Лекция 1 О патогенности микроорганизмов. Задачи и методы клинической микробиологии

Лекция 1 О патогенности микроорганизмов. Задачи и методы клинической микробиологии

Проф. В.Я. Александров
"Уровень познания природы человеком можно оценивать не только по сумме узнанного и понятого, но также и по сумме осознанного незнания".

О патогенности микроорганизмов

Вопросы по разделу Патогенность
1. Определение патогенности
2. Атрибуты патогенности
3. Патогенные МО
4. Условия развития патогенного процесса
5. Контроль за проявлением патогенных свойств МО
6. Вирулентность
7. Факторы патогенности
8. Классификация МО по патогенности
9. Формирование патогенных штаммов МО
10. Функции "островов патогенности"

Главные термины: Патогенность, Вирулентность, Патогенные микроорганизмы, Факторы патогенности.

Патогенность микроорганизмов – это способность вызывать инфекционный процесс
Патогенность от греч. pathos –страдание, болезнь, genos –рождение
Проф. В.Г. Петровская (сер. XX в.)
Классические атрибуты патогенности бактерий: 1. инфективность
                                                                    2. инвазивность (только внутриклеточное проникновение)
                                                                    3. токсигенность
Современные атрибуты патогенности (по В.М. Бондаренко)
                                                                     1. адгезивность
                                                                     2. инвазивность (общая)
                                                                     3. токсигенность

Патогенные микроорганизмы - это микроорганизмы, способные преодолевать защитные силы макроорганизма и вызывать инфекционный процесс в организме человека, животных и растений

Условия развития инфекционного процесса
Развитие инфекционного процесса – результат взаимодействия двух систем: СООБЩЕСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ И МАКРООРГАНИЗМА

Развитие инфекционного процесса зависит от:
- Лабильности перестройки метаболизма патогенных микроорганизмов и
- Физиологических особенностей и иммунореактивности макроорганизма

Контроль за проявлением патогенных свойств бактерий осуществляется на генетическом уровне и является результатом сложного взаимодействия бактериальной хромосомы и генов специфических плазмид.

Патогенность - признак непостоянный!

Для оценки степени патогенности существует количественная мера:
Вирулентность - это количественная мера патогенности определенной бактериальной культуры в отношении определенного макроорганизма при определенных условиях заражения
Вирулентность - это степень патогенности, при которой возбудитель способен инфицировать макроорганизм и вызвать заболевание

Вирулентность определенного возбудителя заболевания зависит от
1. количества инфицирующих бактерий
2. пути их поступления в организм
3. набора факторов патогенности у данных микроорганизмов
4. специфических и неспецифических защитных механизмов организма-хозяина

Вирулентность определяют вычисляя количество бактерий, необходимое для гибели животного в определенный период времени при определенном способе поражения:
единицы измерения вирулентности:
- DL - летальная доза – наименьшее количество МО, способное вызвать гибель лабораторных животных
- LD50 – летальная доза для 50% лаб. животных
- DCL – dosis certe letalis – 100% гибель
- ID- минимальная доза МО, способная вызвать заболевание

Факторы патогенности - э то компоненты бактериальных клеток или вырабатываемые ими вещества, благодаря которым они способны вызывать глубокие изменения в клетках и органах макроорганизма, приводящие к развитию инфекционного процесса
Ими могут быть жгутики, капсула, пили, адгезины наружной мембраны, ферменты, токсины

4 группы факторов патогенности (по функциям)
1. адгезия (прикрепление)
2. инвазия (проникновение)
3. токсинообразование (вызывают патоморфологические изменения различных органов и тканей)
4. индуция цитокинов и медиаторов воспаления (приводит к иммунопатологии)

Классификация бактерий по патогенности

В зависимости от наличия факторов патогенности бактерии условно разделены на три группы:
1. патогенные (вызывают инфекционный процесс)
2. условно-патогенные (вызывают оппортунистические инфекции)
3. непатогенные (не способны вызывать инфекционный процесс)

Степень паразитизма МО
1. Облигатные паразиты (все этапы жизненного цикла связаны с организмом хозяина)
2. Факультативные паразиты(часть жизненного цикла связана с организмом хозяина)
3. Случайные паразиты (паразитирование в организме – случайная фаза жизненного цикла)

Неспецифические тесты

Обнаружение в исследуемом материале продуктов метаболизма бактерий (обнаружение токсинов при ботулизме)

Неспецифические тесты, по характеру отклонения которых можно судить о наличии патологических изменений, специфических для инфекционного процесса определенной этиологии (нарастание активности трансаминазы)

Патогенные c трептококки

План Стрептококки
1. Заболевания
2. Новые инвазивные формы стрептококковой инфекции
3. Таксономия и систематика
4. Классификация
5. Морфологические свойства
6. Культуральные и биохимические свойства
7. Факторы патогенности
8. Антигенные свойства. Классификация.
9. Лабораторная диагностика
10. Чувствительность к антимикробным препаратам

