Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
История развития хранилищ для нефти: Первые склады нефти появились в XVII веке. Они представляли собой землянные ямы-амбара глубиной 4…5 м...
Топ:
Когда производится ограждение поезда, остановившегося на перегоне: Во всех случаях немедленно должно быть ограждено место препятствия для движения поездов на смежном пути двухпутного...
Комплексной системы оценки состояния охраны труда на производственном объекте (КСОТ-П): Цели и задачи Комплексной системы оценки состояния охраны труда и определению факторов рисков по охране труда...
Интересное:
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Отражение на счетах бухгалтерского учета процесса приобретения: Процесс заготовления представляет систему экономических событий, включающих приобретение организацией у поставщиков сырья...
Аура как энергетическое поле: многослойную ауру человека можно представить себе подобным...
Дисциплины:
2022-10-05 | 37 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Принцип метода напоминает РИФ, но вместо флуоресцирующей метки используется ферментная (чаще фермент пероксидаза).
1-ый вариант ИФА (направлен на обнаружение антигенов)
l Цели постановки:
1. Сероиндикация (АГ – молекулы на поверхности бактериальных клеток или вирусных частиц);
2. Идентификация вирусов (на третьем этапе вирусологического метода диагностики);
3. Определение уровней цитокинов, белков системы комплемента, онкомаркеров в сыворотке крови (в данном случае АГ – это сами молекулы цитокинов, онкомаркеров, белков системы комплемента и т.д.);
4. Иммуногистохимические исследования (определение специфических рецепторов на поверхности клеток тканевых срезов – антигенов).
Ставится в лунках планшета, ко дну которых заранее адсорбированы известные АТ против определённых АГ. Вносят исследуемый образец, инкубируют в шейкере, промывают буферным раствором. Далее в лунки вносят вторые антитела, меченные ферментом, вновь инкубируют в шейкере и промывают. После второй отмывки в лунки вносят субстрат-индикаторную систему, состоящую из субстрата для пероксидазы (перекись водорода) и цветового индикатора (например, ТМБ – тетраметилбензидин – окрашивает образец в синий цвет или ОФДА – ортофенилендиамин – окрашивает образец в коричневый цвет). Останавливают реакцию добавлением стоп-реагента (слабый раствор соляной или серной кислоты). Учёт реакции – по измерению оптической плотности содержимого лунок планшета с помощью спектрофотометра или ИФА-анализатора. Количество АГ в образце определяется по калибровочной кривой (график, где определённому содержанию АГ соответствует определённое значение оптической плотности раствора, измеряемое спектрофотометром или ИФА-анализатором). Калибровочные кривые строят предварительно по стандартам (фабричные растворы, содержащие заведомо известное количество того или иного АГ).
|
2-ой вариант ИФА (направлен на выявление антител)
l Цели постановки:
1. Серодиагностика (определение количества АТ против бактериальных, вирусных, протозойных, грибковых АГ в сыворотке крови);
2. Определение уровней иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови и других биологических жидкостях;
3. Определение уровней аутоагрессивных антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях (используется в диагностике аутоиммунных заболеваний).
К дну лунок планшета адсорбированы известные АГ (диагностикумы) к ним добавляют сыворотку крови пациента. (биологическую жидкость). Инкубируют в шейкере, промывают. Далее в каждую лунку вносят антиглобулиновую сыворотку (АГС), содержащую АТ к человеческим иммуноглобулинам, меченные пероксидазой, инкубируют в шейкере, затем промывают и вносят субстрат-индикаторную систему. Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента (слабый раствор соляной или серной кислоты). Учёт реакции – с помощью спектрофотометра или ИФА-анализатора по измерению оптической плотности содержимого лунки планшета. Количество АТ в сыворотке крови определяется по калибровочной кривой (график, где определённому содержанию АТ соответствует определённое значение оптической плотности раствора, измеряемое спектрофотометром или ИФА-анализатором). Калибровочные кривые строят предварительно по стандартам (фабричные растворы, содержащие заведомо известное количество тех или иных АТ)
Реакция гемагглютинации (РГА)
¨ Используется только для индикации вирусов, содержащих гемагглютинины
¨ Ставится в лунках планшета
¨ Компоненты:
¡ жидкая питательная среда, в которой культивировали культуру клеток,
¡ взвесь эритроцитов
|
¨ Учет – по характеру осадка эритроцитов:
¡ при наличии вируса с гемагглютининами – “зонтик”,
¡ при отсутствии – “пуговка”.
¨ Если вирус обнаружен, то жидкость называется вируссодержащей жидкостью (ВСЖ)
РТГА для идентификации вируса
¨ ставится в лунках планшета
¨ компоненты реакции:
1. ВСЖ
2. специфическая противовирусная сыворотка
3. эритроциты
¨ Учет:
если сыворотка подходит к вирусу, то его гемагглютинины блокируются антителами, а значит не вызывают агглютинацию эритроцитов - осадок в виде “пуговки” (положительная реакция)
если сыворотка не подходит к вирусу, он агглютинирует эритроциты – осадок в виде “зонтика” (отрицательная реакция)
РТГА с целью серодиагностики ставится с «парными» сыворотками и считается положительной, если произошло увеличение титра АТ не менее чем в 4 раза. РТГА ставится только при вирусных инфекциях.
|
|
Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...
Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций...
История создания датчика движения: Первый прибор для обнаружения движения был изобретен немецким физиком Генрихом Герцем...
Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!