Обнаружение влагалищных трихомонад в нативном материале

Принцип. Возбудителя обнаруживают по его характерному движению среди клеточных элементов в препарате, приготовленном сразу после взятия материала.

Реактив. Изотонический раствор хлорида натрия: 0,9 г хлорида натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

Ход определения. На предметное стекло наносят каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия и добавляют исследуемое отделяемое из очага заболевания. Взвесь накрывают покровным стеклом и микроскопируют (объектив 40, окуляр 7 или 10). Исследование проводят немедленно после приготовления препарата. Влагалищная трихомонада имеет грушевидную, округлую или овальную форму тела, величину немного больше лейкоцита, обладает характерным толчкообразным движением ундулирующей мембраны и жгутиков. К ошибкам может привести наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают впечатление подвижных трихвмонад. При длительном пребывании при комнатной температуре трихомонады довольно быстро теряют свою подвижность, поэтому метод исследования окрашенных препаратов является более точным и удобным.

Препараты можно окрашивать по Романовскому — Гимзе, раствором метиленового синего (10 г/л) и поГраму.

В препарате, окрашенном метиленовым синим, трихомонады имеют округлую, овальную, полигональную форму, расположены в слизи, между клеточными элементами; четко просматривается оболочка; ядро расположено эксцентрично, интенсивно окрашено в синий цвет; цитоплазма нежная, сетчатая светло-синяя; вакуоли бесцветны.

В мазках, окрашенных по Граму, влагалищные трихомонады окрашиваются бледно: оболочка в виде тонкой полоски окружает сетчатую цитоплазму оранжево-красного цвета, ядро сиреневого или фиолетового цвета, жгутики и ундулирующая мембрана не просматриваются.

Более четко трихомонады выявляются в мазках, окрашенных по Романовскому — Гимзе. Они имеют грушевидную, овальную, круглую или неправильную форму, с хорошо выраженными контурами клетки. Ядро овальное, круглое, в форме сливовой косточки или лисьего глаза, окрашено в фиолетовый цвет. Цитоплазма ячеистая, пенистая, вакуолизированная, окрашена в синий или голубовато-серый цвет. В цитоплазме может выявляться фагоцитированная микробная флора.

 

Урогенитальный хламидиоз

Урогенитальный хламидиоз — одна из самых распространенных инфекций. У мужчин чаще поражается уретра, у женщин — цервикальный канал, покрытый цилиндрическим эпителием. Вагинитов хламидии не вызывают, так как вагина покрыта плоским эпителием. Хламидиоз часто протекает бессимптомно. Выделения слизистого характера в небольшом количестве. Хламидии могут вызывать послеродовый эндометрит, сальпингит, конъюнктивит у новорожденных, пневмонии, бесплодие и др.

Хламидии — облигатные внутриклеточные паразиты с уникальным циклом развития, включающим две формы существования. Элементарное тельце — инфекционная форма возбудителя, поражающая клетки (окрашивается в красно-фиолетовый цвет). Ретикулярное тельце является неинфекционной (вегетативной) формой хламидии, образуется в процессе их размножения в клетке (окрашивается в синий цвет). Хламидии растут, размножаются и созревают в виде микроколоний в цитоплазматиче-ском пузырьке (вакуоли). В цитоплазме клеток образуются мембраноограниченные включения — вакуоли (тельца Провачека). Хламидийное тельце оттесняет ядро к периферии и может занимать значительную часть цитоплазмы. В цитоплазме одной клетки может быть несколько микроколоний хламидийных включений.

Своевременная диагностика хламидиоза определяет исход заболевания. Для диагностики хламидиоза может использоваться ряд методов.

1. Серологический метод: реакция связывания комплемента (РСК) выявляет специфические антитела у 50% больных. При лока лизованных формах хламидиоза получают низкие титры антител: 1: 4—1: 32. Сложна трактовка результатов исследования: трудно решить вопрос, болен обследуемый или уже переболел. РСК мо жет использоваться для диагностики хламидийных пневмоний, болезни Рейтера.

2. Иммуноферментный анализ (ИФА) с помощью монокло- нальных антител может быть использован как скрининговый тест. Этот метод менее чувствительный при хронически протекающем хламидиозе.

3. Иммунофлюоресцентные методы (РИФ) имеют чувстви тельность 80%. Субъективность оценки результатов исследования и частые ложноположительные результаты не делают возможным использование РИФ для контроля за излеченностью. Затрудняет исследование тот факт, что в соскобы не всегда попадает эпите лий, пораженный хламидиями.

4.    Культуральная диагностика с  выделением  возбудителя в культуре клеток Мс-Соу и куриных эмбрионах является «золотым стандартом». Метод специфичный, но технически сложный, обычно используется для научных исследований.

5.    Самыми чувствительными и точными методами выявления хламидийной инфекции являются способы, основанные на полимеразной цепной реакции и электронная микроскопия.

6.    Исследование препаратов, окрашенных по Романовскому — Гимзе, позволяет получить только ориентировочные результаты. Морфологический метод очень трудоемкий и субъективный, выявляемость до 15—20%. Метод позволяет обнаружить в окрашенном цилиндрическом эпителии, полученном из цервикального канала, уретры или в соскобах из конъюнктивы глаз, цитоплазматические включения хламидий. У мужчин соскоб из уретры берут сразу после мочеиспускания на расстоянии 2—4 см от головки члена. У женщин материал берут из цервикального канала ежиком,  предварительно удалив  пробку из  цервикса. В исследуемом материале должен быть цилиндрический эпите лий, так как многослойный плоский эпителий хламидиями не поражается.