\\Род Streptococcus (цепочки из клеток)\\

Заболевания: Ангина, Рожистое воспаление, Скарлатина, Эндокардит, Ревматизм, Гломерулонефрит, Родовой сепсис, Фарингит, Тонзиллит

\\Стрептококковая ангина. Лопнувшие нагноившиеся фолликулы и фибринозные налеты образовали плотную пленку. \\ Стрептококковая ангина Фолликулы и фибринозные налеты образовали плотную пленку \\

Новые инвазивные формы стрептококковой инфекции
Некротический миозит
Некротический фасцит
Некротический шок
Септический шок

\\Стрептококковая ангина. Некротические изменения в тканях и биопленки. \\

Таксономия и систематика рода Streptococcus
S. pyogenes
S. agalactiae
S. pneumonia
S. faecalis (Enterococcus faecalis)
S. lactis (Lactococcus lactis)

Классификация стрептококков по способности к гемолизу
1. β – гемолитические
2. α – гемолитические
3. γ - негемолитические

\\Кровяной агар для определения гемолитической активности стрептококков\\

Классификация стрептококков по степени резистентности к физико-химическим факторам
1. рост при температуре 45°С и 10°С
2. способность роста на среде с 40% желчи
3. способность роста на среде с 6,5% NaCl

Классификация стрептококков по совокупности признаков:
Гноеродно-гемолитические
Стоматические (ротовой полости)
Энтерококки (Enterococcus faecalis)
Молочнокислые (Lactococcus lactis)
Анаэробные кокки

\\Морфологические и тинкториальные свойства Streptococcus sp. \\

Морфологические свойства Streptococcus sp.
Гр+клетки сферической формы
Диаметр 0,5-1,0 мкм (редко с заостренными концами 1,5– 0,5 мкм)
Диплококки!!!!!!!
Жгутиков не имеют
Пили – образуют в колониях
Спор не образуют
Капсула (в организме больного)
Образуют цепочки!!!!!!!

\\Цепочки Streptococcus sp. \\ Позитивно окрашенные клетки стрептококков\\

Морфология колоний стрептококков
Очень мелкие колонии – 0,5-1мм в диаметре
Полупрозрачные беловато-сероватые "росинки"

Культуральные и биохимические свойства Streptococcus sp.
1. Хорошо растут на средах с добавлением крови (МПА + 5-7%)
2. факультативные анаэробы(O/F-тест - +/+)
3. Каталаза (–) (главный дифференцирующий тест от стафилококков)
4. Оптимальная t° роста – 37°С, рН – 7,6 -7,8
5. хорошо выносят высыхание в белковом окружении (кровь, гной)
6. В ЖПС – пристеночно-придонный рост (т.к. образуют цепочки)

Факторы патогенности Streptococcus sp.
  Фер менты:
Протеиназа
ДНК-аза (стрептодорназа)
Фибринолизин(стрептокиназа)
Гиалуронидаза
Токсины:
Гемолизин
Эритрогенный токсин
Липотейхоивая кислота

Антигенные свойства
По АГ различиям ПС и Б клеточной стенки делят на 21 серогруппу (от А до V):

Стрептококки серогруппы А          (S. pyogenes)
Стрептококки серогруппы В           (S. agalactiae)
Стрептококки серогруппы С и G    (S. equi, S. zooepidermicus)
Стрептококки серогруппы D           (В основном – энтерококки)
Стрептококки, не содержащие групповой АГ                       (S. mutans, S. pneumoniae)   

Особые АГ свойства стрептококков
M-Белок - основной поверхностный антиген стрептококков группы A

\\Белок М в капсулоподобном слое стрептококков\\

Стрептококки серогруппы А                         S. pyogenes
гноеродно-гемолитические, этиологическая причина возникновения ангины, эндокардита, ревматизма, гломерулонефрита, рожистого воспаления, родового сепсиса, фарингита и скарлатины.

Скарлатина от итал. skarlato – красный, багровый
Инфекционное токсико-септическое заболевание, сопровождающееся лихорадочным состоянием и ангиной (часто некротической), увеличением лимфоузлов, ярко-красной мелкоточечной сыпью, мощной интоксикацией организма.

Основной путь передачи S. pyogenes  - в оздушно-капельный, через слизистую оболочку носоглотки.
Инкубационный период от 1-12 дней.
Развиваются в миндалинах, выделяют токсины, которые попадая в кровь, вызывают общую интоксикацию организма с последующей аллергизацией и осложнениями в виде артритов и нефрита.
Первоначальный диагноз ставят по клиническим данным.

АМ препараты при скарлатине: пенициллин,  ванкомицин, эритромицин.

