Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...
Археология об основании Рима: Новые раскопки проясняют и такой острый дискуссионный вопрос, как дата самого возникновения Рима...
Топ:
Оценка эффективности инструментов коммуникационной политики: Внешние коммуникации - обмен информацией между организацией и её внешней средой...
Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов...
Интересное:
Что нужно делать при лейкемии: Прежде всего, необходимо выяснить, не страдаете ли вы каким-либо душевным недугом...
Инженерная защита территорий, зданий и сооружений от опасных геологических процессов: Изучение оползневых явлений, оценка устойчивости склонов и проектирование противооползневых сооружений — актуальнейшие задачи, стоящие перед отечественными...
Лечение прогрессирующих форм рака: Одним из наиболее важных достижений экспериментальной химиотерапии опухолей, начатой в 60-х и реализованной в 70-х годах, является...
Дисциплины:
2022-10-05 | 42 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Используется как отдельный метод.
Определяет форму, размеры, расположение м/о их структуру, возможность окрашиваться различными красителями. Так же определить наличие спор, капсул, грамм + или -, кислотоустойчивости бактерий, наличие ядра.
6. Методы окраски микробов и их отдельных структур.
Методы окраски.
(Извините, что прерываю, но! Я не знаю куда отнести вопрос про изготовление мазка(препарата), поэтому впишу сюда информацию из тетради, там все понятно и логично)
Чтобы приготовить мазок, на середину чистого обезжиренного (с помощью мыла) предметного стекла наносят исследуемый материал (с помощью бактериальной петли его забирают с пит.среды, делают взвесь в капле физраствора) и равномерно распределяют его на стекле до образования тонкого мазка. Препарат высушивают просто на воздухе и мазком кверху проводят через пламя спиртовки 2-3 раза – зафиксировали! После окраски промывают водой и высушивают, после чего его можно микроскопировать.
(Теперь про окраску)
Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Окраску мазка производят простыми или сложными методами.
ПРОСТОЙ МЕТОД ОКРАШИВАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ (информация из теради)
1. На зафиксированный мазок:
1.1. При применении растворов красителей нанести водно-спиртовой раствор краски так, чтобы весь мазок был покрыт краской.
1.2. При применении красящих лент поместить ленту на препарат (мазок). сверху намочить ленту водой и прижать к стеклу стеклянной палочкой.
2. Через 1-1,5 мин (экспозиция зависит от вида красителя: для генцианвиолета-1-2 мин, для фуксина -1-1,5 мин, для метиленового синего-3-5 мин) смыть краску водой (краска должна остаться только на мазке) и промокнуть остатки воды фильтровальной бумагой (все стекло должно быть сухим).
|
3. Микроскопировать с иммерсионной системой (см. правила иммерсионной микроскопии)
ПРИМЕЧАНИЯ: 1. Окраска мазков производится на мостиках (салазках), расположенных над кюветой.
2. При применении растворов красителей все краски и реактивы наносятся пипетками. помещенными во флаконы с реактивами. После взятия реактива пипетку поместить в свой флакон.
3. Флаконы с реактивами и красителями из штатива не вынимать,
4. Для высушивания мазков пользоваться нарезанной фильтровальной бумагой (в штативе).
Простые заключаются в окраске препарата одним красителем. При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, они могут быть основные или кислые.
К Кислым красителям относятся — эритрозин, кислый фуксин, эозин.
Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно используют основные или нейтральныекрасители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Микроорганизмы окрашивают, наливая водно-спиртовой раствор красителя на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены
Сложные методы включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. С помощью них выделяют основные структуры клетки (сча будет мини-табличка, чтобы легче запоминалось, строго не судите)
|
Структура (свойство) клетки, которая окрашивается | Название метода | Как он делается | Что мы видим в итоге (картинки для наглядности) |
Капсула | По Бурри – Гимсу (можно запомнить, типа капсула защищает от бури) | 1.Смешиваем каплю взвеси бактерий с капелей туши 2. При помощи стекла делаем мазок,сушим его, фиксируем 3.На мазок наносим водный раствор фуксина (на 1- 2 мин) 4. Промываем водой, сушим, смотрим | Сами бактерии окрасились в красный цвет, а капсулы (обычно состоят из слизи и они не окрашиваются), мы видим четко на черно-розовом фоне. |
Клеточная стенка | Метод окраски по Грамму NB! Метод окраски по Граму является важным диагностическим методом. Все бактерии по отношению к окраске по Граму делятся на грамположительные - темно-фиолетового цвета и грамотрицательные - красного. Способность окрашиваться в тот или иной цвет зависит от строения их клеточной стенки и коррелирует со многими другими свойствами бактерий. У грамположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, у грамотрицательных, напротив, эти вещества содержатся в большом количестве. Кроме того, у грамположительных бактерий имеется магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, отсутствующая у грамотрицательных. Она и образует прочный химический комплекс с белком, генцианвиолетом и йодом, который не разрушается при кратковременном действии спирта. У грамотрицательных такой комплекс не образуется. Они легко обесцвечиваются под действием спирта. Фуксин докрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет. | 1. Фиксированный мазок окрашивают раствором генциановиолета в течение 1-2 минут, затем краситель сливают. 2.В течение 1 минуты обрабатывают мазок раствором Люголя. 3.Обесцвечивают спиртом 30-60 сек. 4.Промывают водой. 5.Докрашивают мазок водным раствором фуксина 1-2 минуты, промывают водой, сушат и микроскопируют. ГР+ ФИОЛЕТОВЫЕ ГР- КРАСНЫЕ | |
Включения (зерна волютина) | По методу Нейссера Зерна волютина метиленовым синим окрашиваются в черный цвет. При промывке водой тело клетки обесцвечивается и затем в течение 1 мин докрашивается везувином в желто-коричневый цвет. (Чтобы хотя бы это тело было видно) | 1.Фиксированный мазок окрашивают ацетатом синьки Нейссера (легко запомнить, типа Нейсер был алкашом) в теч. 2-3 мин 2. Наливают раствор Люголя на 20-30 сек. 3.Промывают водой, окрашивают везувином 1-3 мин. 4.Промывают водой, высушивают. | Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна волютина - в темно-синий, почти черный цвет. |
дифференциации кислотоустойчивых бактерий (возбудителей туберкулеза и лепры) от некислотоустойчивых. | По Цилю –Нильсону Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий отличается высоким содержанием липидов. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем. | 1.Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3-5 мин. 2.Обесцвечивают раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1-2 мин. 3.Промывают водой. 4.Докрашивают 3-5 мин метиленовым синим (дополнительный краситель). | Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые - в сине-голубой. |
Споры | Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты (она разрыхляет оболочку спор и тем самым повышает её окрашиваемость), при этом все окрашивается в красный цвет. А уже потом, когда красим по Цилю -Нильсену при обработке серной кислотой (п.2) вегетативные формы обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим, а СПОРЫ ОСТАЮТСЯ КРАСНЫМИ | 1.На нефиксированный мазок наносим HCl кислоту и подогреваем над спиртовкой 2-3 мин. 2. кислоту сливаем, промываем, сушим, фиксируем и красим по Цилю-Нильсену | Вегетативные формы – синие, споры – красные (см.2 столбик почему) |
Вирусы, а также микроструктуры бактерии (в том числе риккетсий, спирохет), жгутиков, аргирофильных и аргентофильных включений и гранул | Серебрение по Морозову. Принцип метода состоит в том, что при обработке аммиачным раствором серебра специфические аргентофильные ингредиенты объекта избирательно окрашиваются в коричневато-чёрный цвет. | ||
УНИВЕРСАЛЬНО | По Романовскому-Гимзе | смесь азура, эозина и метиленового синего | При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра - красно-фиолетовый. |
|
|
|
Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰)...
Наброски и зарисовки растений, плодов, цветов: Освоить конструктивное построение структуры дерева через зарисовки отдельных деревьев, группы деревьев...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Типы оградительных сооружений в морском порту: По расположению оградительных сооружений в плане различают волноломы, обе оконечности...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!