Какая же степень разбавления может быть лучшей?

Перед разбавлением эякулята нужно знать активность и концентрацию спермиев. Эти показатели должны удовлетворять требованиям инструкции, поскольку являются основой для определения степени разбавления. Степень разбавления зависит также от количества доз и других условий. Эякулят разбавляют, добавляя по частям необходимое количество разбавителя и тщательно перемешивая жидкость. Обычно сперму быка разбавляют в 10 (1:9) -15 (1:14) раз. Внекоторых странах разбавляют сперму 1:20:50, -1:25. Сперму быка 1:100 и даже 1:200. Различие в степени разбавления объясняется разным подходом к определению количества спермиев, необходимого для оплодотворения. Одни авторы считают, что в дозе для осеменения одной коровы должно быть минимум 10-15 млн. спермиев, другие 25-30 млн., с ППД4 балла (40%).

Сперму барана разбавляют в 2 (1:1) -4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 80 млн. спермиев.

Сперму хряка разбавляют в 2 (1:1) -10 (1:9) раз с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев через 30-60 мин после взятия и определения ее качества.

Сперму жеребца разбавляют в 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев.

Для разбавления спермы применяют синтетические среды. Всостав которых входят сахара, соли, яичный желток, санирующие вещества, глицерин и дистиллированная вода. 156

Какое биологическое значение каждого компонента?

Вкачестве основы синтетической среды используют раствор неэлектролита (глюкоза, лактоза, сахароза, раффиноза):

1) сахара нейтрализуют вредное действие на спермии электролитов, т.е. защищают их от снятия электрического заряда (не допускают агглютинации). Наряду с этим сахара используются спермиями для дыхания и фруктолиза;

2) натрий лимоннокислый, трехзамещенный, пятиводный (цитрат) защищает спермии от самоотравления кислыми продуктами распада и создает буферность среды;

3) желток куриного яйца, в котором содержится до 7% лецитина -жироподобного вещества.

При разбавлении спермы средой с желтком он смягчает температурный шок спермиев при охлаждении спермы и обладает буферными свойствами;

4) в качестве дополнительных компонентов для синтетических сред используют сульфаниламид (белый стрептоцид), антибиотики (пенициллин, стрептомицин), а также глицерин. Сульфаниламид и антибиотики (спермосан -3) вводят в среду для предупреждения развития микроорганизмов, которые попадают в сперму;

5) глицерин используют в синтетических средах при замораживании спермы. Вприсутствии глицерина замерзание воды в синтетической среде происходит без образования крупных кристаллов, которые могут повреждать спермии.

Для разбавления и хранения спермы быка применяют следующие синтетические среды:

Для хранения спермы при температуре 2-4°С -

Глюкозо-цитратно-желточная (ГОСТ 14746 - 69)

Глюкоза медицинская безводная, г 3,0

Натрий лимоннокислотный,

трехзамещенный, пятиводный, г 1,4

Желток куриного яйца, мл 20,0

Спермосан-3, тыс.ед. 75-90

Вода дистиллированная, мл 100,0

Для разбавления и замораживания спермы быка

в форме гранул

Лактоза, г 11,5

Желток куринного яица, мл 20,0

Глицерин, мл 5,0

Спермосан-3, тыс. ед. 50,0

Вода дистиллированная 100,0 157

В полипропиленовых соломинках

Лактоза, г 80,5

Фруктоза, г 12,0

Раффиноза пятиводная, г 19,5

Магний сернокислый, г 0,1

Глицерин, мл 50,0

Спермосан-3, тыс. ед. 500-700

Желток куриных яиц, мл 200,0

Вода дистиллированная, мл 1000,0

В облицованных гранулах

Среда № 1

11%-ный раствор лактозы или сахарозы, мл 63,0

Желток куриный яиц, мл 30,0

Глицерин, мл 7,0

Среда № 2

Лактоза или сахароза, г 6,0

Натрий лимоннокислый, трехзамещенный,

пятиводный, г 1,4

Глицерин, мл 5,0

Вода дистиллированная, мл 100,0

Синтетические среды готовят перед их применением. Среды применяют также из сухих заготовок, выпускаемых медицинской промышленностью, в состав которых входят все указанные выше компоненты.

Для приготовления синтетической среды в чистую, стерильную химическую колбу, наливают прокипяченную дистиллированную воду в необходимом объеме. На аналитических весах точно отвешивают, согласно рецепту, необходимые компоненты, кроме спермосана, глицерина и желтка, и высыпают их в колбу с водой. Размешивают компоненты в воде до полного их растворения. Затем среду стерилизуют на водяной бане 5-10 мин с момента закипания в ней воды, охлаждают до 35-40°Си добавляют спермосан, желток или глицерин. Яйца перед извлечением желтков тщательно моют, насухо вытирают марлевой салфеткой и обеззараживают скорлупу спиртовым тампоном (70%) или ультрафиолетовыми лучами в настольной бактерицидной камере в течение 10-15 мин. Стерильным скальпелем или пинцетом яйцо раскалывают пополам и сливают белок в чашку. Желток осторожно переносят на стерильный лист фильтрованной бумаги. Чтобы снять остатки белка, фильтрованную бумагу с одного конца несколько приподнимают и скатывают желток к его краю. После этого 158

прокалывают оболочку желтка стерильным скальпелем и, слегка сжимая фильтр снаружи, сливают желток в стерильную мензурку. Необходимое количество желтка вносят в колбу с растворенными в ней компонентами и тщательно размешивают. Один желток куриного яйца имеет массу 10-20 г.

Разбавители необходимо готовить при соблюдении правил строгой стерильности в работе. Весы, посуда (обязательно стеклянная), стол должны быть стерильны и обеззараженные. Загрязненную посуду, в которой находились желток, разбавитель или сперма, выдерживают в течение суток в хромовой смеси (1 кг двухромовокислого калия добавляют в 10 л дистилированной воды и осторожно добавляют раствор серной кислоты). Новую посуду после мытья выдерживают 24 часа в растворе соляной кислоты.