Определение концентрации спермиев по стандартам

Определение концентрации спермиев жеребца проводят по стандартам, разработанным Всесоюзным научно-исследовательским институтом коневодства (Г.В. Паршутин, Е.В. Румянцева).

Стандарты представляют собой стеклянные запаянные пробирки одинакового диаметра с жидкостью, имитирующей сперму жеребца различной концентрации: 10-50-100-200-300-500 млн. спермиев в 1 мл спермы.

Определяют концентрацию спермиев следующим образом; сперму наливают в прилагаемую пустую пробирку такого же диаметра и сравнивают со стандартами. Предварительно стандарты встряхивают, чтобы равномерно размещался осадок. Пробирки просматривают на свет, при этом подбирают стандарт, наиболее близкий по густоте к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермиев может быть определена как промежуточная между двумя стандартами, например, 75 млн. (между 50 и 100 млн.) и т.д. Для большей

Рис. 52. Биотермостат. 142

точности определения к сравниваемым пробиркам сзади вплотную прикладывают стеклянную палочку.

При концентрации более 500 млн. спермиев в 1 мл сперму можно разбавить 7%-ным раствором глюкозы в 2 раза (1:1) и затем установить концентрацию по стандартам и сделать пересчет на неразбавленную сперму.

Определение концентрации спермиев с помощью

Фотоэлектроколориметра (ФЭК - М)

ВФЭКвмонтированы селеновые элементы и гальванометр. При пропускании через кюветы со спермой пучка лучей определенной силы света они падают на селеновый элемент и отклоняют стрелку гальванометра. Степень отклонения гальванометра зависит от величины электрического тока: она обратно пропорциональна мутности спермы, концентрации спермиев. Величина ослабления света регистрируется чувствительными фотоэлементами.

Фотоэлектрокалориметр позволяет легко и очень быстро, в течении 1-2 минут, определить концентрацию спермиев в эякуляте почти с такой же точностью, как и в счетных камерах Горяева, работа с которыми требует значительных затрат времени и труда.

Калибровочную кривую строят для каждого прибора. Всвязи с тем, что показания прибора могут изменяться от старения фотоэлементов и радиоламп или других причин, калибровочную кривую строят каждый месяц к данному прибору.

Рис. 53. Фото-электрокалориметр (ФЭК). 143

Для определения концентрации спермиев в чистый флакон наливают 10 мл профильтрованного 3,5% раствора лимонно-кислого натрия и микропипеткой вносят точно 0,1 мл спермы, не допуская попадания пены. Перед внесением пробы спермы в раствор лимонно-скислого натрия микропипетку вытирают снаружи чистой марлевой салфеткой для удаления излишка спермы. Суспензию спермы тщательно, но осторожно, перемешивают.

Пробу разбавленной спермы из флакона наливают в кюветку с рабочей длиной 10 мм и быстро определяют оптическую плотность, используя красный светофильтр прибора.

Для определения оптической плотности суспензии спермы в левый кюветодержатель, на пути прохождения пучка света, ставят кюветку, наполненную 3,5% раствором лимонно-кислого натрия, а в правый кюветодержатель -две такие же кюветы: одну с разбавленной спермой, другую с 3,5% раствором лимонно-кислого натрия. Определение проводят с использованием красного фильтра № 4. Шкалу отсчета оптической плотности левого барабана ставят на нуль, затем регулятором 1 и 2 (грубой и точной настойки) переводят стрелку гальванометра на нуль.

Вращением ручки в правом кюветодержателе меняют местами кюветы так, чтобы на пути прохождения пучка света стала кювета с 3,5% раствором лимоннокислого натрия. Поворачивая левый барабан, отклонившуюся стрелку гальванометра вновь ставят на нуль, и на красной шкале барабана читают показатель оптической плотности, а по калибровочной кривой находят концентрацию спермиев.

За конечный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов 2 параллельных определений; расхождения между ними не должны превышать 10%.

При всех способах хранения в дозе разбавленной спермы для осеменения коров и телок должно быть не менее 15 млн. спермиев с прямолинейно поступательным движением.

Определение рН спермы

Исследование проводят каждой пробы свежеполученной спермы. Концентрация водородных ионов (рН) определяется калориметрическим или электрометрическим методом. Колориметрические методы базируются на изменении цвета некоторых индикаторов при изменении кислотности среды. Впроизводственных условиях рНспермы можно определить при помощи прибора потенциометра ЛПУ-01 или электрометрически универсального индикатора (бумага или бромтимол). 144

Для определения рНспермы при помощи универсальной индикаторной бумаги полоску ее смачивают исследуемой спермой (пользуясь стеклянной палочкой или пипеткой) и немедленно сравнивают цвет со шкалой, приложенной к пачке индикаторной бумаги.

Сперма быка и барана должна иметь рН7,2-7,6. Если происходит сдвиг реакций спермы в щелочную сторону (рН7,1 и выше), это указывает на плохое качество ее в меньшую жизнеспособность спермиев. Если рНспермы ниже 6,5, то это свидетельствует о значительном накоплении в ней молочной кислоты.

Сдвиг рНспермы хряка и жеребца до 6,9-7,0 указывает на хорошее качество спермы. Отклонение рНдо 7,8-8,0 является показателем низкой жизнеспособности спермиев.