ВИЧ-специфичным. Если p24, обнаруженный в супернатантах культур, является компонентом подобных частиц, вирусных или невирусных, тогда в градиентах плотности весь p24 должен находиться по крайней мере в одной полосе (фракции), даже если не при плотности 1,16 г / мл. То, что это не так, было продемонстрировано самим Монтанье. В одном эксперименте Монтанье и его коллеги разделили градиент плотности на шестнадцать фракций. Пик RT был обнаружен во фракциях пять и шесть, в то время как p24 и gp110 присутствовали во всех фракциях, кроме трех (1, 2, 3). (28)

ВЫВОД

Утверждение «антитела против штамма ВИЧ Монтанье - глобальный стандарт всех«тестов на ВИЧ»» предполагает доказательство: (а) существования более чем одного «штамма ВИЧ», включая один из штаммов Монтанье. Такие доказательства могут быть получены только путем выделения ретровируса. Однако данные Монтанье не доказывают изолированность ретровируса; (б) наличие специфических иммуногенных белков «ВИЧ». Опять же, такое доказательство может быть получено только путем выделения ретровируса; (c) антитела, специфически индуцированные ВИЧ-инфекцией. Верно, что для обнаружения таких антител не обязательно использовать ВИЧ или иммуногенные белки ВИЧ. Например, В серологических тестах как на инфекционный мононуклеоз, так и на сифилис используются антигены, полученные из красных кровяных телец лошади и бычьего сердца соответственно, но, тем не менее, они позволяют прогнозировать заражение вирусом Эпштейна-Барра и Treponema pallidum. Однако единственный способ доказать, что «антитела к ВИЧ» направлены против «ВИЧ», то есть единственный способ использовать тест на антитела для подтверждения ВИЧ-инфекции, - это представить доказательства, подтверждающие, что антитела являются ВИЧ-специфическими. Такое доказательство можно получить, только используя изоляцию ВИЧ как золотой стандарт. Поскольку этого не было сделано, нельзя сказать, что «глобальный стандарт всех«тестов на ВИЧ»» доказывает наличие ВИЧ-инфекции. направлены против «ВИЧ», то есть единственный способ использовать тест на антитела для подтверждения ВИЧ-инфекции - это представить доказательства, подтверждающие, что антитела являются ВИЧ-специфическими. Такое доказательство можно получить, только используя изоляцию ВИЧ как золотой стандарт. Поскольку этого не было сделано, нельзя сказать, что «глобальный стандарт всех«тестов на ВИЧ»» доказывает наличие ВИЧ-инфекции. направлены против «ВИЧ», то есть единственный способ использовать тест на антитела для подтверждения ВИЧ-инфекции - это представить доказательства, подтверждающие, что антитела являются ВИЧ-специфическими. Такое доказательство можно получить, только используя изоляцию ВИЧ как золотой стандарт. Поскольку этого не было сделано, нельзя сказать, что «глобальный стандарт всех«тестов на ВИЧ»» доказывает наличие ВИЧ-инфекции.

ДНК ВИЧ»

При обсуждении доказательства существования уникального экзогенного ретровирусного агента нельзя принимать в качестве исходной предпосылки («Полноразмерные ДНК ВИЧ-1 и ВИЧ-2...»), которая зависит от доказательства наличия лекарственного средства («ergo... ВИЧ существует и был изолирован»). Априорное обозначение определенного фрагмента ДНК как «ДНК ВИЧ» просто вызывает рассматриваемый вопрос.