Стрептококки серогруппы В                          S. agalactiae
Обнаруживают на слизистых оболочках глотки, прямой кишки, гениталий. У 25% здоровых женщин – бессимптомные носители, но в дальнейшем это может привести к септическому аборту, родовому сепсису, сепсису новорожденных и менингиту новорожденных.

Стрептококки серогрупп С и G             S. equi, S. zooepidermicus
Комменсалы мочевыводящих путей и урогенитального тракта, но при определенных обстоятельствах могут вызывать заболевания.

Стрептококки серогруппы D                          В основном – энтерококки
Обитатели кишечника здорового человека, но при определенных условиях могут стать причиной развития послеоперационных осложнений, пиелонефрита, бактериального эндокардита, язв при пролежнях и абсцессов различной локализации.

Стрептококки, не содержащие групповой АГ
S. mutans – обитатель полости рта, частая причина кариеса, абсцессов, болезней пародонта.
S. pneumoniae - пиогенные стрептококки, причина пневмонии, отличаются от остальных стрептококков особыми свойствами.

Лабораторная диагностика при стрептококковых инфекциях
По двум направлениям:
- Выделение чистой культуры с последующей идентификацией
- Определение напряженности иммунитета.
При острых инфекциях достаточно выделения возбудителя.
При хронических – определение АТ в сыворотке крови.

Выделение чистой культуры стрептококков с последующей идентификацией (4 сут.)
1 сут. – посев материала и бактериоскопия
2 сут.– изучение характера колоний (выявляют мелкие 0,5-1мм, серые, полупрозрачные) и отсев на получение чистой культуры
3 сут.– получена чистая культура на ППС, ставят тесты: каталаза (-) - главный тест, исследование характера роста в ЖПС – придонно-пристеночный рост (т.к. образует цепочки). Посев на чувствительность к АМ препаратам
4 сут.– окончательная идентификация

Чувствительность стрептококков к АМП
1-й ряд – пенициллин, цефалоспорин
2-й ряд – ванкомицин, эритромицин

Пневмококки      Streptococcus pneumoniae

1881 – открыт Л. Пастером
1884 – К. Френкель и  А. Вейксельбаум доказали его этиологическую роль в развитии пневмонии

        \\Anton Weichselbaum \\

Пиогенные стрептококки вызывают:
Пневмонию
Тяжелые отиты у детей до года
Молниеносный менингит

\\ПНЕВМОНИЯ \\Рентгенограммы при пневмонии \\

Пневмококковая инфекция
Одна из ведущих причин заболеваемости и смертности во всем мире.  2005 г - по оценке ВОЗ - 1,6 млн случаев, включая 0,7-1 млн случаев смертности детей в возрасте младше 5 лет.  В Европе и США число заболевших от 10 до 100 случаев на 100 тыс. населения.

Морфологические свойства S. pneumoniae
Неподвижные, неспорообразующие бактерии.
Имеют форму диплококков с ланцетовидными, заостренными концами.
полисахаридная капсула.
В ретрокультурах клетки располагаются попарно группами.

\\Капсула на поверхности клеток S. pneumoniae (ТЭМ)\\

Особые морфологические свойства S. pneumoniae
Диплококки, но цепочек не образуют!!!!!
Капсула только в патологическом клиническом материале!!!!!!!
Быстрый автолиз клеток in vitro

\\Расположение пневмококков в мазках\\Морфология S. pneumoniae \\

Культуральные свойства
Оптимальная температура роста 25-41^оС, оптимум 37^оС.
Факультативные анаэробы
(O/F тест - +/+) со сложными пищевыми потребностями.
10-20% штаммов требуют строгих анаэробных условий при первичной изоляции (особенно из крови).

  Особые культуральные и биохимические свойства
Слабослизистые колонии
Диаметр 0,5-3 мм (зависит от условий выращивания)
Хорошо растут на "шоколадном" агаре
 ЖПС – рыхлый осадок (т.к. цепочек не образуют)
Лизис желчью и солями!!!!!
Повышенная чувствительность к оптохину и хинину!!!!!

Ферментативная активность
Исследование ферментативной активности сахаров для диагностики не проводят, т.к. пневмококки очень быстро автолизируются.
Гидролиз ± аргинина и эскулина (другие стрептококки всегда+)

АГ структура пневмококков
АГ дифференциация основана на различии в строении полисахаридной капсулы и клеточной стенки (содержат рибиттейхоевые кислоты).
83 серотипа, особо вирулентные 3 и 6.
Существуют коммерческие сыворотки к 19 серотипам.

