Развитие инфекционного процесса

При поражении кожи и слизистых оболочек проникают в подлежащие слои и при ослабленном иммунитете могут вызвать воспалительную реакцию.

Зависит от:
1.места проникновения
2. количества попавших бактерий
3. иммунореактивности организма

Наиболее подвержены стафилококковой инфекции:
Новорожденные (недоношенные)
Их матери
Пожилые люди
Пациенты при кортикостероидной терапии
Пациенты при нерациональной антимикробной терапии
На фоне ДИСБАКТЕРИОЗА!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
ДИСБАКТЕРИОЗ. Нерациональная антимикробная терапия приводит к развитию дисбактериоза, поскольку при этом уменьшается антагонистическое действие нормальной микрофлоры

Естественная среда обитания стафилококков
Слизистая оболочка носа, носоглотки
На коже, особенно на выходе апикальных желез →
Воздух, пыль, предметы обихода, одежда
На халатах мед. персонала стафилококки обнаруживают в 16-64% случаев

Таксономия и систематика рода Staphylococcus

9-е издание определителя Берги 1994 г.
Группа факультативно-анаэробных грамположительных кокков
Каталазоположительные!!!

Около 30 видов:
S. aureus - типовой вид
S. epidermidis
S. saprophyticus
S. sciuri
S. caseolyticus

Морфологические свойства стафилококков
Клетки сферической формы
Диаметр 0.5-1.5 мкм
Хаотические скопления
Грам+
Микрокапсула ПС
Жгутиков нет
Спор не образует
Пили на ППС

\\Морфологические и тинкториальные свойства стафилококков – окр по грамму и фуксином\\Характерное для стафилококков –гроздъевидное расположение клеток\\Ультратонкий срез клеток S. aureus \\

Морфология колоний S. aureus
Крупные колонии – 5 мм в диаметре
от белого до золотисто-желтого цвета

\\Ультратонкий срез 1-суточного бактериального газона S. aureus \\

Культуральные и биохимические свойства S. aureus
1. факультативные анаэробы (O/F-тест = +/+)
2. Каталаза +
3. Оптимальная t° роста – 35-40°С
4. рН – 7,0 - 7,5
5. рост на среде с 6,5-10% NaCl
6. рост на среде с 40% желчи

Антигенные свойства S. aureus
АГ свойствами обладают: микрокапсула, пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А и др. белки.
Главный поверхностный АГ -   Тейхоевая кислота!!!!!!!!! (многоатомные спирты, сахара, аминокислоты, фосфаты)

Белок А S. aureus Составляет 6% от массы клеточной стенки. На 325 молекул ПГ – 1 молекула белка А
 Активность неблагоприятна для макроорганизма:
Неспецифическое взаимодействие с IgG (Fc-фрагментом)
Повреждение тромбоцитов
Связывание белков системы комплемента
Препятствует фагоцитозу

Факторы патогенности стафилококков
Экзоферменты:
1. Коагулаза - свертывание плазмы крови
2. ДНК-аза - только у S. aureus
3. Протеинкиназа -желточный фактор- на жирные кислоты
4. Фосфатаза – разрушает мембраны
5. Гиалуронидаза - гидролизует гиалуроновую кислоту
6. Стафилокиназа - фибринолизин -лизирует сгустки фибрина

Токсины:
1. Гемолизин – 4 типа: α,β,γ,δ (дельта) - лизирует эритроциты кролика и барана, но не человека
2. Лейкоцидин - киллерное действие на нейтрофилы и макрофаги
3. Эксфолиативный токсин - синдром обожженной кожи
4. Пирогенный экзотоксин - токсический шок
5. Энтеротоксин - пищевые отравления

Выводы по патогенности S.aureus: обладают большим потенциалом патогенности, но не все признаки 100% присутствуют, все постоянно меняется

Лабораторная диагностика
Выделение чистой культуры
Идентификация строится:
1. окраска по Граму
2. выявление гроздъевидного расположения клеток
3. каталаза+ (тест с Н2О2)
4. Коагулаза+
5. O/F тест
6. Фаготипирование

Чувствительность к антимикробным препаратам

Метициллинчувствительные чувствительны к:
метициллину
оксациллину
клоксациллину
диклоксациллину
Иногда сочетают с рифампицином или гентамицином

Метициллинустойчивые чувствительны к:
 ванкомицину вместе с рифампицином или с гентамицином