РЕЗЮМЕ И ОБСУЖДЕНИЕ

Очевидно, что хотя Монтанье, Галло и Леви и их соответствующие коллеги ссылаются на очистку или выделение вирионов или вирусных частиц, ни одна из этих групп не представила доказательств выделения ретровирусных частиц или даже выделения вирусоподобных частиц, первых и абсолютно необходимый шаг в доказательстве существования ретровирусного генома. (На момент написания нет ни одной другой группы исследователей ВИЧ / СПИДа). Нахождение некоторой РНК с полосами 1,16 г / мл, выбор из нее фракции, обогащенной поли (A), или фрагмента заданной длины, даже если всегда обнаруживается, что они имеют одинаковую длину и последовательность, и обозначение его как HTLV-III, LAV, ARV не являются таким доказательством. Следует подчеркнуть, что даже если РНК включена в частицу, которая в градиенте плотности сахарозы составляет 1,16 г / мл, это еще не доказательство того, что это ретровирусная РНК. По словам Джона Коффина, одного из самых известных экспертов по ретровирусному геному, существуют частицы «с полным набором вирусных белков, но частицы содержат набор клеточных РНК и только около 1% геномной РНК... совокупность частиц. не требует генома... в его отсутствие могут быть заменены другие молекулы РНК». (83) Важно отметить, что, хотя все группы, Монтанье, Галло и Леви, относятся к материалу из культуральных супернатантов, которые в градиентах плотности сахарозы полосы при 1,16 г / мл в качестве вирусных частиц, вирионов и для РНК и белков с такой плотностью, как «связанные с частицами» РНК или белки, ни одна из групп не представила доказательств существования при этой плотности каких-либо частиц, подобный ретровирусу или иначе, чистый (изолированный) или другой. Вместо этого эти исследователи культивировали лимфоциты больных СПИДом и стимулировали (активировали) их с помощью самых разных агентов. Обратная транскрипция A (n).dT15 в супернатанте культуры считалась доказательством инфекции ретровирусом или даже доказательством изоляции. Супернатанты этих культур вводили в культуры лейкемических или трансформированных клеточных линий. С супернатантами от этих культур они выполнили два типа экспериментов: (а) Супернатанты были разбиты на полосы градиентов плотности сахарозы. На полосе 1,16 г / мл (а иногда и на другой полосе (ах), по крайней мере, в групповых экспериментах Монтанье, это не ясно), они обнаружили фрагменты РНК определенной длины (хотя не было двух одинаковых длин) или богат аденином, (поли (A) богатые фрагменты), и назвали их «РНК ВИЧ», «геном ВИЧ». Используя праймер (dT), «РНК ВИЧ» транскрибировали в комплементарную ДНК (кДНК); (b) Супернатанты вводили в другой набор трансформированных и лейкемических клеточных линий, а также в стимулированные культуры нормальных Т-клеток. ДНК из этих клеток, а также ДНК из культур, к которым не добавляли супернатант, гибридизовали с использованием зондов из кДНК. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. был транскрибирован в комплементарную ДНК (кДНК); (b) Супернатанты вводили в другой набор трансформированных и лейкемических клеточных линий, а также в стимулированные культуры нормальных Т-клеток. ДНК из этих клеток, а также ДНК из культур, к которым не добавляли супернатант, гибридизовали с использованием зондов из кДНК. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. был транскрибирован в комплементарную ДНК (кДНК); (b) Супернатанты вводили в другой набор трансформированных и лейкемических клеточных линий, а также в стимулированные культуры нормальных Т-клеток. ДНК из этих клеток, а также ДНК из культур, к которым не добавляли супернатант, гибридизовали с использованием зондов из кДНК. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. (b) Супернатанты вводили в другой набор трансформированных и лейкемических клеточных линий, а также в стимулированные культуры нормальных Т-клеток. ДНК из этих клеток, а также ДНК из культур, к которым не добавляли супернатант, гибридизовали с использованием зондов из кДНК. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. (b) Супернатанты вводили в другой набор трансформированных и лейкемических клеточных линий, а также в стимулированные культуры нормальных Т-клеток. ДНК из этих клеток, а также ДНК из культур, к которым не добавляли супернатант, гибридизовали с использованием зондов из кДНК. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным. Положительные результаты были получены только с ДНК из клеток, к которым были добавлены супернатанты. Это свидетельство было истолковано как доказательство того, что «ДНК ВИЧ», ретровирус, произошла от пациентов со СПИДом и что эти пациенты получили ее извне, то есть ретровирус был экзогенным.

