Специфичность тестов РИА и ПЦР по выявлению HBsAg, анти- DHBs и ДНК в сыворотке крови уток при экспериментальном гепатите В.

Инфицирование утят в возрасте (недели)	Персистентная инфекция по … РИА- DHBsAg	Виремия по DHBsAg-РИА	Сероконверсия по DHBs РИА	ПЦР- DHBV
				Амплификация гена ДНК
3	93	70%+	2/4	+
4	80	70%-	3/7	+
6	60	70%-	3/7	+
8	0	0-	3/7	+
Контроль	0	0	0	0

 

Авторы пришли к выводу, что инфицирование гепаднавирусом уток зависит от возраста в связи с повышением резистентности, обоснованной несколькими факторами, в том числе иммунитетом. Обнаружение амплифицированного гена в последней группе подтверждает данный факт. Оба метода пригодны для изучения ГВ уток, однако ПЦР признан более эффективным и недорогим.

Погуш П.Г. и др. (2003) предупреждают, что ошибка ИФА по выявлению HBsAg и анти-HbsAg гепаднавируса человека составляет одну из 50 тестов и колеблется от 0,8 до 4,1% в зависимости от происхождения отечественных и зарубежных наборов (1).

В связи с полученными результатами, вероятно, необходимо познакомить читателя с информацией о ГВ человека.

Болезнь протекает в трёх формах – бессимптомной, хронической и в виде первичного рака печени. Одним из признаков заболевания является нарастание титра HВsAg в крови. В мире более 300 млн. человек – носителей HВsAg. Пути передачи: естественные – внутриутробный, перинатальный, через грудное молоко, половой и через слюну; искусственные – посттрансфузионный, парентеральный и через медицинские манипуляции. Исход болезни: 15% случаев – первично хронический гепатит, 20% - цирроз печени, 10% - рак печени. HВsAg в сыворотке крови человека обнаруживается спустя 3-5 недель после инфицирования и исчезает лишь в период выздоровления (примерно через 2 месяца). Если HВsAg в крови обнаруживается в течение трёх месяцев и более, то возможно развитие хронического гепатита или вирусоносительства. Анти-HВs в крови появляется после исчезновения HВsAg в сроки от 3-4 недель до года. Примерно в 10% случаев острого гепатита HВsAg не выявляется, в этом случае диагноз верифицируется (подтверждается) наличием анти-НВс JgM. Наличие анти-НВs в сочетании с анти-НВс JgM свидетельствует о полном выздоровлении.

HВeAg появляется в крови ещё в инкубационном периоде, вскоре после HВsAg. HВеAg обычно обнаруживается в крови совместно с ДНК вируса, свидетельствуя о наличии репликации вируса и высокой контагиозности больного как при остром, так и при хроническом варианте течения болезни. Анти-НВе появляется в крови через 1-3 недели после элиминации (исчезновения) HВеAg. У больных хроническим гепатитом В ДНК (как маркер) можно обнаружить и при наличии анти-НВе и отсутствии HВеAg (4).

Анти-НВcor выявляют через 10-20 дней после инфицирования; антитела сохраняются на всю жизнь.

Дополнительная информация. Только при наличии гепатита В у больных регистрируют гепатит D РНК-вирусной этиологии. Гепатит D усугубляет течение гепатита В, способствует быстрому развитию хронической активной формы с переходом в цирроз печени с летальным исходом. Гепатит D в острый период диагностируют по выявлению анти-HDV JgM и HDV-РНК, в хронический - HDV-РНК. Латентные и субклинические формы бывают редко. Прекращение репликации определяют обнаружением в сыворотке крови анти-HDVJgG и суммарных анти-HDV.

Погуш П.Г. и др. (2003) сообщили, что с 1995 по 1999 гг. заболеваемость гепатитом В в Москве выросла в 2 раза. До 2000г. для диагностики болезни людей использовали следующие тест-системы:

1. Для определения HBsAg – «Монолиза HBsAg» (“Sanofi”, Франция), «Hepanostica HBsAg» (прямой и подтверждающий тест, «Organon Teknika», Нидерланды), «Гепаскан HBsAg» (БТК “Биосервис”), “ИФА-HBsAg/m” (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород), “Аквагеп-В-Аг-1М» (НПП «Аквапаст», Санкт-Петербург), «Гепастрип» («Ниармедик плюс», Москва).