Патогенные c трептококки

План Стрептококки
1. Заболевания
2. Новые инвазивные формы стрептококковой инфекции
3. Таксономия и систематика
4. Классификация
5. Морфологические свойства
6. Культуральные и биохимические свойства
7. Факторы патогенности
8. Антигенные свойства. Классификация.
9. Лабораторная диагностика
10. Чувствительность к антимикробным препаратам

\\Род Streptococcus (цепочки из клеток)\\

Заболевания: Ангина, Рожистое воспаление, Скарлатина, Эндокардит, Ревматизм, Гломерулонефрит, Родовой сепсис, Фарингит, Тонзиллит

\\Стрептококковая ангина. Лопнувшие нагноившиеся фолликулы и фибринозные налеты образовали плотную пленку. \\ Стрептококковая ангина Фолликулы и фибринозные налеты образовали плотную пленку \\

Новые инвазивные формы стрептококковой инфекции
Некротический миозит
Некротический фасцит
Некротический шок
Септический шок

\\Стрептококковая ангина. Некротические изменения в тканях и биопленки. \\

Таксономия и систематика рода Streptococcus
S. pyogenes
S. agalactiae
S. pneumonia
S. faecalis (Enterococcus faecalis)
S. lactis (Lactococcus lactis)

Классификация стрептококков по способности к гемолизу
1. β – гемолитические
2. α – гемолитические
3. γ - негемолитические

\\Кровяной агар для определения гемолитической активности стрептококков\\

Классификация стрептококков по степени резистентности к физико-химическим факторам
1. рост при температуре 45°С и 10°С
2. способность роста на среде с 40% желчи
3. способность роста на среде с 6,5% NaCl

Классификация стрептококков по совокупности признаков:
Гноеродно-гемолитические
Стоматические (ротовой полости)
Энтерококки (Enterococcus faecalis)
Молочнокислые (Lactococcus lactis)
Анаэробные кокки

\\Морфологические и тинкториальные свойства Streptococcus sp. \\

Морфологические свойства Streptococcus sp.
Гр+клетки сферической формы
Диаметр 0,5-1,0 мкм (редко с заостренными концами 1,5– 0,5 мкм)
Диплококки!!!!!!!
Жгутиков не имеют
Пили – образуют в колониях
Спор не образуют
Капсула (в организме больного)
Образуют цепочки!!!!!!!

\\Цепочки Streptococcus sp. \\ Позитивно окрашенные клетки стрептококков\\

Морфология колоний стрептококков
Очень мелкие колонии – 0,5-1мм в диаметре
Полупрозрачные беловато-сероватые "росинки"

Культуральные и биохимические свойства Streptococcus sp.
1. Хорошо растут на средах с добавлением крови (МПА + 5-7%)
2. факультативные анаэробы(O/F-тест - +/+)
3. Каталаза (–) (главный дифференцирующий тест от стафилококков)
4. Оптимальная t° роста – 37°С, рН – 7,6 -7,8
5. хорошо выносят высыхание в белковом окружении (кровь, гной)
6. В ЖПС – пристеночно-придонный рост (т.к. образуют цепочки)

Факторы патогенности Streptococcus sp.
  Фер менты:
Протеиназа
ДНК-аза (стрептодорназа)
Фибринолизин(стрептокиназа)
Гиалуронидаза
Токсины:
Гемолизин
Эритрогенный токсин
Липотейхоивая кислота

Антигенные свойства
По АГ различиям ПС и Б клеточной стенки делят на 21 серогруппу (от А до V):

Стрептококки серогруппы А          (S. pyogenes)
Стрептококки серогруппы В           (S. agalactiae)
Стрептококки серогруппы С и G    (S. equi, S. zooepidermicus)
Стрептококки серогруппы D           (В основном – энтерококки)
Стрептококки, не содержащие групповой АГ                       (S. mutans, S. pneumoniae)   

Особые АГ свойства стрептококков
M-Белок - основной поверхностный антиген стрептококков группы A

\\Белок М в капсулоподобном слое стрептококков\\

Стрептококки серогруппы А                         S. pyogenes
гноеродно-гемолитические, этиологическая причина возникновения ангины, эндокардита, ревматизма, гломерулонефрита, рожистого воспаления, родового сепсиса, фарингита и скарлатины.