С этими экспериментами и их интерпретацией связано много проблем. Среди множества вопросов, которые поднимает их вывод, наиболее очевидны следующие: 1. ВИЧ считается ретровирусом, а ретровирусы - это частицы, содержащие, среди прочего, РНК. Как тогда можно утверждать, что РНК, которая имеет полосу 1,16 г / мл, «РНК ВИЧ», является геномом ретровируса без доказательства того, что она является составной частью частицы, вирусной или невирусной, которая имеет полосы с такой плотностью?? 2. RT неспецифична для ретровируса, и фактически A (n).dT15 может быть подвергнут обратной транскрипции всеми клеточными ДНК-полимеразами à, á и y. Можно ли тогда рассматривать обратную транскрипцию A (n).dT15 как доказательство выделения ВИЧ или даже обнаружения ретровируса? Даже если процесс обратной транскрипции специфичен для ретровирусов, может ли обнаружение процесса когда-либо считаться доказательством изоляции объекта, в данном случае ретровирусных частиц? 3. Супернатанты клеточных культур будут содержать как ДНК, так и РНК, включая некоторые из них, заключенные в клеточный дебрис (фрагменты), особенно если жизнеспособность клеток не является стопроцентной, как в случае культур, используемых тремя группами. РНК могут включать информационную РНК (которая богата аденином), а также высокомолекулярную гетерогенную нуклеиновую РНК. Эти РНК, помимо высокой молекулярной массы и неоднородности по размеру, также содержат поли (А) с поли (А), присоединенным к 3'-концу молекулы, и могут быть устойчивыми к РНКазе. Актиномицин подавляет его синтез, а также мешает его правильной переработке и распаду. (99) Из вирусологии животных также известно, что неретровирусные РНК и ДНК также имеют полосы 1,16 г / мл. (100) Как тогда можно утверждать, что только потому, что РНК имеет полосу 1,16 г / мл и богата аденином или имеет определенную длину, это «РНК ВИЧ»? Если эта РНК является «РНК ВИЧ», тогда каковы другие РНК и ДНК, которые также образуют полосы с этой конкретной плотностью? Если последние являются клеточными, почему не поли (А) РНК? 4. По определению, ретровирусы - это инфекционные частицы, содержащие только РНК. Когда они попадают в клетку, РНК обратно транскрибируется в ДНК, которая затем интегрируется в клеточную ДНК как провирус, что означает, что «ДНК ВИЧ» будет присутствовать только в клетке и больше нигде. Тем не менее, многие эксперты по ВИЧ, включая Галло, показали, что оба супернатанта «инфицированы» культуры клеток и «частицы ВИЧ», то есть материал с полосами 1,16 г / мл, содержит «ДНК ВИЧ», которая «может непосредственно интегрироваться в хромосомную ДНК хозяина». (101-103) Возникает вопрос: «ДНК ВИЧ» - результат обратной транскрипции «РНК ВИЧ» или наоборот? 5. Считается, что РНК ВИЧ локализована в конденсированном ядре, окруженном «липидно-двухслойной оболочкой, происходящей из клеточной мембраны клетки-хозяина, усеянной кодируемым вирусом gp120 и миристилированным белком, p17. Так называемое ядро- связь оболочки (CEL) прикрепляет ядро ​​к оболочке»(103). Один из наиболее известных фактов в биологии - то, что конденсированные ядра (хроматин) транскрипционно неактивны. Это одна из причин, по которой вирусы, в том числе ретровирусы, чтобы размножаться, они должны сначала