Лабораторная диагностика пневмококков
Материал для исследования из гнойного отделяемого.
Скрининг на АГ мокроты и слюны.
Используют только молодую чистую культуру.
Выращивают на шоколадном агаре (20% крови).
В первую очередь – микроскопия.
Исследуют на факторы вирулентности (гиалуронидазу).
Далее дифференцирующие тесты: желчь, оптохин, хинин.
Потом РА и ИФА

\\Чистая культура S. pneumoniae\\ Микроскопия гнойной мокроты S. pneumoniae \\

Схема бактериологической диагностики пневмонии

Характер гемолиза пневмококков
Более характерен α-гемолиз.
Клетки ряда штаммов могут давать β-гемолиз.
Могут быть штаммы, не дающие гемолиз.

\\Примеры вариантов гемолиза\\Варианты гемолиза\\Полный бета гемолиз\\Зеленящий альфа гемолиз\\

Профилактика пневмококковой пневмонии
1. 7-валентная пневмококковая конъюгированная вакцина
Вакцина PCV-7 индуцирует обусловленный Т-клетками иммунный ответ, который характеризуется формированием защитного иммунитета даже у грудных детей.
Применяется в 70 странах

2. 9-валентная пневмококковая конъюгированная вакцина
PCV-9 (PCV-7 плюс серотипы 1 и 5)
Рекомендации по производству и контролю пневмококковых конъюгированных вакцин. Женева, Всемирная организация здравоохранения, 2005 г. (Серия технических отчетов ВОЗ, № 927, Приложение 2).

Чувствительность к АМП Пенициллин Цефалоспорин Ванкомицин
Определяют чувствительность к АМ препаратам, заодно определяют минимальную ингибирующую дозу.

\\Устойчивость пневмококков к эритромицину \\

Лекция 3 Энтеробактерии

Литература

Учебники, монографии и учебно-методические пособия:

1. В.М. Бондаренко, Т.В. Мацулевич. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром. М.:ГЭОТАР-Медиа. 2007. 300 стр.
2. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. СПб.:СпецЛит. 2000. 600 стр.
3. А.С. Лабинская, Л.П., Блинкова, А.С. Ещина. Частная медицинская микробиология. М.:Медицина. 2005. 600 стр.
4. А.В. Пиневич. Микробиология. Биология прокариотов. В 2-х том. СПб.:СПбГУ. 2007. 350, 330 стр.
5. О.К. Поздеев. Медицинская Микробиология. М.:ГЭОТАР-Медиа. 2005. 765 стр.
6. О.В. Рыбальченко, В.М. Бондаренко, В.П. Добрица. Атлас ультраструктуры микробиоты кишечника человека. СПб.:ИИЦ ВМА.2008. 112 стр. с ил.
7. Современная микробиология. Прокариоты. Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.:Мир. 2005. в 2-х том. 655, 495 стр.
8. Покровский Медицинская микробиология
9. О.К. Поздеев, Р.В. Федоров, Энтеробактерии, М.:ГЭОТАР-Медиа, 2007, 720 стр.
10. О.В. Рыбальченко. Энтеробактерии-возбудители инфекционных заболеваний человека. – СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003, 118 с.

Энтеробактерии
- Нормальная микрофлора кишечника (enteron) человека
- Патогенные - возбудители ОКИ
- Условно-патогенные - гнойно-воспалительные процессы различной локализации
- Сапрофиты растений и животных

Наибольшую значимость имеют энтеробактерии в качестве возбудителей:
острых кишечных инфекций
гнойно-воспалительных инфекций
внутрибольничных инфекций (ВБИ)

План

1. Vibrio cholerae –возбудитель холеры. Актуальность.

2. Сапронозная инфекция

3. Характеристика сем. Vibrionaceae

4. Род Vibrio

5. Биотипы холерного вибириона

6. Строение О1-АГ комплекса

7. Холероген

8. Особые факторы патогенности

9. Особенности лабораторной диагностики

10. Фаготипирование Vibrio cholerae

11. Характеристика возбудителей вибриозов

Vibrio cholera          сем. Vibrionaceae

Холера - высококонтагиозная кишечная инфекция, характеризующаяся разнообразием клинических проявлений от тяжелых форм до легкой диареи, включая вибрионосительство.

 Отличие от других ОКИ: Характер рвотных масс и испражнений в виде "рисового отвара". Поэтому очень важна этиологическая диагностика

Актуальность
- Медико-социальная проблема
- Эпидемия холеры впервые зарегистрирована в Бенгальском заливе Индийского океана в начале 19 в.
- Особо опасная карантинная инфекция
- Механизм передачи- фекально-оральный

\\Первая пандемия\\

Сапронозная инфекция
Свободноживущие бактерии (автономно от человека). Обитают в водной среде – гидрофилы. Связаны с водной экосистемой

2. Характеристика сем. Vibrionaceae

Семейство создано в 1965 г.
Комменсалы морских и пресноводных организмов: рыб, рачков, водорослей
Паразиты животных и человека

\\Распространение представителей сем. Vibrionaceae \\ Симбиоз с водорослями\\Вибрионы – представители  сем. Vibrionaceae (ТЭМ) \\

