Приготовление разбавлений исследуемых вод для биотестирования

Для приготовления разбавлений исследуемых вод используют дистиллированную или отстоянную водопроводную воду.

Предварительно, перед приготовлением необходимых разбавлений вод для исследования, подготавливают соответствующей емкости посуду, в которой будут готовить растворы. Объем используемой посуды должен на 1/3 превышать необходимый объем приготавливаемого разбавления исследуемых вод. Перед приготовлением разбавлений нужно подготовить по возможности два одинаковых сосуда: один для разбавления, а другой для хранения раствора (может случиться, что в ближайшие часы процедуру биотестирования в определенном разбавлении необходимо будет повторить). Как во время приготовления разбавлений, так и при их хранении бутыли или другая посуда обязательно должны быть закрыты предварительно подобранными пробками и снабжены несмываемыми водой надписями о приготовленной концентрации исследуемых вод. Приготовление растворов, разбавлений, проведение биотестирования выполняют при комнатной температуре. Температура дистиллированной и отстоянной водопроводной  и исследуемой воды должна быть также доведена до комнатной температуры перед приготовлением разбавлений. Для приготовления разбавлений берут определенные, отмеренные мерной посудой, объемы исследуемой и разбавляющей (дистиллированной и отстоянной водопроводной) воды. В качестве мерной посуды для объемов меньше 10 см3 используют мерные пипетки. Для объемов более 10 см³ – мерные цилиндры. Поверхностные, пресные, грунтовые и сточные воды с неизвестной степенью токсичности анализируют в диапазоне разбавления 1-16. Сточные воды, если не известны их токсические свойства, могут тестироваться в первичном испытании в большем наборе разведений. Если предварительно известно, что сточные воды обладают гипертоксичностью, а также, если это можно предположить по данным гидрохимического исследования, исследуемые концентрации уменьшают и составляют 1, 0,5 0,25, 0,125, 0,0625  %. Возможен произвольный выбор разведений. Чем выше предполагаемая токсичность, тем большей должна быть кратность разбавлений исходной пробы. После получения предварительных результатов биотестирования при необходимости готовят и анализируют дополнительные разбавления. Если при первичном токсикологическом испытании разбавление сточных вод делают в стандартных (предложенных выше концентрациях) или наугад, то при повторном исследовании разбавления готовят, исходя из полученных результатов проведенных исследований.

В процессе приготовления разбавлений пробы тщательно перемешивают.

При выполнении практического биотестирования используют в основном два (наиболее важных) показателя, характеризующих содержание исследуемой воды в разбавленном растворе: во сколько раз исследуемая вода разбавлена и каково ее процентное содержание в разбавлении. Данные показатели заносят в рабочий журнал (см. Приложение Б).

П р и м е р . Как путем разбавления получить х %-ный раствор сточной воды и рассчитать, во сколько раз она разбавлена. Величину х будем измерять в долях. Тогда единица соответствует раствору, в котором  х - доля исследуемой воды и (1 - х) - доля чистой дистиллированной воды. Дистиллированной  воды в растворе больше, чем сточной в (1- x ) \ x раз.

Степенью разбавления называют значение 1\ x . Если х измеряют в процентах, то это значение записывают в виде:

                                      100%\ x %                                           (1)

Итак, если к одной доле сточной воды добавляют (100 - х) % долей дистиллированной воды, то получают х %-ный раствор.

 Например, для получения 5 %-ного раствора сточных вод вычисляют степень разбавления следующим образом:

100%\5% = 20%

и получают, что 1 доля сточных вод и 19 долей дистиллированной воды составят при смешении 5 %-ный раствор сточных вод, т.е. 5 %-ный раствор сточных вод получат при их 20-кратном разбавлении.

В случае оценки сравнительно потенциальной токсичности фармпрепаратов биотестирование проводят из вытяжки по следующей схеме: таблетку или капсулу, растирают в фарфоровой ступке и растворяют в 100 мл дистиллированной воды (маточный раствор) и готовят растворы в двукратном, четырехкратном, восьмикратном и шестнадцатикратном разбавлении. В случае жидких препаратов содержимое одной ампулы (дозы) растворяют в 100 мл дистиллированной воды (маточный раствор). Все разбавления тестируются по трем повторностям. В качестве контрольной среды используют дистиллированную воду. Биотестирование проводится согласно пункту 8.

Навеска анализируемого химического соединения разводится в дистиллированной воде для получения 1% маточного раствора. Маточный раствор разводится двукратном, четырехкратном, восьмикратном и шестнадцатикратном разбавлениях (по стандартной схеме разбавлений), при необходимости интервал разбавлений может быть изменён. Все разбавления тестируют в трех повторностях. В качестве контроля используют дистиллированную воду. Биотестирование проводится согласно пункту 8.

ПРОЦЕДУРА БИОТЕСТИРОВАНИЯ