войти в клетки, где их хроматин деконденсируется. Однако в статье, опубликованной в 1993 году Хуэй Чжаном и его коллегами, в том числе Пойэсом из Научного центра здоровья Suny в Сиракузах, штат Нью-Йорк, было написано: «Мы показали, что в отсутствие детергента большие количества устойчивой к ДНКазе вирусной ДНК могут быть синтезируется в интактных вирионах ВИЧ-1, что указывает на то, что это явление не зависит от нарушения вирусной оболочки. [не говоря уже о деконденсации хроматина]. Возникший синтез вирусной ДНК также происходил в очищенных вирионах, инкубированных при 37 ° в бесклеточных физиологических жидкостях человека. включая семенную плазму, грудное молоко и фекальные жидкости»(103). Это означает, что либо (i)«интактные вирионы ВИЧ-1» выполнять функцию, которую не может выполнять никакая другая биологическая система с очень конденсированным и защищенным хроматином, или (ii) «РНК ВИЧ», обнаруженная в супернатантах или в «очищенных вирионах», присутствует в бестелесной форме, или (iii) «РНК ВИЧ» «синтезируются de novo в культурах клеток (см. 6.3.5); 6. В настоящее время имеется достаточно доказательств того, что любая РНК или ДНК, присутствующая в супернатанте, независимо от ее происхождения, особенно когда клетки стимулируются поликатионами и окислителями, будет поглощаться клетками (см. 7.1). Как тогда можно утверждать, что положительный сигнал гибридизации в клетках, культивируемых с той же «ДНК ВИЧ», содержащей супернатант, что и супернатант, из которого произошел зонд «ДНК ВИЧ», но не в других клетках, является доказательством того, что «ДНК ВИЧ» такое геном экзогенного ретровируса? 7. Первым, абсолютно необходимым шагом в доказательстве того, что «ДНК ВИЧ» произошла из лимфоцитарных клеток больных СПИДом и лиц из группы риска, является проведение экспериментов по гибридизации с использованием ДНК их свежих, некультивируемых лимфоцитов и «ДНК ВИЧ» в качестве зонд. Трудно понять, почему ни группа Монтанье, ни группа Леви не сообщали о подобных экспериментах. Группа Галло сделала это, и результаты были отрицательными (см. 6.4.4). Как тогда можно утверждать, что «ДНК ВИЧ» - это геном экзогенного ретровируса, который произошел от больных СПИДом и лиц из группы риска? 8. Чтение основополагающего документа о выделении ВИЧ под названием «Обнаружение, выделение и непрерывное производство цитопатических ретровирусов (HTLV-III) у пациентов со СПИДом и пре-СПИДом» Создается впечатление, что линия клеток лейкемии HT, которую использовали Галло, Попович и их коллеги, была новой линией клеток, созданной ими. Исследование Gallo показало, что клеточная линия HT (H9) такая же, как и использованная группой Леви, HUT78, лейкемическая клеточная линия, созданная в другой лаборатории. Однако многочисленные доказательства существования эндогенных ретровирусов человека были получены в основном в результате экспериментов с лейкемическими и трансформированными клетками. Существуют доказательства того, что как H9, так и EBV-трансформированные B-лимфоциты выделяют ретровирусоподобные частицы, даже если они не «инфицированы ВИЧ». (104) Кроме того, клеточная линия HUT78 (H9) была получена от пациента с «злокачественными новообразованиями зрелых клеток T4»., заболевание, которое, согласно