Определение активности свежеполученной спермы проводят одновременно с определением густоты в той же самой капле.

Разбавленная сперма на активность проверяется на племпредприятии и каждый раз перед осеменением животных на пунктах искусственного осеменения.

Взависимости от технического оснащения пунктов искусственного осеменения животных в настоящее время можно применять кратковременное и долговременное хранение спермы.

Кратковременному хранению подвергается сперма быков, баранов, хряков и жеребцов, при температуре, близкой к 0 (+2 +5 °Схладагент -тающий лед или снег).

1 2

Рис. 48. 1 -густая сперма барана; 2 -сперма средней густоты. 134

При кратковременном хранении сперму быков используют -до 72 час, баранов -до 24 час и транспортируют в широкогорлых пенопластовых или пищевых термосах.

Сперму хряков сохраняют до 72 час, жеребцов -до 46 час и транспортируют в термосах.

Долговременное хранение спермы быков осуществляется в жидком азоте при температуре -196 °Св течение многих лет (75-100 лет) при этом процессе обмена веществ у спермиев практически прекращается.

Метод длительного хранения требует соблюдения следующих условий: -непрерывное поддержание постоянной низкой температуры в течение всего срока хранения спермы;

-не допускается повторное замораживание или охлаждение спермы;

-хранить сперму каждого производителя нужно отдельно, особенно от производителей разных пород;

-строжайшее соблюдение технологии размораживания.

Замораживание спермы быков в гранулах в объеме по 0,2 мл проводят на фторопластовой пластине с лункам, охлажденной жидким азотом в течение нескольких минут, затем сперму разливают в лунки. После замораживания спермы гранулы ссыпают в контейнер или в марлевый мешочек и переносят в сосуд Дьюара на хранение.

Сперму отправляют в хозяйства не ранее, чем через 26 дней карантинирования.

При работе со спермой, хранившейся в жидком азоте, необходимо соблюдать правила техники безопасности.

Жидкий азот -прозрачная, легко испаряющаяся жидкость, в обычных условиях химически инертная. Попадая на открытые участки тела, она вызывает ожоги.

При работе с жидким азотом необходимо защищать лицо, глаза, руки, т.е. пользоваться защитными очками и перчатками. Впомещении, где находятся сосуды Дьюара с жидким азотом, необходима вентиляция, так как скопление паров азота у персонала может вызвать тяжелое обморочное состояние с неблагоприятным исходом.

Так как азот в чистом виде не бывает, а содержит определенное количество кислорода, точка испарения которого ниже точки испарения азота, то в сосудах Дьюара, при многократном заполнении их жидким азотом, скапливается большое количество кислорода, что может привести к взрыву и пожару, поэтому необходимо сосуды периодически промывать и просушивать.

Во время размораживания спермы необходимо соблюдать условия асептики и антисептики, для чего флаконы, предназна 135

ченные для оттаивания спермы, стерилизуют путем кипячения в дистиллированной воде и сушильных шкафах или термостате. Резиновые пробки стерилизуют также путем кипячения, помещая их предварительно в марлевый мешочек, подвешивая так, чтобы в период кипячения они не касались стенок и дна посуды, иначе при соприкосновении с металлом в резине образуются ядовитые соли, что пагубно влияет на качество спермы.

Корнцанг и пинцет перед употреблением стерилизуют, обеззараживают спиртовым тампоном или фломбируют. Перед началом оттаивания готовят биотермостат или водяную баню с температурой +38 +42 °С. Вних помещают флаконы с 2,8%-ным раствором лимонно-кислого натрия в объеме 1 мл и подогревают в течение 2-3 минут, чтобы раствор принял температуру воды бани.

Перед извлечением спермы из сосуда Дьюара корнцанг предварительно охлаждают в жидком азоте. Затем подтягивают марлевый мешочек со спермой к горловине сосуда; при этом следят, чтобы мешочек все время находился в парах азота, так как кратковременное согревание спермы даже до температуры -129°Свызывает ее гибель. Гранулы спермы быстро извлекают из мешочка и помещают в приготовленный флакон с раствором лимонно-кислого натрия и не доставая его из водяной бани, осторожно покачивают до момента растаивания гранулы, после чего флакон извлекают из воды и ставят на стол при комнатной температуре. Оттаивание должно продолжаться не более 8-10 сек.

Рис. 49. Размораживание спермы в биотермостате и оценка под микроскопом. 136

Категорически запрещается оттаивать гранулы при комнатной температуре или в одном флаконе нескольких гранул. После микроскопии сперма должна быть использована для осеменения коров в течение 15 мин, с момента оттаивания.