В препарате, окрашенном по Романовскому — Гимзе, хламидийные включения следует дифференцировать с зернистыми структурами травмированных ядер (кариорексис), с розовато-синими зернами муцина, диффузной зернистостью цитоплазмы, пигментными зернистыми массами, эозинофильными зернами разрушенных клеток.

Урогенитальный кандидоз

В развитии воспалительных процессов половых органов большую роль играет поражение дрожжеподобными грибами рода Candida. Они подавляют не только патогенные бактерии, но и палочки молочно-кислого брожения, являющиеся физиологическими антагонистами дрожжеподобных грибов. В результате рН влагалища изменяется в щелочную сторону, процесс самоочищения нарушается.

При кандидомикозе слизистой оболочки исследованию подлежит беловатый или желтоватый налет (пленка). Пленка состоит из псевдомицелия гриба, дрожжеподобных клеток, спущенного эпителия и небольшого числа лейкоцитов. Мазки окрашивают раствором метиленовой сини (10 г/л), по Романовскому — Гимзе, Граму.

Характерным для микроскопической картины кандидомикоза является наличие клеток овальной или грушевидной формы, в

1/2 раза больших поперечных нитей псевдомицелия гриба. В препаратах женских и очень редко мужских выделений встречается микроорганизм типа Leptothrix, который, как и дрожжеподобный гриб рода Candida, является условно патогенным. Палочки Leptothrix встречаются в виде тонких длинных прямых и изогнутых нитей разной длины, иногда располагающихся цепочками и симулирующих нити мицелия. Часто эти элементы видны в виде ветвящихся причудливых нитей, образующих сплетение в виде войлока. Клинически картина напоминает молочницу слизистой оболочки.

Поражение влагалища грибами наблюдается при диабете, лечении антибиотиками широкого спектра действия, на фоне иммунодепрессивной терапии, использовании пероральных контрацептивов, внутриматочных спиралей, гормональных препаратов. Источником инфекции может быть и сам организм, в котором постоянно находятся возбудители некоторых микозов.

На вирусную природу воспаления (вирус простого герпеса, папилломавирус и др.) может указывать присутствие гигантских многоядерных клеток. Ядра гипертрофированные, гипохромные, контуры хроматина размыты, ядерная оболочка уплотнена, конту-рирует четко за счет краевого (маргинального) расположения хроматина. Ядрышки гипертрофированные, могут подвергаться лизису и фрагментизации.

Признаком цитомегаловирусной инфекции считают наличие крупных клеток, обычно округлой формы, с увеличенными ядрами. В ядре обнаруживаются гомогенные включения округлой формы, окруженные светлым ободком. Эти включения занимают почти все ядро и напоминают птичий глаз.

Для подтверждения вирусной природы заболевания необходимо применение серологических, иммунофлюоресцентных, электронно-микроскопических и других методов исследования.

Сифилис

Материалом для исследования служит тканевая жидкость из сифилитических элементов, а также пунктат лимфатических узлов. Ввиду опасности заражения при работе с этим материалом работать необходимо в резиновых перчатках. Для получения тканевой жидкости очаг поражения тщательно очищают тампоном. Язву или папулу сдавливают с боков пальцами. Петлей производят осторожные (чтобы не вызвать кровотечение) поглаживающие движения по поверхности эрозии или язвы. Вскоре поверхность эрозии становится блестящей в результате просачивания тканевой жидкости. На предметное стекло наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия, прибавляют к ней каплю тканевой жидкости, накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле при боковом освещении. Принцип исследования препарата в темном поле зрения основан на физическом свойстве светоотражения. Падающие сбоку световые лучи рассеиваются плотными частицами (в частности бледной спирохетой), которые выглядят благодаря этому ярко светящимися на темном фоне. Темное поле можно получить, заменив обычный конденсор специальным параболоид-конденсором. На верхнюю линзу конденсора наносят каплю воды или кедрового масла, приготовленный препарат укладывают на предметный столик микроскопа так, чтобы он соприкасался с этой каплей. Препарат рассматривают при большом увеличении, пользуясь мощным источником света.

Для получения темного поля зрения может быть использован обычный конденсор, между двумя линзами которого вставляется кружок черной бумаги (метод М. П. Архангельского).

В темном поле зрения бледные трепонемы имеют вид подвижных серебристых спиралей или пунктира в связи с более ярким освещением выпуклой части завитков. Завитки равномерные, количество их колеблется от 8 до 14. Для бледных трепонем характерно весьма активное поступательное движение, движение вокруг своей оси, маятникообразное и волнообразное движение.

Спирохеты сапрофиты, довольно часто встречающиеся на половых органах, имеют не более 6 неравномерных завитков, более грубые, обладают более резкими беспорядочными движениями.

Для обнаружения бледной трепонемы используют методы окраски Романовского и Бурри. Препарат окрашивают разведенной по титру краской Романовского в течение 14—15 мин. Бледная трепонема окрашивается в розовый цвет, а другие спирохеты — в синий.

Метод Бурри. На край предметного стекла наносят 1—2 капли туши и такое же количество тканевой жидкости из очага поражения. Капли осторожно смешивают и распределяют вдоль предметного стекла. Мазок не должен быть толстым. Препарат высушивают и изучают под микроскопом с иммерсионной системой. На темно-сером фоне препарата хорошо видны бледные трепонемы.

Помимо указанных методов для диагностики сифилиса используют реакцию преципитации, реакции связывания комплемента (РСК), иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), иммунофлюоресценции (РИФ). Применение в комплексе всех этих методов позволяет обеспечить диагностику сифилиса.