Скарлатина от итал. skarlato – красный, багровый
Инфекционное токсико-септическое заболевание, сопровождающееся лихорадочным состоянием и ангиной (часто некротической), увеличением лимфоузлов, ярко-красной мелкоточечной сыпью, мощной интоксикацией организма.

Основной путь передачи S. pyogenes  - в оздушно-капельный, через слизистую оболочку носоглотки.
Инкубационный период от 1-12 дней.
Развиваются в миндалинах, выделяют токсины, которые попадая в кровь, вызывают общую интоксикацию организма с последующей аллергизацией и осложнениями в виде артритов и нефрита.
Первоначальный диагноз ставят по клиническим данным.

АМ препараты при скарлатине: пенициллин,  ванкомицин, эритромицин.

Стрептококки серогруппы В                          S. agalactiae
Обнаруживают на слизистых оболочках глотки, прямой кишки, гениталий. У 25% здоровых женщин – бессимптомные носители, но в дальнейшем это может привести к септическому аборту, родовому сепсису, сепсису новорожденных и менингиту новорожденных.

Стрептококки серогрупп С и G             S. equi, S. zooepidermicus
Комменсалы мочевыводящих путей и урогенитального тракта, но при определенных обстоятельствах могут вызывать заболевания.

Стрептококки серогруппы D                          В основном – энтерококки
Обитатели кишечника здорового человека, но при определенных условиях могут стать причиной развития послеоперационных осложнений, пиелонефрита, бактериального эндокардита, язв при пролежнях и абсцессов различной локализации.

Стрептококки, не содержащие групповой АГ
S. mutans – обитатель полости рта, частая причина кариеса, абсцессов, болезней пародонта.
S. pneumoniae - пиогенные стрептококки, причина пневмонии, отличаются от остальных стрептококков особыми свойствами.

Лабораторная диагностика при стрептококковых инфекциях
По двум направлениям:
- Выделение чистой культуры с последующей идентификацией
- Определение напряженности иммунитета.
При острых инфекциях достаточно выделения возбудителя.
При хронических – определение АТ в сыворотке крови.

Выделение чистой культуры стрептококков с последующей идентификацией (4 сут.)
1 сут. – посев материала и бактериоскопия
2 сут.– изучение характера колоний (выявляют мелкие 0,5-1мм, серые, полупрозрачные) и отсев на получение чистой культуры
3 сут.– получена чистая культура на ППС, ставят тесты: каталаза (-) - главный тест, исследование характера роста в ЖПС – придонно-пристеночный рост (т.к. образует цепочки). Посев на чувствительность к АМ препаратам
4 сут.– окончательная идентификация

Чувствительность стрептококков к АМП
1-й ряд – пенициллин, цефалоспорин
2-й ряд – ванкомицин, эритромицин

Пневмококки      Streptococcus pneumoniae

1881 – открыт Л. Пастером
1884 – К. Френкель и  А. Вейксельбаум доказали его этиологическую роль в развитии пневмонии

        \\Anton Weichselbaum \\

Пиогенные стрептококки вызывают:
Пневмонию
Тяжелые отиты у детей до года
Молниеносный менингит

\\ПНЕВМОНИЯ \\Рентгенограммы при пневмонии \\

Пневмококковая инфекция
Одна из ведущих причин заболеваемости и смертности во всем мире.  2005 г - по оценке ВОЗ - 1,6 млн случаев, включая 0,7-1 млн случаев смертности детей в возрасте младше 5 лет.  В Европе и США число заболевших от 10 до 100 случаев на 100 тыс. населения.

Морфологические свойства S. pneumoniae
Неподвижные, неспорообразующие бактерии.
Имеют форму диплококков с ланцетовидными, заостренными концами.
полисахаридная капсула.
В ретрокультурах клетки располагаются попарно группами.

\\Капсула на поверхности клеток S. pneumoniae (ТЭМ)\\

Особые морфологические свойства S. pneumoniae
Диплококки, но цепочек не образуют!!!!!
Капсула только в патологическом клиническом материале!!!!!!!
Быстрый автолиз клеток in vitro

\\Расположение пневмококков в мазках\\Морфология S. pneumoniae \\

Культуральные свойства
Оптимальная температура роста 25-41^оС, оптимум 37^оС.
Факультативные анаэробы
(O/F тест - +/+) со сложными пищевыми потребностями.
10-20% штаммов требуют строгих анаэробных условий при первичной изоляции (особенно из крови).

