Метод подсчета в камере Горяева

Взятие и разведение крови производят пробирочным методом. В пробирку вносят 0,4 мл разводящей жидкости и 0,02 мл капиллярной крови. Полученное разведение практически считается равным 1: 20. В качестве разводящей жидкости обычно употребляют 3-5%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим (уксусная кислота лизирует эритроциты, метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). Перед заполнением камеры Горяева пробирку с разведенной кровью тщательно встряхивают. Камеру заполняют так же, как для подсчета эритроцитов.

Лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов (1-2 на большой квадрат), поэтому для точности подсчет производят в 100 больших квадратах (неразграфленных).

Расчет: в 100 больших квадратах (1600 малых) сосчитано а лейкоцитов. Помня, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм³, а кровь разведена в 20 раз, рассчитывают количество лейкоцитов в 1 мкл крови: 4000*20 и делят на 1600 = а*1/2. Практически для получения действительного содержания лейкоцитов в 1 мкл крови достаточно полученное при подсчете число разделить пополам и приписать 2 нуля.

Более точным (ошибка 2-3%) и совершенным является подсчет лейкоцитов с помощью электронных аппаратов. Подсчет лейкоцитов в счетчиках частиц производят по тому же принципу, что и эритроцитов. Предварительно кровь разводят и смешивают с каким-либо лизирующим эритроциты реактивом. В автоанализаторе «Техникон» в качестве такового применяют раствор уксусной кислоты, в аппаратах «Культер» и «Целлоскоп» - сапонин или сапоглобин, которые добавляют разведенными (1: 500, 1: 700) в изотоническом растворе хлорида натрия (6 капель на 20 мл разведения)

Приготовление мазков крови

Мазок крови берут обычно у собак и кошек из ушей, в местах где хорошо видны сосуды. Вытирают ухо и пользуются свежевыступившей каплей крови. Кровь берут на предметное стекло, которое должно быть тщательно обезжирено. Затем шлифованным предметным стеклом, или толстым покровным стеклом, которое ставят на первое предметное стекло под углом 45' в непосредственной близости от капли крови, чтобы она растекалась тонким слоем по ширине шлифованного стекла, делают на нем мазок. Хорошо сделанный мазок желтоватого цвета, просвечивает. Вслед за этим мазок фиксируют.

Фиксация мазка делается для того, чтобы уплотнить протоплазму форменных элементов крови и сделать мазок более устойчивым. Для фиксации используется экспресс красители Лейкодиф 200. Набор содержит растворы для быстрого окрашивания мазков крови. Окрашивание проводят погружением в окрашивающие растворы мазков. Интенсивность окрашивания возможно регулировать числом погружений в краситель.

Реактивы:

Фиксирующий раствор (200 мл)

Метанол 24 моль/л

Нафталиновый зеленый 1 мг/л

Окрашивающий раствор 1 (200 мл)

Эозин У 1,73 ммоль/л

Фосфатный буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л

Окрашивающий раствор 2 200 мл

АзурII 12 г./л

Фосфатный буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л

Таблетки для приготовления (5 штук)

промывающего раствора

Фосфатный буфер, рН 7,2, 2,5 ммоль / табл.

Приготовленные на обезжиренных стеклах мазки крови оставляют сохнуть на воздухе. Мазок фиксируют погружением 5 раз на 1 секунду в реактив 1. После каждого погружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о край сосуда. Фиксированный мазок погружают 3 раза на 1 секунду в реактив 2. После каждого погружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о край сосуда. Мазок погружают 6 раз на 1 секунду в реактив 3. После каждого погружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о край сосуда

Стекла обрабатывают промывающим раствором и оставляют сушиться на воздухе, затем микроскопируют

Подсчет лейкоцитарной формулы:

Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов крови. Для более точного ее вычисления необходимо просмотреть не менее 100 лейкоцитов. Так как различные виды лейкоцитов распределяются по мазку неравномерно, необходимо соблюдать следующие правила: проводить подсчет по верхнему и нижнему краю мазка, передвигая мазок по зигзагообразной линии. Считают три поля по самому краю в горизонтальном направлении, затем - три поля, направляясь к середине мазка, и т. и. Для подсчета лейкоцитарной формулы используют специальный клавишный счетчик, на каждом клавише которого отмечается начальная бyква названия лейкоцитов. Результаты подсчета лейкоцитарной формулы записываются в виде лейкограммы.

Исследование мочи

1) Микроскопическое исследование мочи

Приготовление препарата:

В центрифужную пробирку наливают 10 - 15 мл мочи и центрифугируют при 1000-1500 об/мин. 10 минут. После центрифугирования пробирку быстро опрокидывают для удаления надосадочной жидкости, затем переводят в исходное положение, чтобы осадок остался на дне. Пастеровской пипеткой осадок размешивают, небольшую каплю осадка помещают на предметное стекло и накрывают покровным. Микроскопия производится сначала под малым, а затем под большим увеличением. Данный метод позволяет определить начилие или отсутсвие органического и неорганического осадка в моче.

) Тест-полоски для анализаторов мочи CL-50

Полоски предназначены для лабораторного скрининга и индивидуального мониторинга пациента.

параметров:

биохимические компоненты (глюкоза, белок, кетоны, нитриты, билирубин, уробилиноген);

клетки крови (скрытая кровь, лейкоциты);

физико-химические показатели (рН, удельный вес).