Морфологические свойства представителей сем. Vibrionaceae
- Гр- изогнутые палочки – вибрионы
- Диаметр – 0,5 мкм
-Длина 2-4 мкм
- У большинства жгутики
- Обнаружены покоящиеся формы
- Спор и цист не образуют

Культуральные свойства
- Факультативные анаэробы
- О/F тест +/+ (на среде Хью-Лейфсона окисляют и ферментируют Д-глюкозу – без газа)
- Почти все вибрионы оксидаза+

Эволюция сем. Vibrionaceae
Древнейшие микроорганизмы на Земле. Из вибрионов-сапрофитов произошли патогенные вибрионы. Трудности идентификации патогенных вибрионов связаны с непатогенными двойниками

Таксономия сем. Vibrionaceae
р. Enhydrobacter (E. aerosaccus)- свободноживущие
р. Photobacterium – светящиеся (в светящихся органах рыб) непатогенные
р. Aeromonas - патогеные для животных, у человека нехолерная диарея
р. Plesiomonas (P. shigelloides) – дизентириеподобное заболевание, энтериты, менингит
р. Vibrio – типовой род

Таксономия р. Vibrio
V. cholerae – типовой вид
V. alginolyticus                     
V. fluvialis
V. metschnikovii
V. mimicus
V. parahaemolyticus                
V. fisheri

\\Ф. Пачини (Filippo Pacini) (1812-1883)\\5 пандемия\\

Р.Кох 1883 г. выделил чистую культуру V. cholerae – начало VI пандемии
Врач Готшлих 1906 г. Карантинная станция Эль-Тор. Вибрионы Готшлиха вызывали гемолиз эритроцитов барана и козы. VII пандемия вызвана вибрионом Готшлиха
Сейчас 7 пандемия

Биотипы вида V. cholerae
1. V. cholerae biotype cholerae – классический, азиатский
2. V. cholerae biotype eltor – эльтор
3. V.cholerae biotype proteus (включает все не О1-НАГи)
4. V.cholerae biotype albensis (флюоресцирующие)

\\Морфология V. cholerae \\ V.сholerae окраска по Граму\\CЭМ V. cholerae \\ Покоящиеся формы V. cholerae (ТЭМ)\\

Культуральные свойства V. cholerae
Тº - 37 º С
Хорошо переносят низкие Т º
Сохраняют жизнеспособность во льду, холодной воде- 1.5 мес.
Речной воде, почве до 3 мес.
Чувствительны ко всем дезинфектантам.
Более устойчивы в окружающей среде – вибрионы биотип эльтор

Рост в ЖПС. Быстрый рост в щелочной пептонной среде,на поверхности легкое помутнение, затем нежную пленку.

Биохимические свойства V. cholerae
1.Классификация по Хейбергу основана на отличиях в ферментации углеводов - 6 групп
2.Классификация Смит и Гуднер + еще 2 группы = 8 групп

Пример: 1 группа
1. М манноза + 2. А арабиноза –  3. С сахароза +
V. cholerae – 1 группа (ферментирует арабинозу на 2-е сутки)

Ферментативная активность V. cholerae
Мощная протеолитическая активность:
- Образуют протеазы: - разжижают желатин
                               - гидролизуют казеин и фибрин
- Восстанавливают нитраты в нитриты.
- Образуют индол из триптофана
- Экзоферменты:
1. Лецитиназа 2. Липаза 3. РНК-аза 4. Муциназа 5. Нейраминидаза 6. Гиалуронидаза

АГ- свойства вибрионов
О-, Н- и К- АГ-комплексы
Н–АГ-комплекс - видоспецифический, свойственен каждому определенному виду
Все холерные и холероподобные вибрионы по структуре О-АГ комплексов разделены на более чем 100 серогрупп.
Самые патогенные серогруппы О1 и О139.
Патогенные вибрионы V. cholerae biotype cholerae и V. cholerae biotype eltor принадлежат к О1 серогруппе (содержат О-АГ комплекс №1)

О1 АГ- комплекс V. cholerae состоит из 3-х компонентов: А,В,С
АВ – серовар Ogawa – самый агрессивный, с него начинаются вспышки
АС – серовар Inaba
АВС – серовар Hikojima
А-группоспецифический АГ -общий для серогруппы, В,С –типоспецифические АГ

Вибрионы НЕО1(НАГи)

Это вибрионы, по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам идентичны V. cholerae биотипам классический и эльтор, но не агглютинируются сывороткой О1 (лишены О1-АГ комплекса)

НЕО1 – биотип proteus
НЕО1 –биотип albensis (флюоресцирующие)

Факторы патогенности
1. Экзотоксин-холероген –главный фактор
За синтез отвечает ген: Токсигенные вибрионы (vct+), Нетоксигенные (vct-)
Термолабильный белок Мм- 84 кДа: А(А1иА2)+В

