Наблюдение осмотического гемолиза

Гемолиз – это разрушение мембраны эритроцита, сопровождающееся выходом гемоглобина. Осмотической резистентностью эритроцитов называется их устойчивость к действию гипотонических растворов. В изотоническом (0,9%) растворе NaCl изменений с кровью не происходит, она остается равномерно мутной, эритроциты сохраняются, так как осмотическое давление внутри эритроцитов равно осмотическому давлению в растворе (рис. 3). В гипотоническом (менее 0,9%) растворе NaCl кровь становится прозрачной, ярко-красной, блестящей (лаковой), так как под действием осмотического давления вода передвигается из области с меньшей концентрацией NaCl (из гипотонического раствора NaCl) в область с большей концентрацией NaCl (внутрь эритроцитов). В результате мембраны эритроцитов разрываются и гемоглобин выходит наружу, то есть происходит осмотический гемолиз. В гипертоническом (более 0,9%) растворе NaCl вследствие разницы осмотического давления между эритроцитами и раствором вода выходит из эритроцитов в раствор.

 

Рис. 3. Состояние эритроцита в растворах NaCl разной концентрации

Обозначения: 1 − изотонический (0,9%) раствор NaCl; 2 – гипотонический (менее 0,9%) раствор NaCl; 3 – гипертонический (более 0,9%) раствор NaCl; стрелками показано направление движения воды через мембрану эритроцита под действием осмотического давления.

Осмотическая резистентность эритроцитов к гипотоническим растворам NaClсущественно отличается у новорожденных по сравнению с этим показателем у взрослых. Верхняя граница осмотической резистентности эритроцитов у новорожденных выше, а нижняя граница – ниже, чем у взрослых. Следовательно, в крови новорожденных присутствуют эритроциты как с низкой, так и с высокой осмотической резистентностью. Эта особенность связана с наличием в крови новорожденных одновременно старых, разрушающихся эритроцитов и новых, более устойчивых форм эритроцитов, что также является отражением активного эритропоэза.

Ц ель работы: изучить явление осмотического гемолиза и сравнить осмотическую резистентность эритроцитов у разных испытуемых.

Для работы необходимы: предметные стекла, 0,9% раствор NaCl, 0,3% раствор NaCl, 2 пипетки, спирт, вата, скарификаторы, стеклянные палочки. Исследование про­водят на человеке.

Ход работы

1. Изучите методику исследования явления осмотического гемолиза.

На один конец предметного стекла нанесите 0,9% раствор NaCl, на другой – 0,3% раствор NaCl. Растворы наносите разными пипетками. Протрите палец испытуемого ватой, смоченной спиртом. Сделайте укол пальца и удалите ватой первую каплю крови. Добавьте по капле крови в растворы NaCl. Перемешайте кровь с каждым из растворов NaCl разными стеклянными палочками. На ранку пальца положите вату, смоченную спиртом. Наблюдайте отсутствие изменений крови в 0,9% растворе NaCl. После смешивания крови с 0,3% раствором NaCl наблюдайте, как она становится прозрачной, ярко-красной, блестящей (лаковой). Проведите аналогичный опыт с кровью другого испытуемого.

2. Зарисуйте кровь в 0,9% и 0,3% растворах NaCl.

 

Контрольные вопросы

Сделайте заключение о физиологических механизмах осмотического гемолиза.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Сравните осмотическую резистентность эритроцитов испытуемых, проанализировав степень гемолиза эритроцитов (полный или частичный).

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Объясните наблюдаемые различия осмотической резистентности эритроцитов испытуемых.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Какова причина развития физиологической желтухи у новорожденных в первые дни после рождения

Подпись преподавателя______________________

Лабораторная работа 11

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ

В мембранах эритроцитов присутствуют особые вещества типа полисахаридов, называемые агглютиногенами, а в плазме крови − особые белковые вещества типа глобулинов, называемые агглютининами. Главные агглютиногены эритроцитов – агглютиноген А и агглютиноген В, агглютинины плазмы – агглютинин α и агглютинин β.

Существует 4 комбинации агглютиногенов и агглютининов системы АВО, и, соответственно, выделяют 4 группы крови. К первой группе относится кровь, в эритроцитах которой отсутствуют агглютиногены, а в плазме имеются оба агглютинина (α и β) (табл. 7). Ко второй группе относится кровь, в эритроцитах которой содержится агглютиноген А, а в плазме − агглютинин β. К третьей группе − кровь, в эритроцитах которой имеется агглютиноген В, а в плазме − агглютинин α. В крови четвертой группы в эритроцитах содержатся оба агглютиногена (А и В), а в плазме нет агглютининов.

Таблица 7

Группы крови

Группы	Агглютиногены	Агглютинины
I	0	αβ
II	А	β
III	В	α
IV	АВ	0

 

Группы крови принято обозначать в виде формул, где отражено наличие или отсутствие агглютиногенов и агглютининов, а в скобках указаны группы крови:

0 (I) – α, β;

А (II) – β;

В (III) – α;

АВ (IV) – 0.