2. Для определения антител к гепаднавирусу гепатита В – «ИФА-anti-HCV» (НПО «Диагностические системы», Нижгий Новгород), «Гепаскрин С» (БТК «Биосервис»), «Мюрекс anti-HCV» (“Abbott”, США), «Рекомби-Бест-анти-ВГС-подтверждающий тест» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская обл., пос. Кольцово), «Рекомби-Бест-анти-ВГС-спектр» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская обл., пос. Кольцово).

Экспериментально показали, что образование гепатоцеллюлярной карциномы может быть индуцировано воздействием грибного афлатоксина Б1 (АФБ), содержащегося в корме для уток. При концентрации 30-40 мкг АФБ в 1 г корма вызывает неопластический гепатит в период с 1 по 48 неделю после начала опыта. Тогда как уменьшение дозы токсина до 20 мкг и ниже не провоцирует образование неоплазм печени, независимо от срока начала эксперимента и возраста птицы.

При диагностике проводят токсикологический тест на выявление АФБ и его концентрации в корме (10).

Иммунитет. Иммунный ответ на вирус гепатита В уток определён присутствием антител к поверхностному антигену вируса в сыворотках экспериментально и естественно зараженных уток. Антитела в сыворотках определяли в непрямом РИА по проценту ингибиции связывания кроличьих антител к вирусу гепатита В уток с очищенным антигеном этого вируса. В качестве положительного и отрицательного контроля использовали сыворотки от зараженных и здоровых уток, а также моноклональные антитела к внутреннему антигену вируса гепатита В уток. Образцы печени и сыворотки тестировали на обнаружение ДНК вируса методом дот-блот-гибридизации. У повторно зараженных взрослых уток отсутствовала виремия, но обнаруживались антитела к поверхностному антигену Bs. Эти антитела активно нейтрализовали инфекционный вирус, которым экспериментально заражали односуточных утят. Уровень антител к Bs-антигену у естественно переболевшей птицы был таким же, как у здоровых взрослых уток и односуточных утят. Тогда как антитела к внутреннему антигену - Вс - нейтрализовали инфекционный вирус, экспериментально введенный утятам. Следовательно, иммунный ответ на вирус гепатита В осуществляется у пекинских уток путём накопления нейтрализующих антител, которые могут быть переданы потомству трансовариально (3, 20).

Лечение. Не разработано. Утиный интерферон активирует такие же пути внутриклеточной передачи сигнала в гепатоцитах уток, как и интерферон млекопитающих. Методом сдвига электрофоретической подвижности обнаружена индукция фактора типа ISCF3, а также факторов, гомологичных сывороточным индуцибельным факторам SIF-A, SIF-B и SIF-C.

Активация под действием интерферона белков STAT не ингибируется заражением гепатоцитов вирусом гепатита В уток. При лечении заражённых гепатитом уток рекомбинантным утиным интерфероном происходит уменьшение содержания ДНК вируса в гепатоцитах, и во многих случаях исчезает виремия (5, 7).

P. Li et al. испытали ингибирующее воздействие Entecavir (BMS-200475) и Lamivudine (3TC) против DHBV, находящегося в гепатоцитах утят.

 

 

Таблица 11

Воздействие Entecavir (BMS-200475) и Lamivudine (3 TC) против DHBV, находящегося в гепатоцитах утят.

 

Название вещества	Способ введения	Доза, мг/кг	Снижение уровня ДНК DHBV в течение 21 суток на: lg
Entecavir	Per os	1,0	3,1 - 1,41
		0,1	2,1 - 0,76
		0,01	0,01 – 0,26
Lamivudine	Per os	25,0	0,66 – 0,06
Наполнитель	Per os	25,3	0,20 – 0,20

 

Авторы установили, что Entecavir (ЕС₅₀, 0,13 nМ) по эффективности выше в 1000 раз, чем Lamivudine (ЗТС) (ЕС₅₀, 138 nМ). Оба препарата, введённые через зонд в желудок, оказались нереактогенными, при этом первое вещество оказалось более сильнодействующим против DHBV, в чём и отмечена его сравнительная эффективность. В утятах, которым вводили Entecavir в дозе 1мг/кг, было отмечено снижение концентрации данного вещества до уровня, обладающего только наполнителем.

С.-Y.J. Wang et al. использовали DHBV в качестве модели для испытания некоторых дезинфектантов, которые были предназначены для HBV. Для проведения анализов эффективности дезинфектантов авторы использовали утят и культуру гепатоцитов УЭ. Титрацию вируса авторы проводили с помощью ПЦР и использования гепатоцитов УЭ, а также «гнездовой» ПЦР.