\\Холероген\\

Субъединица А₁ – биологическая активность
А₂ –соединяет А₁ и В
В – связь с мембраной рецептора эпителиоцита –ганглеозидом Gm1

Инфицирующая доза: 10 ^{9-10 кл.} После присоединения Хг усиливается активность аденилатциклазы, образуется цАМФ, выход ионов Na+ и Cl-. →Альгидное состояние (17% гибели от обезвоживания и обессоливания)

\\Холерный алгид\\

2.Подвижность (жгутик содержит адгезины)
3. Хемотаксис
4. Факторы адгезии и колонизации
5. Ферменты: муциназа, протеазы, нейраминидаза, лецитиназа
6. Эндотоксин
7. бактериоцины

Иммунитет неустойчивый, непрочный. Заболеть можно снова через 3-5 мес. и болеть часто

Лабораторная диагностика
Серологические реакции- ретродиагностика
Основной метод-микробиологический: микроскопия,
O/F-тест +/+, но без газа, оксидаза+, окисление 3-х сахаров по Хейбергу: МАС:+-+
Важный тест – фаготипирование!

Набор холерных фагов (впервые выделены Мукержи)  - 3 группы фагов по Мукержи
1. Монофаг холерный
2. Фаги Э-ТОР2 (4-6 час)
3. набор поливалентных фагов

НО! Патогенная группа О139 – устойчивость ко всем фагам

Носительство вибрионов. Кассический биотип – нет, Эльтор – есть, Но все постоянно меняется!!!

Чувствительность к АМП Тетрациклин
                                            Соляные растворы: На 1 л Н₂О: 3,5 г NaCO₃+ 3,5 г KCl, Глюкоза – 20 г, Плазмазамещающие жидкости!!!

\\Экспресс-диагностика холеры\\

План

1. Дифтерия. Очаги поражения.

2. Контакт с токсигенными и атоксигенными штаммами C. diphtheriae

3. Причины возникновения эпидемии дифтерии

4. Необходимость вакцинации и ревакцинации

5. Общая характеристика рода Corynebacterium

6. Таксономия, морфология C. diphtheriae

7. Биохимические свойства, АГ структура

8. Основной фактор патогенности

9. Лабораторная диагностика

10. Чувствительность к АМП

Дифтерия – инфекционное заболевание, характеризующееся синдромом общей интоксикации с преимущественным поражением сердечно-сосудистой и кортико-адреналовой систем, периферических нервов, а также развитием фибринозного воспаления во входных воротах инфекции.

Очаги поражения при дифтерии. В зависимости от локализации различают дифтерию: зева, носа, гортани, глаза, уха, половых органов, кожи, ран

\\Клинические проявления дифтерии\\Дифтерия кожи\\

Пути передачи инфекции
- Воздушно-капельный
- Контактный (предметы быта)
На месте внедрения возбудителя – воспалительный процесс

При контакте человека с  клетками C. diphtheriae  может возникнуть 3 состояния:
- Носительство
- Субтоксическая форма заболевания (легкая)
- Токсическая форма заболевания (тяжелая)

Токсигенные и атоксигенные штаммы C. diphtheriae
Токсигенные C. diphtheriae  вызывают дифтерию.
Атоксигенные C. diphtheriae  вызывают назофарингит и эндокардит.

Причины возникновения эпидемии дифтерии (пик 1994 г. в России - 29,9 /100 тыс. населения
 в СПб – 52,7/100 тыс. населения)
Временное благополучие в результате активной вакцинации в конце 50-х гг.
Утрата прослойки иммунизированных со специфическим антитоксическим иммунитетом.
Сомнительное качество вакцины и нарушение технологии проведения прививок.
Распространение заболевания в результате бесконтрольной миграции населения.

Доказательство необходимости вакцинации и ревакцинации - Количество не привитых
Носителей (титр 1/640 – 1/680)- 0,6%
При первичной локализации - 6%
Среди заболевших субтоксической формой заболевания - 41%
Среди заболевших токсической формой заболевания - 74%
ПРИВИВАТЬ НАДО!!!

