Работа №9. Изолирование и качественное обнаружение азотной кислоты в содержимом желудка лабораторных животных

Сущность исследования диализатов водных вытяжек из биоматериала на присутствие азотной кислоты заключается в определении кислотности диализатов с помощью универсальной индикаторной бумаги и в обнаружении аниона кислоты в связанном с ионами водорода виде (свободной кислоты). С этой целью азотную кислоту отгоняют из диализатов с добавлением медных опилок, способствующих ее перегонке. При взаимодействии азотной кислоты с медными опилками образуется оксид азота (II), который кислородом воздуха окисляется до оксида азота (IV) (оранжевые пары.). Оксид азота (IV) в приемнике реагирует с водой с образованием азотной и азотистой кислот:

Cu + 4HNO₃ ® Cu(NO₃)₂ + NO₂­ + H₂O

2NO₂ + H₂O ® HNO₃ + HNO₂

Выделение азотной кислоты из биоматериала и ее отгонка из диализатов.

Материалы и оборудование.

Желудок и его содержимое крыс белых лабораторных – 2 шт., вода дистиллированная, бумага универсальная индикаторная, раствор уксусной кислоты (2 моль/дм³), кислота сульфаминовая, опилки медные, стаканы стеклянные, палочки стеклянные, целлофановая мембрана, прибор для перегонки кислот, баня масляная.

Ход работы.

Желудок крыс вместе с его содержимым измельчают ножницами и заливают дистиллированной водой (10 см³), полученную смесь настаивают в течение 1-1,5 часа, затем вытяжку отфильтровывают и подвергают диализу через целлофановую мембрану. Определяют кислотность (универсальный индикатор) диализата, прибавляют к нему медные опилки (0,1-0,15 г) и отгоняют диализат почти досуха.

В протокол записывают ход работы, результаты наблюдений, формулируют выводы.

Разложение азотистой кислоты сульфаминовой кислотой.

Перед выполнением реакций качественного обнаружения азотной кислоты образовавшуюся азотистую кислоту в дистилляте разлагают сульфаминовой кислотой HOSO₂NO₂:

HNO₂ + HOSO₂NH₂ ® N₂­ + H₂SO₄ + H₂O

Реактивы и оборудование.

Дистиллят, раствор уксусной кислоты (2 моль/дм³), кислота сульфаминовая, пробирки, штатив, пипетки с грушей, шпатель.

Ход работы.

К 1-2 см³ дистиллята прибавляют 0,5 см³ раствора уксусной кислоты и несколько кристалликов сульфаминовой кислоты. После окончания выделения паров азота прибавляют еще 1-2 кристаллика сульфаминовой кислоты до окончательного прекращения выделения газа.

В протокол записывают ход работы, результаты наблюдений, формулируют выводы.

Реакции качественного обнаружения азотной кислоты (ксантопротеиновая реакция).

При отравлениях концентрированной азотной кислотой поражаются ткани языка, пищевода, слизистая желудка, иногда и кожа лица, которые приобретают желтую окраску (ксантопротеиновая реакция, свойственная присутствующим в белке ароматическим аминокислотам: фенилаланину, тирозину, триптофану).

При добавлении концентрированной азотной кислоты к раствору белка, белок выпадает в осадок, а затем при нагревании растворяется с появлением желтой окраски. Реакция основана на образовании нитропроизводных ароматических аминокислот:

Нитропроизводные аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры оранжевой окраски:

Реактивы и оборудование.

Дистиллят, содержащий азотную кислоту, 1 % - ный раствор яичного белка, концентрированный раствор аммиака, пробирки, штатив, пипетки, баня водяная.

Ход работы.

В пробирку наливают 1 см³ раствора яичного белка, добавляют 0,4 см³ дистиллята и нагревают до появления желто-лимонной окраски. После охлаждения в пробирку добавляют 2 см³ концентрированного раствора аммиака; желтая окраска переходит в оранжевую.

В протокол вносят ход работы, результаты наблюдений, формулируют выводы.

Вопросы для самоконтроля.

1. Чем обусловлено токсическое действие минеральных кислот и щелочей?

2. Способ изолирования из биоматериала минеральных кислот, мщелочей и солей.

3. С какой целью применяется диализ в ходе анализа?

4. Методы обнаружения азотной кислоты в диализатах.