Авторы отвергли радиоизотопный метод по Саузерну в пользу ПЦР – метода, простого по постановке, меньшей стоимости и повышенной чувствительности. Благодаря данному методу был проведён анализ по определению инактивирующего потенциала двух четвертичных аммоний- хлоридных дезинфектантов: n-алкил-диметил-бензил-аммоний-хлорида и алкил-диметил-бензил-аммоний-хлорида (10С-12С). Их эффективные концентрации составили, соответственно, 1200 и 1800 ppm. Результаты показали более высокую полезность первого вещества (33).

Специфическая профилактика и меры борьбы. Профилактика при гепатите В уток находится в начальной стадии научной разработки. Известно, что эффективная специфическая профилактика гепатита В человека основана на применении активной иммунизации препаратом поверхностного антигена вируса гепатита В – HbsAg. Однако использование для этого HbsAg, выделенного из плазмы крови хронических носителей вируса, имеет ряд ограничений: потенциальная опасность инфекционности вакцины, дефицит сырья, высокая стоимость и др.(8, 10).

В связи с этим можно предположить, что более перспективным является применение вакцины, содержащей HbsAg, полученный генно-инженерным способом с использованием некоторых штаммов дрожжей.

I. Schröder et al. продемонстрировали, что аналог фторированного гуанозина, 2`,3`-дидеокси-3`-флуорогуанозин (FLG), обладает ингибирующим воздействием на DHBV «in vivo» и «in vitro», а также HBV «in vitro» с использованием культуры гепатоцитов уток. Репликацию вируса и определение ингибирующих концентраций препарата выявляли ПЦР. Результаты тестов показали, что 50% торможение репликации гепаднавируса можно добиться при концентрации FLG 0,2 мкг/мл, тогда как 90% - 1,0 мкг/мл. ДНК-полимераза, как DHBV, так и HBV, подавлялась FLG-трифосфатом при соответствующих концентрациях – 0,05 мкг/мл и 0,03 мкг/мл.

Таким образом, было установлено, что FLG является эффективным ингибитором репликации вируса уток и человека, однако он не полностью удалял вирус, так как после окончания лечения наблюдали рецидив в репликации возбудителя гепатита В как уток, так и человека.

Курбатова И.Ю. и др. (1990) для приготовления экспериментальной HbsAg - вакцины испытали методы сорбции и десорбции рекомбинантного дрожжевого антигена на различных пористых кремнезёмах. На основании полученных результатов был разработан процесс концентрирования и очистки HbsAg с помощью хроматографии. Адсорбцию осуществляли «batch»-методом, добавляя к 400 мл осветлённого экстракта 150 мл макропористого стекла МПС-2000-ВГХ (коэффициент экстинкции Е₂₈₀ осветлённого экстракта составлял 8,9). После 2 часов перемешивания сорбент сначала промывали в колонке 0,05 М фосфатным буфером рН 7,5, а затем элюировали карбонатным буфером рН 9,1. В итоге был получен концентрированный в 4 раза препарат, содержащий около 90% HbsAg, который с помощью последующей гельпроникающей хроматографии на ПВ-модифицированном силохроме удавалось освободить от 50-70% примесных белков. В таких препаратах HbsAg составляет до 30%. Гомологичный более очищенный HbsAg можно выделить с применением дополнительных этапов очистки - ультрацентрифугирования и гидрофобной хроматографии. Авторы гарантируют, что препарат, рекомбинантный в дрожжах (штамм Sacharomyces cerevisiae DBY 746 (leu 2, his 3, ura 3) c плазмидой pNMVG 20), сорбированный и очищенный хроматографией, проявлял иммуногенную активность, сравнимую с активностью аналогичного препарата сывороточного HbsAg (8).

Последние результаты исследований по определению идентичности белковых структур гепаднавирусов уток, земляных сурков, лесных белок и человека, а также установление высокой иммуногенной активности поверхностных антигенов утиного вируса показывают реальные возможности и перспективы научной разработки специфических средств профилактики гепатита В уток и других видов птиц.

Источниками антигена для вакцин могут быть:

1. Сыворотки крови животных-антигеноносителей.

2. Трансформированные клетки печени птиц (возможно LMH-38), продуцирующие HbsAg.

3. Рекомбинантные ДНК, несущие экспрессируемый ген HbsAg.

В разработке вакцин для человека практическое развитие получили два подхода: получение субъединичных (корпускулярных) биопрепаратов и генно-инженерное конструирование. В настоящее время наиболее известными в мире субъединичными вакцинами являются «Vaccin Hevac B», производимая во Франции, и «Heptavax B» - в США.

