Эксперименты по установлению острого и хронического токсического действия.

Для определения острого и/или хронического токсического действия эксперимент сочетается с использованием контроля и серии разбавлений, в которых проявляется острое токсическое или хроническое токсическое действие. По зависимости между кратностью разбавления и анализируемыми параметрами кресс-салата рассчитывают параметры уравнение типа:

                                     Y =а + bX ,                                                   (2)

где Y- средняя величина кратности разбавления, по отношению всхожести средней длине или среднего сухого веса проростков; Х – кратность разбавления.

Эти расчёты используются для экологической интерпретации результатов фитотестирования. На основании данного уравнения рассчитывается кратность разбавления, где данные параметры идентичны показателям полученным в контроле.Таким образом определяется при каком уровне разбавления не фиксируется эффект острой или хронической токсичности.

Для определения острого и хронического действия проводится биотестирование исходных исследуемых  питьевых, грунтовых, поверхностных и сточных вод, фармпрепаратов, отдельных химических веществ и нескольких их разбавлений, приготовленных по п. 7.2.1.4.

Определение токсичности каждой пробы без разбавления и каждого разбавления проводят в трех параллельных сериях. В качестве контроля используют три параллельные серии с дистиллированной водой.

Биотестирование проводят с соблюдением требований к температуре, продолжительности фотопериода и качеству дистиллированной воды. Биотестирование проводят в чашках Петри ЧБН-2 ГОСТ 25336-82 диаметром 100мм. На которых помещается фильтровальная бумага, на которую помещается 30 семян кресс-салата располагаемых друг от друга примерно на равных расстояниях (см. рис. 2)

Рис. 2. Состояние семян на первые сутки эксперимента.

Фильтровальную бумагу смачивают тестируемыми растворами до полного, но не избыточного её увлажнения. В ходе эксперимента в отдельные чашки Петри добавляется тестируемый раствор конкретной концентрации при высыхании фильтровальной бумаги. Контрольная проба представляет собой либо дистиллированную, либо отстоянную водопроводную воду. Продолжительность эксперимента составляет 7 дней. Каждое разбавление и контрольная проба тестируется в трёх повторностях.

Статистическая обработка данных проводится с использованием стандартных методов по программе «Statistica – 5.0 for Windows». Оценку значимости различий среднеарифметических значений проводили с использованием t- критерия Стьюдента.

Этот показатель используется для экологической интерпретации данных фитотестирования. Экологическая интерпретация получаемых данных осуществлялась в соответствии с Методическим руководством и рекомендациями по определению общей токсичности стоков», разработанным Агентством по охране окружающей среды США (Method Guidance…, 2000).

В протоколе отмечают сорт используемого кресс – салата, дату начала эксперимента, температуру и  влажность в помещении.

Список Российских сортов кресс-салата приведён в статье В.П. Мощенков (2008). Обычно в торговой сети обычно представлено 11 сортов кресс-салата:

Кресс-салат Весенний, Кресс-салат Весенний сюрприз, Кресс-салат Данский, Кресс-салат Дукат, Кресс-салат Забава, Кресс-салат Иван да Марья, Кресс-салат Крупнолистный,   Кресс-салат Пикант, Кресс-салат Пучковый. Из них протестированы: Весенний и Витаминный, Ажур, Дукат, Курлет, которые показали сходную реакцию на токсическое воздействие ионов кадмия (Зейферт и др. 2010).

Семена кресс-салата для биотестирования также предлагаются фирмой MicroBioTests Инк (Гент) Бельгия). Эти семена можно использовать   в качестве дополнительного контроля  процедуры биотестирования при одновременном использовании в качестве тест-оъектов других сортов семян.

Результаты наблюдений заносят на отдельный лист (для каждой пробы), листы подшиваются в общую папку для каждой серии опытов, эти данные дублируются в электронной форме.

В ходе эксперимента анализируется характер прорастания семян в начальной стадии роста проростков (см. приложение Г).

Через 7 дней эксперимента в чашках Петри определяют процент всхожести семян и общую длину каждого проростка в мм.

После того, как результаты эксперимента учтены, измеренные ростки укладывают на разграфленную бумагу где в каждой ячейки указана длина конкретного проростка. Ростки сушатся при комнатной температуре в течении 7 суток и на аналитических весах производится взвешивание высушенных проростков. Данные вносятся в компьютер для последующего расчёта.

Все отклонения от установленных процедур, а также данные по каждой серии разбавлений, исходной воды и контролю также заносят в рабочий журнал и протокол результатов эксперимента.

ОБРАБОТКА, ОЦЕНКА И ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