Галло, вызывается экзогенным ретровирусом HTLV-I. Действительно, еще в 1983 году он утверждал, что продемонстрировал, что линия клеток HT (H9) содержит провирусные последовательности HTLV. (105) По мнению некоторых американских исследователей, нормальные B-лимфоциты периферической крови человека, трансформированные EBV, содержат транскрипты, связанные с HTLV-I.. (106) Поскольку все ретровирусные частицы по определению имеют полосу 1,16 г / мл, если предположить, что все группы имели ретровирус этой плотности, как можно утверждать, что ретровирус, происходящий из HUT78 и трансформированных EBV B-лимфоцитов, является новый ретровирус ВИЧ, а не тот, который уже был? Можно ли утверждать, что «РНК ВИЧ» и, следовательно, пробы и праймеры, происходящие из нее, являются РНК, зондами и праймерами уникального экзогенного ретровирусного генома? 9. Биологическая догма гласит, что ДНК синтезируется на матрице ДНК, РНК - на матрице ДНК, и белки на матрице РНК. Другими словами, единственный способ для клетки приобрести новые сущности нуклеиновой кислоты - это ввести их извне, экзогенно либо из другого типа клеток, инфекционного агента или синтетической нуклеиновой кислоты. Если биологическая догма верна, тогда «РНК ВИЧ», будь то клеточная или вирусная молекулярная единица, должна происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? единственный способ для клетки приобрести новые сущности нуклеиновой кислоты - это ввести их извне, экзогенно либо из другого типа клеток, инфекционного агента или синтетической нуклеиновой кислоты. Если биологическая догма верна, тогда «РНК ВИЧ», будь то клеточная или вирусная молекулярная единица, должна происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? единственный способ для клетки приобрести новые сущности нуклеиновой кислоты - это ввести их извне, экзогенно либо из другого типа клеток, инфекционного агента или синтетической нуклеиновой кислоты. Если биологическая догма верна, тогда «РНК ВИЧ», будь то клеточная или вирусная молекулярная единица, должна происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? существует? Что это значит и откуда оно взялось? существует? Что это значит и откуда оно взялось? экзогенно либо из другого типа клеток, инфекционного агента или синтетической нуклеиновой кислоты. Если биологическая догма верна, тогда «РНК ВИЧ», будь то клеточная или вирусная молекулярная единица, должна происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? экзогенно либо из другого типа клеток, инфекционного агента или синтетической нуклеиновой кислоты. Если биологическая догма верна, тогда «РНК ВИЧ», будь то клеточная или вирусная молекулярная единица, должна происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? должны происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось? должны происходить либо из лимфоцитов пациентов, либо из трансформированных и лейкемических клеточных линий. Однако, когда в качестве зонда использовалась «кДНК ВИЧ», ни одна из групп не сообщила о положительных результатах гибридизации какой-либо из клеток, даже лимфоцитов больных СПИДом. Тогда возникает вопрос, существует ли уникальная молекулярная сущность, «ДНК ВИЧ»? Что это значит и откуда оно взялось?