В крови человека никогда не присутствуют одновременно агглютиноген А и агглютинин α, а также агглютиноген В и агглютинин β. Если в крови будут присутствовать одноименные агглютиногены и агглютинины (А и α или В и β), то произойдет склеивание эритроцитов вследствие взаимодействия агглютиногенов с агглютининами. Реакция склеивания эритроцитов вследствие взаимодействия одноименных агглютиногенов и агглютининов называется реакцией агглютинации.

Переливание крови возможно только с обязательным учетом группы крови донора (человека, кровь которого переливается) и реципиента (человека, которому вливается кровь) (рис. 4).

Рис. 4. Возможные варианты переливания крови

В основе метода определения групп крови лежит реакция агглютинации. Для определения групп крови пользуются стандартными сыворотками: сывороткой II группы, содержащей агглютинин β, и сывороткой III группы, содержащей агглютинин α. Исследуемую кровь смешивают со стандартными сыворотками II и III групп и по наличию или отсутствию реакции агглютинации определяют группу этой крови.

Возможные варианты реакции агглютинации представлены на рис. 5.

Рис. 5. Определение группы крови по реакции агглютинации

Обозначения: «+» − наличие агглютинации; «−» − отсутствие агглютинации; I, II, III, IV – группы крови.

Примечание. На предметных стеклах слева кровь добавлена к сыворотке II группы, содержащей агглютинин β, справа – к сыворотке III группы, содержащей агглютинин α.

 

Агглютиногены А и В появляются в эритроцитах плода ко 2-3-му месяцу антенатального периода. После рождения ребенка способность агглютиногенов к реакциям с соответствующими агглютининами, низкая вначале, постепенно увеличивается и достигает значений, характерных для взрослых, к 10-20 годам. Агглютинины α и β в отличие от агглютиногенов образуются сравнительно поздно – через 2-3 месяца после рождения ребенка. Титр антител (α и β) у детей первых месяцев жизни низкий.

Цель работы: овладеть методикой определения группы крови.

Для работы необходимы: 3 предметных стекла, карандаш по стеклу, стандартные сыворотки II и III групп, 2 пипетки, спирт, вата, скарификаторы, микроскоп, физиологический раствор. Исследование про­водят на человеке.

 

Ход работы

1. Изучите методику определения группы крови.

На двух предметных стеклах карандашом по стеклу поставьте цифры II и III. На каждое стекло нанесите пипеткой по большой капле стандартной сыворотки соответствующей группы. Чтобы не перепутать пипетки, пометьте их. Протрите палец ватой, смоченной спиртом. Сделайте укол пальца, и после удаления ватой первой капли крови углом третьего предметного стекла снимите небольшую каплю крови и перенесите ее в сыворотку II группы. Количество крови должно быть в 3-4 раза меньше, чем сыворотки, иначе кровь может разбавить концентрацию агглютинина в сыворотке и реакция агглютинации не произойдет, даже если в эритроцитах исследуемой крови будет одноименный агглютиноген. Перемешайте углом предметного стекла кровь и сыворотку до равномерной окраски смеси. Переверните предметное стекло в руке и чистым углом возьмите с пальца вторую небольшую каплю крови, перемешайте ее с сывороткой III группы. На ранку пальца положите вату, смоченную спиртом. Возьмите предметные стекла с полученными смесями и, слегка покачивая их, наблюдайте в течение 5 мин, произошла ли реакция агглютинации.

Для примера разберем один из возможных вариантов реакции агглютинации. Предположим, что в сыворотке III группы произошла реакция агглютинации, а в сыворотке II группы ее нет. Следовательно, в эритроцитах исследуемой крови имеется агглютиноген А (так как в сыворотке III группы содержится агглютинин α, который и склеил эритроциты, содержащие агглютиноген А), но нет агглютиногена В (иначе агглютинин β, содержащийся в сыворотке II группы, склеил бы эритроциты, если бы они содержали агглютиноген В). Исходя из формул крови, делаем вывод, что исследуемая кровь II группы.

Поставьте предметные стекла под микроскоп и наблюдайте изменения эритроцитов. Иногда в сыворотках, где нет агглютинации, эритроциты могут склеиваться в «монетные столбики», особенно, когда температура окружающей среды низкая. Это так называемая ложная агглютинация, или панагглютинация. Чтобы не спутать ее с истинной агглютинацией, добавьте в каждую смесь 1-2 капли физиологического раствора и перемешайте (каждую смесь чистым углом предметного стекла). Под микроскопом будет видно, что там, где была истинная агглютинация, эритроциты остались склеенными, а там, где была ложная агглютинация, «монетные столбики» распались.

2. Зарисуйте полученные в опыте изменения крови (или их отсутствие) в стандартных сыворотках и в растворах Цоликлонов.  

 

Контрольные вопросы

Объясните наблюдаемые явления и напишите формулу группы исследованной крови.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Что такое агглютинины?

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

Напишите формулы всех 4 групп крови.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

Что такое агглютинация?

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Человека с какой группой крови можно назвать «универсальным донором» и почему?

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Предположим, что в сыворотке III группы произошла реакция агглютинации, а в сыворотке II группы ее нет. Какая группа крови у исследуемого? Ответ объясните.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Подпись преподавателя______________________

Лабораторная работа 12