Общая характеристика рода Corynebacterium
- Гр+ палочки,
- неподвижные, бесспоровые. факультативные анаэробы, каталаза+.
- особое химическое строение клеточной стенки: короткие цепи (22-36 атомов С) миколовых кислот и мезо-диаминопимелиновая кислота

Таксономия рода Corynebacterium
- C. diphtheriae - типовой вид
- C. ulcerans – мастит КРС, люди
- C. pseudotuberculosis – абсцессы Ж,Ч
- C. striatum – НМ ротовой полости человека 9 глотка, зубные бляшки, мастит КРС
- C. minutissimum – комменсалы, эритразма
- C. xerosis – НМ слезного канала человека, эндокардит, пневмонии, конъюнктивит
- C. pseudodiphtheriticum - непатогенный

Характеристика C. diphtheriae

Морфология C. diphtheriae
- Гр(+) полиморфные палочки (ветвистые, раздутые), длина 1 - 8 мкм.
- Нет капсулы, спор, жгутиков
- Характерное расположение клеток в мазках (X, V, Y)

\\Волютиновые зерна в клетках C. diphtheriae \\

Культуральные свойства C.   diphtheriae
- Факультативные анаэробы - O/F тест +/+.
- Не выносят низкой температуры – транспортировать нужно с подогревом!!!
- Опт. температура 37ºС, рН 7,4-8,0.
- Нуждается в 150-180 мг% аминного азота. Требуется добавка нативного белка – 10-15% дефибринированной крови.
- В ЖПС при 60ºС гибель за 10 мин, долго сохраняется в высушенном состоянии (слюна, пыль),
- Выдерживает 98ºС 1 час, дез. средства 3-5% - гибель 20-30 минут.

Питательные среды для C. diphtheriae
                       K2TeO3 – соль теллурита калия 0,02-0,04%
1. Кровяно-теллуритовый агар
2.Хинозольная среда Бучина
3. Цистин-теллуритовый агар Тинсдаля

\\Колонии C. diphtheriae на кровяно-теллуритовом агаре \\Культуральные свойства. C. diphtheriae на цистин-теллуритовом агаре Тинсдаля \\

Биотипы = биовары C. diphtheriaeна кровяно-теллуритовом агаре

gravis -крупные, серые, сухие, крошащиеся, шероховатые с радиальной исчерченностью колонии. Через 24 часа клетки в препаратах – короткие, полиморфные палочки, с небольшим количеством волютина. Ферментируют крахмал. Вызывают заболевание в крайне тяжелой форме.

mitis - черные, круглые, выпуклые колонии. В препаратах – длинные изогнутые палочки с большим количеством волютина. Не ферментируют крахмал. Вызывают заболевание в легкой форме.

\\Биотипы (biotype) = биовары   C. diphtheriae на шоколадно-теллуритовом агаре\\gravis           mitis

Биохимические свойства C. diphtheria
редукция нитратов, цистеиназная активность (+), уреазная активность (-), пиразинамидазная активность (-).
ферментация углеводов: (глюкоза (+), сахароза (-), крахмал (+).

АГ структура C. diphtheria
На основании строения О-АГ и К-АГ различают 11 сероваров
Склонность к спонтанной агглютинации

План

1. Коклюш

2. Вакцина и прививки от коклюша АКДС

3. Клиническая картина коклюша

4. Патанатомические изменения при коклюше

5. Таксономия рода Bordetella

6. Морфологические свойства

7. Культуральные свойства

8. Биохимические свойства и АГ структура

9. Факторы патогенности

10. Лабораторная диагностика.Чувствительность к АМП

Коклюш – острое инфекционное высококонтагиозное заболевание, характеризующееся приступами судорожного кашля.

Заражение – воздушно-капельным путем. Источник – больной человек, заразен уже на начальной стадии заболевания. Контагиозность – сохраняется 6 - 8 недель.

Болезнь любого возраста, чаще болеют дети 2 -10 лет.

Bordetella pertussis - возбудитель коклюша (коклюшная палочка) открыта в 1906 г Французскими исследователями Борде (Bordet) и Жангу (Gengou)

Вакцина от коклюша АКДС: А-адсорбированная К- коклюшно-Д-дифтерийно-С- столбнячная. Вакцинация с 3-х мес. В вакцине коклюшная часть - убитые клетки Bordetella pertussis - вызывают аллергию!!!

Нужна бесклеточная коклюшная вакцина!!! Разработана вакцина с коклюшным анатоксином – защищает только от анатоксина.

В России болеют 50% привитых.
Причины: недостаточно хорошие вакцины, плохая иммунокомпетентная система у детей (23% детей болеют особенно тяжело), Много не привитых детей!!!

\\Ребенок с симптомами коклюшной инфекции\\

Клиническая картина коклюша
Инкубационный период -7-10-(до 14) дней.
3 периода, каждый около 2-х недель:
- Катаральный: кашель не отличается по характеру от кашля при ОРВИ, температуры нет, горло слегка гиперемировано, кашель постепенно приобретает упорный характер, усиливается, особенно сильны приступы по ночам
- Спазматический: кашель постепенно приобретает приступообразный характер. Типичный приступ кашля сопровождается глубоким вздохом, за которым следует «кашель-стоккатто». На высоте приступа наступает апноэ. после прекращения спазма голосовой щели слышен глубокий вдох со свистом. Спустя некоторое время приступ возобновляется. Ребенок становится цианичным. Очень часто приступ кашля заканчивается рвотой. \\ Колонизация Bordetella pertussis эпителия трахеи \\
- Реконвалесценции (разрешения): Приступы менее частые и не так сильны. Не осложненный коклюш проходит без температуры!!!