  Особые культуральные и биохимические свойства
Слабослизистые колонии
Диаметр 0,5-3 мм (зависит от условий выращивания)
Хорошо растут на "шоколадном" агаре
 ЖПС – рыхлый осадок (т.к. цепочек не образуют)
Лизис желчью и солями!!!!!
Повышенная чувствительность к оптохину и хинину!!!!!

Ферментативная активность
Исследование ферментативной активности сахаров для диагностики не проводят, т.к. пневмококки очень быстро автолизируются.
Гидролиз ± аргинина и эскулина (другие стрептококки всегда+)

АГ структура пневмококков
АГ дифференциация основана на различии в строении полисахаридной капсулы и клеточной стенки (содержат рибиттейхоевые кислоты).
83 серотипа, особо вирулентные 3 и 6.
Существуют коммерческие сыворотки к 19 серотипам.

Лабораторная диагностика пневмококков
Материал для исследования из гнойного отделяемого.
Скрининг на АГ мокроты и слюны.
Используют только молодую чистую культуру.
Выращивают на шоколадном агаре (20% крови).
В первую очередь – микроскопия.
Исследуют на факторы вирулентности (гиалуронидазу).
Далее дифференцирующие тесты: желчь, оптохин, хинин.
Потом РА и ИФА

\\Чистая культура S. pneumoniae\\ Микроскопия гнойной мокроты S. pneumoniae \\

Схема бактериологической диагностики пневмонии

Характер гемолиза пневмококков
Более характерен α-гемолиз.
Клетки ряда штаммов могут давать β-гемолиз.
Могут быть штаммы, не дающие гемолиз.

\\Примеры вариантов гемолиза\\Варианты гемолиза\\Полный бета гемолиз\\Зеленящий альфа гемолиз\\

Профилактика пневмококковой пневмонии
1. 7-валентная пневмококковая конъюгированная вакцина
Вакцина PCV-7 индуцирует обусловленный Т-клетками иммунный ответ, который характеризуется формированием защитного иммунитета даже у грудных детей.
Применяется в 70 странах

2. 9-валентная пневмококковая конъюгированная вакцина
PCV-9 (PCV-7 плюс серотипы 1 и 5)
Рекомендации по производству и контролю пневмококковых конъюгированных вакцин. Женева, Всемирная организация здравоохранения, 2005 г. (Серия технических отчетов ВОЗ, № 927, Приложение 2).

Чувствительность к АМП Пенициллин Цефалоспорин Ванкомицин
Определяют чувствительность к АМ препаратам, заодно определяют минимальную ингибирующую дозу.

\\Устойчивость пневмококков к эритромицину \\

Лекция 3 Энтеробактерии

Литература

Учебники, монографии и учебно-методические пособия:

1. В.М. Бондаренко, Т.В. Мацулевич. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром. М.:ГЭОТАР-Медиа. 2007. 300 стр.
2. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб.:СпецЛит. 2000. 600 стр.
3. А.С. Лабинская, Л.П., Блинкова, А.С. Ещина. Частная медицинская микробиология. М.:Медицина. 2005. 600 стр.
4. А.В. Пиневич. Микробиология. Биология прокариотов. В 2-х том. СПб.:СПбГУ. 2007. 350, 330 стр.
5. О.К. Поздеев. Медицинская Микробиология. М.:ГЭОТАР-Медиа. 2005. 765 стр.
6. О.В. Рыбальченко, В.М. Бондаренко, В.П. Добрица. Атлас ультраструктуры микробиоты кишечника человека. СПб.:ИИЦ ВМА.2008. 112 стр. с ил.
7. Современная микробиология. Прокариоты. Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.:Мир. 2005. в 2-х том. 655, 495 стр.
8. Покровский Медицинская микробиология
9. О.К. Поздеев, Р.В. Федоров, Энтеробактерии, М.:ГЭОТАР-Медиа, 2007, 720 стр.
10. О.В. Рыбальченко. Энтеробактерии-возбудители инфекционных заболеваний человека. – СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003, 118 с.

Энтеробактерии
- Нормальная микрофлора кишечника (enteron) человека
- Патогенные - возбудители ОКИ
- Условно-патогенные - гнойно-воспалительные процессы различной локализации
- Сапрофиты растений и животных

Наибольшую значимость имеют энтеробактерии в качестве возбудителей:
острых кишечных инфекций
гнойно-воспалительных инфекций
внутрибольничных инфекций (ВБИ)