Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов.

Реакция гемолиза эритроцитов. Для проведения этой реакции используют кровь (или эритроциты крови). Необходимо, чтобы в крови было незначительное содержание холестерина, присутствие которого может сдерживать гемолиз. Кроме того, требуется, чтобы рН был физиологическим (~ 7,4), для чего взвесь эритроцитов разводят 0,9% раствором NaCl. После смешивания равных объемов извлечения из ЛРС (содержащего сапонины) и взвеси эритроцитов в физиологическом растворе через некоторое время кровь становится прозрачной и ярко-красной – происходит гемолиз эритроцитов и выход гемоглобина в среду. Следует отметить, что различные сапонины имеют разный гемолитический индекс. Например, требуется 1 г сапонинов синюхи обыкновенной для гемолиза 10000 мл крови и 1 г сапонинов диоскореи ниппонской для гемолиза 600 мл крови – то есть гемолитический индекс у сапонинов синюхи выше, чем у сапонинов диоскореи. У солодки голой и конского каштана сапонины (сапонозиды) гемолитической активностью не обладают, а их агликоны – обладают.

Количественное определение содержания сапонинов в ЛРС. Единого точного количественного метода определения сапонинов пока нет.

Ранее широко использовали гравиметрический метод, основанный на осаждении сапонинов холестерином, солями свинца, меди, магния, гидроксидом бария или концентрированными малополярными растворителями, но этот метод неспецифичен и дает завышенные результаты.

Используют также методы спектрофотометрии. Например, (А) берут порцию стероидных сапонинов, извлекаемых этанолом из диоскореи, прибавляют реактив Эрлиха (1% раствор п -диметил-аминобензальдегида в 4н спиртовом растворе HCl), инкубируют 2 ч при 58ºС, охлаждают и измеряют оптическую плотность раствора. В другом методе (Б), приведенном в ГФ Х в статье «Солодка голая», спектрофотометрирование раствора проводят после осаждения глицерризиновой кислоты из ацетонового извлечения 25% раствором аммиака. (В) На хроматограммах в парах ортофосфорной кислоты стероидные сапонины дают розовые пятна, ярко флуоресцирующие в УФ-свете, что используют для флуориметрии.

Сапонины: применение в медицине ЛРС и фитопрепаратов (ЛСРП). Примеры.

Все сапонины:

– обладают гемолитической активностью (за исключением сои, солодки и конского каштана). Гемолитическая активность – это способность сапонинов образовывать комплексы со стеринами и, как следствие, – поры в мембранах эритроцитов, что позволяет гемоглобину этих клеток свободно диффундировать в среду или в плазму крови, давая так называемую «лаковую кровь» – явление, открытое Л. Федотовым в 1875 г.;

– обладают токсичностью для организмов при попадании в их кровь. Сапонины вызывают гемолиз эритроцитов и паралич центральной нервной ситемы – прежде всего, ее дыхательного центра. Поэтому введение этих веществ непосредственно в кровь недопустимо. Допускается пероральное применение препаратов сапонинов, так как они не всасываются желудочно-кишечным трактом;

– даже в очень высоких разведениях (1:1000000) сапонины вызывают гибель холоднокровных животных (рыб, червей, лягушек – показано, в частности, их деструктивное действие на жабры, являющиеся органом дыхания, солевого обмена и осмотического давления у рыб и амфибий);

– сапогенины (агликоны сапонинов) не обладают гемолитическими свойствами и не токсичны для рыб и других холоднокровных животных.