СПЕКУЛЯЦИИ НА «ДНК ВИЧ»

Если кто-то хочет порассуждать о природе и происхождении РНК (кДНК), полученной из культур, содержащих ткани пациентов со СПИДом и тех, кто находится в группе риска, и какие полосы составляют 1,16 г / мл, есть много возможностей, включая:

6.3.1. Хотя на сегодняшний день таких доказательств не существует, возможно, что участок РНК, в настоящее время называемый «РНК ВИЧ», является геномом экзогенного ретровируса, ВИЧ. Однако для того, чтобы это считалось доказанным, в дополнение к удовлетворению всех требований в 6.1 необходимо также показать, что: (i) уникальный участок РНК может быть получен только из культур конкретных людей; (ii) когда РНК (или кДНК) используется в качестве зонда для тестирования свежих некультивируемых лимфоцитов, положительный тест получают только из свежих клеток людей, которые также имеют положительную культуру; (iii) что у животных или людей ретровирус передается горизонтально (от животного к животному, от человека к человеку).

6.3.2 Геном эндогенного ретровируса, то есть участок РНК с соответствующей матрицей ДНК, присутствующий в клеточной ДНК неинфицированных животных, который передается из поколения в поколение вертикально (от родителей к потомству через линию зародышевых клеток) и который ниже определенные условия могут быть выражены и включены в ретровирусные частицы. На протяжении многих десятилетий было известно, что ДНК животных содержит последовательности, «близкие или идентичные таковым инфекционных вирусов». Однако геном человека считался исключением, и еще в 1994 году и Галло, и Фаучи придерживались мнения, что «… не существует известных эндогенных ретровирусов человека».107 Фактически, в 1970-х и 1980-х годах после заявления Галло об открытии HL23V, HTLV-I, а затем HTLV-II, и особенно после заявления Монтанье об открытии ВИЧ, значительно больший интерес вызвали ретровирусы, в результате чего стало «все более ясно, что ДНК человека, как и ДНК других позвоночных, содержит множество интегрированных ретровирусных геномов» (25, 108) и что во многих случаях гены экспрессируются, «включая транскрипты мРНК, относящиеся к полноразмерной эндогенной ретровирусной ДНК» (109, 110) с открытыми рамками считывания для белков gag, pol и env111. К 1987 году многие исследователи сообщили об экспрессии генома эндогенного ретровируса человека, HERV-K, гомологичного вирусу опухоли молочной железы мыши (MMTV). «В нескольких клеточных линиях геном HERV-K был экспрессирован как поли (А) + РНК 8,8 тыс. Оснований, которая, по-видимому, является полноразмерным транскриптом этого генома». Когда линия клеток рака груди человека T47D «выращивалась в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, экспрессия генома HERV-K была незначительной». Однако, когда клетки обрабатывали эстрадиолом, а затем прогестероном, они продуцировали «ретровирусоподобные частицы и растворимый белок, разделяющий антигенные детерминанты с продуктом гена env MMTV». (112) В подтверждение их тезиса «что эндогенная ОТ человека может опосредовать движения генов, ведущие к к лейкозу и раку», исследователи из Университета Ганемана, Филадельфия, включая Дэвида Гиллеспи, давнего сотрудника Галло,«продемонстрировали наличие фермента, подобного обратной транскриптазе, в ретровирусных частицах пациентов с эссенциальной тромбоцитемией, истинной полицитемией и хроническим миелогенным лейкозом., Впоследствии было показано, что геном человека содержит 50 копий HERV-K. HERV-K представляет собой эндогенный ретровирусный элемент класса I человека, который содержит открытые рамки считывания gag, pol и env... а также интактные участки LTR... Экспрессия геномных транскриптов РНК HERV-K размером 9 т.п.н. была обнаружена в линиях клеток человека... Нам впервые удалось показать экспрессию гена pol HERV-K в лейкоцитах крови человека. Ген HERV-K pol был экспрессирован в клетках периферической крови двух групп людей, не страдающих лейкемией. Первая группа состояла из 7 нормальных доноров, а вторая группа состояла из 3 пациентов с PV, все из которых экспрессировали ген pol HERV-K. Пять различных нуклеотидных последовательностей были получены от 7 нормальных доноров. Четыре из 5 нормальных последовательностей содержали гетерогенные открытые рамки считывания для pol, как обнаружено с помощью ОТ-ПЦР и защиты от РНКазы. В отличие от нормальных доноров, которые случайным образом экспрессируют провирусы HERV-K, анализ pol HERV-K от пациента с PV показал избирательную экспрессию ограниченного семейства родственных провирусов». (113) К 1995 году Галло признал, что человеческая клетка действительно содержит ретровирусные геномы, но он по-прежнему настаивали на том, что они дефектны: «Ретровирусы передаются либо генетически (эндогенные формы), либо как инфекционные агенты (экзогенные формы). Как и многие другие виды животных, люди имеют обе формы... ДНК многих видов, включая человека, содержит множество копий различных ретровирусных провирусов. Практически все эндогенные провирусные последовательности человека являются дефектными, и составляют около одного процента генома человека». (114) Точка зрения относительно дефектности не разделяется даже Рейнхардом Куртом, который вместе со своими коллегами тщательно изучил эндогенные ретровирусы человека (115) и показал, что последовательности HERV-K являются транскрибируется, и что линия клеток тератокарциномы человека, GH, ко