Smith et al. (1983) провели опыт по экспрессии HbsAg путём включения фрагмента ДНК вируса (1,35 тыс. пар оснований) в плазмиду вируса коровьей оспы, которой инфицировали культуру клеток CV-1 (трансфекция). Клетки продуцировали HbsAg с характерными полипептидами, который индуцировал образование анти-HBs антител у кроликов. Авторы высказали мнение о возможности разработки живой вакцины. Подобные рекомбинантные вакцины можно производить с использованием плазмид бактерий и дрожжей. Дрожжи являются более пригодными продуцентами HbsAg, чем бактерии.

Tnyatni M. et al. (1998) провели испытания ДНК-вакцины против гепаднавирусного гепатита В уток. Вакцину, содержащую белки пре-S/S или S в виде плазмидной ДНК рс ДНК, вводили птице внутримышечно с трёхнедельным интервалом. У всех уток были обнаружены специфические антитела против S-антигена в одинаковых титрах (от 1:10тыс. до 1:50 тыс.) после третьей инъекции. У трёх уток из четырёх, получивших ген S, 90% введённого материала удалялось меньше, чем за 15 минут после инокуляции инфекционного вируса. Репликация вируса в печени не выявлялась в течение четырёх дней после заражения эпизоотическим вирусом. У всех четырёх уток, вакцинированных ДНК пре-S/S, 90% инокулята выводилось через 60-90 мин. после введения, антиген S вируса выявляли в 10-40% гепатоцитов.

Сыворотка против S-антигена ингибировала инфекционность вируса при добавлении её к нему перед инокуляцией его односуточным утятам или в первичную культуру гепатоцитов утки. Сыворотка против пре-S/S-антигена обладала слабой нейтрализующей активностью против вируса как «in vivo», так и «in vitro».

Авторы пришли к выводу, что конструкция ДНК вакцины с геном S является более эффективной для приостановления развития гепатита В уток.

Гендон Ю.З. (1999) выявил некоторые преимущества метода внутрикожного введения

антигепатитных препаратов перед другими. Ему удалось поднять уровень иммуногенности антивирусных ДНК-вакцин в смеси с адъювантами или цитокинами. Кстати, подобные полинуклеотидные вакцины, например, РНК-биопрепараты, применяют при гриппе, гепатите С человека, бешенстве, ящуре и других инфекциях (2).

 

