Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
История развития хранилищ для нефти: Первые склады нефти появились в XVII веке. Они представляли собой землянные ямы-амбара глубиной 4…5 м...
Топ:
Оценка эффективности инструментов коммуникационной политики: Внешние коммуникации - обмен информацией между организацией и её внешней средой...
Особенности труда и отдыха в условиях низких температур: К работам при низких температурах на открытом воздухе и в не отапливаемых помещениях допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие...
Когда производится ограждение поезда, остановившегося на перегоне: Во всех случаях немедленно должно быть ограждено место препятствия для движения поездов на смежном пути двухпутного...
Интересное:
Аура как энергетическое поле: многослойную ауру человека можно представить себе подобным...
Средства для ингаляционного наркоза: Наркоз наступает в результате вдыхания (ингаляции) средств, которое осуществляют или с помощью маски...
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Дисциплины:
2019-11-28 | 218 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Необходимое оборудование и реактивы для синтеза РНК гидов
· Механические дозаторы на 10 и 20 мкл и наконечники к ним
· Микропробирки
· Термостат
· Амплификатор
· Настольная микроцентрифуга
· Набор Т7 для синтеза РНК (или отдельные компоненты: Т7 РНК полимераза с буфером, рибонуклеозидтрифосфаты, ДНКаза с буфером)
· Набор для выделения РНК (CleanRNA standard, Euro Gene, или другой аналогичный)
Реактивы и оборудование для расщепления ДНК
· Механические дозаторы на 10 и 20 мкл и наконечники к ним
· Микропробирки
· Термостат
· Настольная микроцентрифуга
· Спектрофотометр
· Вода без нуклеаз
· NEB буфер 3.1
· РНК-гид (на основе найденных спейсеров)
· Cas9 нуклеаза
· ДНК-субстрат
· Протеиназа К
Оборудование и реактивы для проведения электрофореза в агарозном геле
Необходимое оборудование и реактивы для ПЦР с геномной ДНК Streptococcus pyogenes phage 315.3
· ДНК-матрица исследуемого вируса
· 8 праймеров (форвард и реверс) (табл. 1)
· ПЦР Буфер
· Дезоксинуклеозидтрифосфаты (дНТФ или dNTP)
· Полимераза
· Стерильная вода
· Механические дозаторы 20 мкл, 200 мкл и 1 мл и наконечники к ним
· Микропробирки для амплификатора
· Амплификатор
Необходимое оборудование и реактивы для электрофореза в агарозном геле:
· Агароза
· TAE-буфер однократный
· Бромистый этидий
· Буфер с красителем для нанесения проб на гель
· ДНК-маркер
· Механический дозатор 20 мкл, наконечники
· Столик для заливки агарозного геля
· Рамка и гребенки для заливки агарозного геля
· СВЧ-печь
· Камера и источник питания для проведения электрофореза
· Трансиллюминатор.
· Табл. 1. Праймеры, используемые для определения наличия или отсутствия фрагментов ДНК фага после рестрикции исследуемыми Сas9-sg RNA комплексами.
|
№ | Фрагмент ДНК фага | Праймер |
1 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635895 спейсер 5(846495-846560) TTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATC Реплицируемый фрагмент: CAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAAACGGTAATCCTACGTTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATCTGGTATTATCCAAAAAAAGGGAAACCATATAATATTAAAAATCCAACAGGTCACCCCTTGCTTGTACCTATCATTCACAGACCAGACGCAGTTAGACCATTTGGTCGCAGTCGCATTACCAAGGCTGGAATGTATC | Прямой: AAAGCGACGGGGATACTTGA Обратный: CTGCGTCTGGTCTGTGAATG |
2 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635895 спейсер 9(1222847 -1222912) ACTAGATTCGCCTCACGCTCTCCTCGCCAAATTT Реплицируемый фрагмент: CTGTGTTAGAATGGACCGCTAAAGGGGTTGATAGCCTTGCGGACCGTATTATTTTCAGGGAGTTTACCAACGATGATTTTAATGCTTGGGAAATTTTTAAAGCGAATAACCCTGATATCTTTTTTGATACAGCCATACAGTCAGCATTAATTGCATCTTGTTGCTTTGTGTACATCATGCCAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAA | Прямой: AGCCTTGCGGACCGTATTAT Обратный: TCAAGTATCCCCGTCGCTTT |
3 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001635975 спейсер 3(790897-790962) TAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATC Реплицируемый фрагмент: CAGGAGCGGAAGACGGCTTACCTAAAATGCAAGTTATCGAAGCTAGTAAAGCGACGGGGATACTTGACCCAACTACATTTTTATTAACAGAGGGTTATGCAATTTTAGAGTCTGACTCAAACGGTAATCCTACGTTAGAGGCCTATTTCACAGACAAAGACATCTGGTATTATCCAAAAAAAGGGAAACCATATAATATTAAAAATCCAACAGGTCACCCCTTGCTTGTACCTATCATTCACAGACCAGACGCAGTTAGACCATTTGGTCGCAGTCGCATTACCAAGGCTGGAATGTATC | Прямой: AAAGCGACGGGGATACTTGA Обратный: CTGCGTCTGGTCTGTGAATG |
4 | Определение фрагмента рестрикции Cas9-sg-RNA на основе Streptococcus pyogenes GCF_001020185 спейсер 3(1100792-1100857) GGAAAGCAGGAGAAAGGACGTTAATATGTC Реплицируемый фрагмент: TTGCGCACTGGATTTGTTACACAACGAAGCCAAAAAGAAAGCAAAGAACCAGCTGTTAAAAAACGACATCCGAAAGGGTGTTTTTTTACTGCTAAAAAATCTACCGAACTGCCGGGAAAGCAGGAGAAAGGACGTTAAATGTCAGAATTTAAAGTTATTGAAACACAAGAAGAGTTGGACACGATTGTGAAAGCTCGCATTGCTCGAGAACGTGAGAAATATCAAGATTACGACCAACTGAAAACTCGTGTTGAAGAACTAGAAACCGAAAACAGCAGCTTACAAACTGCTTTGATGA | Прямой: GGAAAGCAGGAGAAAGGACG Обратный: AGCTGCTGTTTTCGGTTTCT |
|
|
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого...
Таксономические единицы (категории) растений: Каждая система классификации состоит из определённых соподчиненных друг другу...
Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!