Идентификация остаточных растворителей в фармацевтических субстанциях и контроль их количества.

Методики испытаний, приведенные в этой общей статье, могут быть использованы:

1) для идентификации основной массы остаточных растворителей в субстанциях, вспомогательных веществах и готовых лекарственных средствах, если остаточные растворители неизвестны;

2) для определения предельного содержания растворителей, если они присутствуют в субстанциях, вспомогательных веществах и готовых лекарственных средствах; 3) для количественного определения растворителей класса 2, если их предельное содержание превышает 1000 ppm (0,1%), или, если необходимо, для количественного определения растворителей класса 3). Для приготовления испытуемых растворов ниже приведены три растворителя,

а также условия введения газовых проб при парофазной газовой хроматографии.

МЕТОДИКА

Пробоподготовка 1. Применяют при определении остаточных растворителей в веществах, растворимых в воде. Исходный раствор испытуемого образца (1). 0,250 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят объем раствора этим же растворителем до 25,0 мл. Пробоподготовка 2. Применяют при определении остаточных растворителей в веществах, нерастворимых в воде. Исходный раствор испытуемого образца (2). 0,250 г испытуемого образца растворяют в N,N-диметилформамиде Р (ДМФ) и доводят объем раствора этим же растворителем до 25,0 мл. Пробоподготовка 3. Применяют при контроле N,N-диметилацетамида и/или N,N-диметилформамида, если известно или допускается, что один или оба растворителя присутствуют в испытуемом образце. Исходный раствор испытуемого образца (3). 0,250 г испытуемого образца растворяют в 1,3-диметил-2-диметил-2-имидазолидоне Р (ДМИ) и доводят объем раствора этим же растворителем до 25,0 мл.

Раствор остаточного растворителя. 1,0 мл ФСО раствора остаточного растворителя класса 1 доводят водой Р до 100,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят водой Р до 10,0 мл. Раствор остаточных растворителей (b). Соответствующие количества остаточных растворителей класса 2 растворяют в диметилформамиде Р и доводят объем водой Р до 100,0 мл. Объем полученного раствора доводят водой Р до указанной в таблице концентрации, соответствующей 1/20 значений пределов концентраций. Раствор остаточных растворителей (с). 1,00 г растворителя или растворителей, присутствующих в испытуемом образце, растворяют в диметилсульфоксиде Р или в воде Р и доводят объем раствора водой Р до соответствующей концентрации,

Растворы сравнения. Раствор остаточного растворителя и подходящего растворителя помещают во флакон. Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками, покрытыми политетрафторэтиленом, и обжимают алюминиевыми колпачками. Встряхивают до получения однородного раствора.

Холостой раствор (контроль). Готовят аналогично раствору остаточных Растворителей (с), но без добавления остаточных растворителей (используют для проверки отсутствия мешающих пиков).

Испытуемый раствор. 5,0 мл исходного раствора испытуемого образца, подготовленного в соответствии с методикой пробоподготовки, и 1,0 мл холостого раствора помещают во флакон. Проводят хроматографический анализ.

Определение микробиологической чистоты фармацевтических субстанций. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ НЕСТЕРИЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ (СУММАРНОЕ КОЛИЧЕСТВО ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ АЭРОБОВ) Испытания, описанные ниже, позволяют осуществлять количественное определение мезофильных бактерий и грибов, способных расти в аэробных условиях. Испытания предназначены прежде всего для того, чтобы определить, соответствует ли субстанция требованиям микробиологической чистоты, приведенным в частной статье Выполняют испытания в условиях, позволяющих избежать случайной контаминации испытуемого продукта. Меры предосторожности, предпринимаемые для предотвращения контаминации, не должны влиять ни на один из микроорганизмов, обнаруживаемых в ходе испытания. Если испытуемый продукт обладает антимикробной активностью, она должна быть подходящим образом нейтрализована. Если для этой цели используют инактиваторы, должна быть продемонстрирована их эффективность и нетоксичность в отношении микроорганизмов. Если в связи с природой лекарственного средства нельзя использовать метод мембранной фильтрации, а все вышеперечисленные методы устранения его антимикробного действия в отношении данного тест-штамма не эффективны, этот вид испытания не проводят. Суммарное количество жизнеспособных аэробов определяют методом мембранной фильтрации, чашечным методом подсчета или методом последовательных разведений, в соответствии с указаниями в частной статье. Допускается использование автоматизированных методов испытаний. Метод наиболее вероятного числа предназначен для использования в тех случаях, когда другие методы использовать невозможно. При выборе метода испытания необходимо учитывать природу испытуемого лекарственного средства и ожидаемое количество микроорганизмов. Необходимо надлежащим образом провести проверку пригодности выбранной методики. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ За общее число бактерий принимают среднее количество колониеобразующих единиц, обнаруженных на агаризованной среде В или среде №1. За общее число грибов принимают среднее количество колониеобразующих единиц, обнаруженных на агаризованной среде С или среде №2. Суммарное количество жизнеспособных аэробов представляет собой сумму числа бактерий и числа грибов, определенных выше. Если имеются доказательства роста на обеих средах микроорганизмов одинаковых типов, могут быть внесены соответствующие поправки. Если подсчет выполнен методом наиболее вероятного числа, то вычисленное значение представляет собой количество бактерий.

МИКРОБИЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ НЕСТЕРИЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ (ИСПЫТАНИЯ НА НАЛИЧИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ) Методики, изложенные в данной статье, допускают использование селективных питательных сред. Если испытуемый продукт обладает антимикробной активностью, она должна быть соответствующим способом нейтрализована. Допускается использование автоматизированных методов испытаний. Для биохимической идентификации микроорганизмов могут быть использованы готовые тест-системы. Энтеробактерии и некоторые другие грамотрицательные бактерии Испытание предназначено для определения бактерий семейства Enterobacteriaceae, но также позволяет определять и другие типы микроорганизмов (например, Aeromonas, Pseudomonas). Все посевы инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 18 – 20 ч. Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную оксидазную реакцию,ферментируют глюкозу с образованием кислоты (или кислоты и газа) и восстанавливают нитраты в нитриты, лекарственное средство контаминировано бактериями семейства Enterobacteriaceae. Escherichia coli Пересевают на чашки с агаризованной средой Н и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Рост красных, немукоидных колоний грамотрицательных палочек указывает на возможное присутствие E.coli. Для подтверждения проводят соответствующие биохимические тесты, например, по образованию индола. Продукт выдерживает испытание, если подобные колонии не обнаруживаются или подтверждающие биохимические реакции дают отрицательный результат.

Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, не утилизирующие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано E. coli. Salmonella Пересевают не менее чем на две различные агаризованные среды, выбранные из агаризованных сред J, К и L. Инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. На возможное присутствие сальмонелл указывает рост культур, имеющих следующие характерные признаки: Агаризованная среда J: хорошо развитые бесцветные колонии. Агаризованная среда К: хорошо развитые красные или красные с черным центром колонии. Агаризованная среда L: маленькие прозрачные бесцветные или обладающие окраской от розовой до белой колонии, часто окруженные зоной розового или красного цвета. Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella. Pseudomonas aeruginosa Пересевают на чашки с агаризованной средой N и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Если рост микроорганизмов не наблюдается, то продукт выдерживает испытание. Если имеется рост колоний грамотрицательных палочек, выполняют пересев некоторого количества различающихся по морфологическим признакам изолированных колоний на питательный бульон А и инкубируют при 41-430С в течение 18-24 часов. Продукт выдерживает испытание, если при 41-430С роста не происходит. Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию и образуют синезеленый пигмент, лекарственное средство контаминировано Pseudomonas aeruginosa. Staphylococcus aureus Пересевают на чашку с агаризованной средой О и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Наличие черных колоний грамположительных кокков, окруженных прозрачными зонами, свидетельствует о присутствии S. aureus. Подтверждение может быть получено путем проведения соответствующих биохимических тестов, например, на коагулазу и дезоксирибонуклеазу. Если в образце обнаружены грамположительные кокки, которые ферментируют маннит и дают положительную реакцию плазмокоагуляции, лекарственное средство контаминировано Staphylococcus aureus Клостридии Нижеописанные испытания проводят в различных целях. Первый метод предназначен для тех случаев, когда важным является исключение патогенных клостридий, и необходимо провести испытание на их отсутствие. Эти продукты обычно содержат небольшое общее количество микроорганизмов. Второй метод представляет собой полуколичественное определение Clostridium perfringens, и предназначен для продуктов, в которых количество этих микроорганизмов является критерием качества.