Патанатомические изменения при коклюше: Существенные изменения в эпителии бронхов – некроз. Слизистая оболочка легких также воспалена и утолщена. Вязкая слизь заполняет просвет мелких бронхов. В результате легко возникает эмфизематозные изменения.

Осложнения при коклюше. Частое осложнение – тяжелая пневмония, бронхопневмония. Тяжелое осложнение – энцефалопатия. Редко - кровоизлияние в мозг. Упорный кашель и рвота - дистрофия

Таксономия рода Bordetella
B. pertussis - возбудитель коклюша
B. parapertussis- возбудитель паракоклюша
B. bronchiseptica - вызывает бронхосептикоз (патоген животных)
Различная инфицирующая доза

Морфология Bordetella
- Гр(-) мелкие палочки – коккобактерии
- 0,2-0,3 мкм ø, до 0,5-1,0 мкм в длину.
- Расположены отдельно.
- Спор и истинной капсулы не образуют.
- Микрокапсула.
- Подвижны только B. bronchiseptica -перитрихи.

\\Позитивно окрашенные клетки  B. pertussis \\СЭМ клеток B. pertussis \\

Культуральные свойства B. pertussis
Облигатные паразиты человека
Строгие аэробы. O/F тест (+/-).
Оптимальная температура 37ºС. Требовательны к температурному фактору, высев следует производить на подогретые среды.

Питательные среды для Bordetella
- Среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с кровью)
- Среда КУА (казеиново-угольный агар)
На ППС образуют колонии – "жемчужинки" капельки ртути.

Скорость роста Bordetella  - появление колоний при первичном посеве на ППС
B. pertussis                   72 час
B. parapertussis          36-48 час
B. bronchiseptica        18-24 час

Диаметр колоний на ППС через 72 час
B. pertussis                   1-2 мм
B. parapertussis          2-3 мм
B. bronchiseptica        4 мм

Биохимические свойства Bordetella
Очень не активны в биохимическом отношении. Ферментативная активность выражена очень слабо.
Не расщепляют белки и углеводы.
Не восстанавливают нитраты.
Образуют каталазу (+).

АГ структура Bordetella
один общий для всех АГ-агглютиноген - № 7.
Специфические О-АГ обозначаются номерами:
B. p ertussis: для видаО1, для штамма О2,3,4,5,6,13,15,16
B. parapertussis для видаО14, для штамма О8,9,10
B. b ronchiseptica: для вида О12, для штамма О8,9,10,11

Факторы патогенности бордетелл
Эндотоксин – общий для всех видов
Экзотоксин коклюшный
Ферменты: Дермонекротоксин (деамидаза), Гиалуронидаза, Лецитиназа, Плазмокоагулаза, Лейкоцитоз- и гистаминстимулирующие

Лабораторная диагностика
Материал – слизь из дыхательных путей. Берут тампоном на проволоке, согнут под углом в 45º вниз.
Среды для первичного посева - для выявления скорости роста:
1) среда Борде-Жангу – картофельно-глцериновый агар + кровь, 2) Bordetella – агар, 3)КУА – казеиново-угольный агар. Высев проводят на теплые среды.
Регистрируют тип колоний на ППС: если капли ртути или жемчужины – красят по Граму и РА, затем серотипирование моновалентными сыворотками.

Чувствительность к АМП Эритромицин Ампициллин

Вакцинация: 3 мес, 4 мес,  3 – 5 мес, 18 мес. В 6, 11, 16 лет, каждые 10 лет

План лекции

1. Анаэробная инфекция

2. Отличия анаэробных и аэробных МО

3. Классификация МО по степени толерантности к О₂

4. Клинически значимые анаэробные МО

5. Характеристика Рода Clostridium

6. C. perfringens

7. Патогенез газовой гангрены

8. 8. C. botulinum

9. Ботулотоксин

10. Clostridium tetani

Анаэробная инфекция - э ндогенная и экзогенная инфекция, обусловленная развитием анаэробных микроорганизмов

Разновидности анаэробной инфекции
- Экзогенная (раневая) анаэробная инфекция развивается при попадании в макроорганизм при травмах и ожогах анаэробных споровых микроорганизмов из внешней среды.
- Эндогенная анаэробная инфекция может развиваться в результате проявления патогенных свойств анаэробными микроорганизмами, входящими в состав нормальной микрофлоры человека.

Отличия анаэробных и аэробных МО
Анаэробы:
1.чувствительны к действию активных форм кислорода
2. погибают в присутствии свободных радикалов кислорода
3. нет ферментов цитохромной цепи (супероксиддисмутаза (СОД), каталаза)
4.могут использовать в качестве питательных субстратов о