При микроскопии разбавленной спермы необходимо пользоваться обогревательным электростоликом. Температура в нем должна быть в пределах +38+42 °С. На слегка подогретое на электростолике предметное стекло наносят каплю спермы и покрывают её покровным стеклом. Каплю нужно наносить не слишком маленькую и не слишком большую. Сперма должна быть равномерно распределена под покровным стеклом без пустых мест и пузырьков воздуха.

При исследовании раздавленной капли увеличение микроскопа должно быть в пределах 140-300 раз. Лучшая видимость спермиев наблюдается при слегка затемненном поле зрения.

Различают следующие виды движения спермиев: прямолинейное поступательное (нормальное) движение спермиев характеризуется правильным линейным перемещением по направлению продольной оси, круговое (манежное) движение -спермии вращаются вокруг своей головки или по небольшому кругу, радиус которого примерно равен длине спермиев. Круговое или манежное движение спермиев обозначается буквой «М». Колебательное движение -спермии конвульсионно вздрагивают, отмечается слабое движение хвоста, не приводящее к перемещению спермиев вперед. Колебательное движение -признак неполноценности и наступающей гибели спермиев. Колебательное движение спермиев обозначается буквой «К».

Когда все спермии мертвые, такое явление носит название некроспермия и обозначается буквой «Н».

Соотношение между спермиями с прямолинейно поступательным движением и определяет качество спермы.

Активность (подвижность) спермиев оценивается по десятибалльной системе: если все спермии, видимые в поле зрения микроскопа, имеет прямолинейное поступательное движение (т.е. 100%), то ставят 10 баллов; 90% -9 баллов, 80% -8 баллов и т.д.

Практически определяют, сколько спермиев мертвых и с патологическим видом движения приходится на каждый десяток спермиев. Если один -9 баллов, два -8 баллов и т.д.

Если один спермий с прямолинейно-поступательным движением приходится на несколько десятков неактивных (мертвых, с манежным и колебательным движениями), активность обозначается буквой «Е» (единичные). При определении активности спермы на пунктах искусственного осеменения техники допускают ряд ошибок: 137

-не соблюдается температурный режим +38°-42 °С. Если температура ниже +38°С, то спермии, хранящиеся при температуре 0°Сили -196°С, неспособны полностью выйти из состояния анабиоза и остаются неподвижными, если температура выше + 42°С, то белки спермиев свертываются и спермии гибнут;

-проверяют активность спермиев в выпуклой (висячей) капле, т.е. спермиев, находящихся на поверхности, а не всех;

-иногда техники по искусственному осеменению проводят определение активности спермы при увеличении микроскопа в 400-600 раз, что недопустимо, так как при этом просматриваются единицы спермиев, чаще только мертвые или с патологическими формами движения.

Густоту и активность обозначают двумя знаками. Пример: Г-9 -сперма густая, имеет 90% активных с прямолинейно -поступательным движением спермиев.

Спермии в отдельных, особенно густых эякулятах, в момент эякуляции не успевают полностью выйти из состояния неподвижности и проявляют при этом слабое движение. Такую сперму надо проверять после добавления к ней 2,8%-ного раствора лимонно-кислого натрия (трехзамещенного, пятиводного), подогретого до +38°-42°С. Для этого на предметное стекло наносят 2 капли раствора и каплю спермы, накрывают покровным стеклом и в месте слияния этих капель определяют активность спермиев.

Для ежедневного контроля качества отправляемой с племпредприятия разбавленной спермы от каждого быка и барана оставляют пробу объемом в 0,5 -1 мл, а от хряка и жеребца пробу спермы с объемом в 20 мл и хранят принятым на предприятии способом.

Активность спермиев в оставленных для контроля пробах спермы оценивают один раз в сутки, в одно и то же время. Это дает возможность контролировать качество отправляемой на пункты спермы в рекомендованный период ее использования для искусственного осеменения животных. Вслучаях преждевременного снижения активности спермиев ниже допустимой нормы принимают немедленные меры к замене спермы. Этот метод контроля качества спермы каждого используемого производителя является обязательным на племпредприятиях.

Минимальным показателем свежевзятой спермы, допускаемой к разбавлению искусственными средами является: 138

Разбавленная сперма, сохраняемая при температуре, близкой к 0°С, и имеющая в течение трех суток хранения оценку не ниже 7 баллов, пригодна к осеменению.

Замороженную сперму используют после оттаивания при подвижности спермиев не ниже 4 баллов.