Список литературы

1. Внутрилабораторный контроль качества определения маркеров вирусных гепатитов В и С и сравнительный анализ тест-систем / П.Г. Погуш, Е.Б. Редченко, А.А. Потапова [и др.] // Клинич. лаб. диагн. – 2003. - № 2. – С. 11-15.
2. Гендон, Ю.З. Прогресс в разработке вирусных полинуклеотидных (ДНК) вакцин / Ю.З. Гендон // Рос. онкологич. журн. – 1999. - № 5. – С. 148-151.
3. Жданов, В.М. Вирусные гепатиты / В.М. Жданов, В.А. Ананьев, В.М. Стаханова. - М.: Медицина, 1986. – 256 с.
4. Михайлов, М.И. Гепатит В - аспекты изучения / М.И. Михайлов // Вопр. вирусол. - 1990. - № 4. – С. 268-277.
5. Носик, Н.Н. Система интерферона у уток при вирусном гепатите В / Н.Н. Носик, Чьен Ли-шен // Вопр. вирусол. - 1989. – № 3. - С.302-305.
6. Прасолов, А.В. Новые вирусы гепатита В птиц; гепатит В птиц как экспериментальная модель для развития новой антивирусной стратегии: автореф. дис. … канд. биол. наук / А.В. Прасолов. – М., 2002. – 24 с.
7. Рудакова, А.В. Противовирусная терапия хронического гепатита В: анализ эффективности затрат / А.В. Рудакова, Ю.В. Лобзин, П.Ф. Хвещук // Клинич. микробиол. и антимикробн. химиотерапия. – 2002. – Т. 4, № 1. – С. 49-60.
8. Хроматография дрожжевого рекомбинантного HВsAg на пористых кремнезёмах / И.Ю. Курбатова, И.В. Красильников, В.Н. Борисова, С.В. Зубов // Вопр. вирусол. – 1990. - № 4. – С. 308-309.
9. Шахгильдян, И.В. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика) / И.В. Шахгильдян, М.И. Михайлов, Г.Г. Онищенко. – М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003. – 384 с.
10. A comparison of the effects of aflatoxin B1 on the livers of rats and duck hepatitis B virus-infected and noninfected ducks / A.A. Seawright, R.T. Snowden, I.O. Olubuyide [et al.] // Hepatology. – 1993. – Vol. 18. – N 1. – P. 188-197.
11. Biological efficacy and signal transduction through STAT proteins of recombinant duck interferon in duck hepatitis B virus infection / L.T. Heuss, M.H. Heim, U. Schultz [et al.] // J. Gen. Virol. – 1998. – Vol. 79, N 8. – P. 2007-2012.
12. Bollyky, P.L. Reconstructing the complex evolutionary history of hepatit B virus / P.L. Bollyky, E.C. Holmes // J. Mol. Evol. – 1999. – Vol. 49, N 1. – P. 130-141.
13. Cullen, J.M. A sequential histologic and immunohistochemical study of duck hepatitis В virus infection in Pekin ducks / J.M. Cullen, P.L. Marion, J.E. Newbold // Vet. Pathol. – 1989. - Vol. 26. - P. 164-172.
14. Cullen, J.M. A teratoma in a duck infected congenitally with duck hepatitis В virus / J.M. Cullen, J.E. Newbold, G.J. Sherman // Avian Dis. - 1991. - Vol. 35, N 3. - P. 638.
15. Dhumeaux, D. Viral hepatitis / D. Dhumeaux // Med. Chir. Dig. – 1997. – Vol. 25, N 8. – P. 343-344.
16. Duck hepatitis B virus nucleocapsids formed by N-terminally extended or C-terminally truncated core proteins disintegrate during viral DNA maturation / J. Kock, S. Wieland, H.E. Blum, F. von Weizsacker // J. Virol. – 1998. - Vol. 72, N 11. – P. 9116-9120.
17. Eble, B.E. Photochemical inactivation of duck hepatitis В virus in human platelet concentrates: a model of surrogate human hepatitis В virus infectivity / B.E. Eble, L. Corash // Transfusion. – 1996. – Vol. 36, N 5. - P. 406.
18. Evolutionary conservation in the hepatitis В virus core structure: comparison of human and duck cores / J.M. Kenney, C.H. von Bonsdorff, M. Nassal [et al.] // Structure. – 1995. – Vol. 3, N 10. - P. 1009 -1019.
19. Experimental transmission of duck hepatitis В virus / W.S. Mason, M.S. Halpern, J. M. England [et al.] // Virology. - 1983. – Vol. 131, N 2. – P. 375-384.
20. Fernholz, D. Hepatitis B viruses in birds / D. Fernholz, K. Wetz, H. Will // Virus infections of birds.– Amsterdam etc.,1993. – Vol. 4. - P. 111-121.
21. Freiman, J.S. Natural duck hepatitis В virus infection in Australia / J.S. Freiman, Y.E. Cossart // Austral. J. Exp. Biol. Med. Sci. – 1986. – Vol. 64, N 5. - P. 477.
22. Jilbert, A.R. Kinetics of duck hepatitis В virus infection following low dose virus inoculation: one virus DNA genome is infections in neonatal duck / A.R. Jilbert, D.S. Miller // Virology. – 1996. – V. 15, N 2. - P. 338.
23. Kruse, W. Epizootiologische Untersuchungen zum Vorkommen von Entenhepatitis-, Influenza-A-, EDS-76-, Entenpest- und Hepatitis-B-Viren bei kommerziell gehaltenen Pekingenten, Flugenten und Gänsen: Inaug. Diss. / W. Kruse. – Giessen, 1988. – 46 S.
24. Lenhoff, R.J. Competition in vivo between a cytopathic variant and a wild-type duck hepatitis B virus / R.J. Lenhoff, C.A. Luscombe, J. Summers // Virology. – 1998. – Vol. 251, N 1. – P. 85-95.
25. Live disease associated with duck hepatitis В virus infection of domestic duck / P.L. Marion, S.S. Knight, B.K. Ho [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1984. – Vol. 81, N 3. - P.898.
26. Mason, W.S. Virus of Pekin ducks with structural and biological relatedness to human hepatitis В virus / W.S. Mason, G. Seal, J. Sammers // J. Virol. - 1980. – Vol. 36. - P. 829 -836.
27. Protective efficacy of DNA vaccines against duck hepatitis B virus infection / M. Tnyatni, A.R. Jilbert, M. Qiao [et al.] // J. Virol. – 1998. – Vol. 72, N 1. – P. 84-94.
28. Robinson, W.S. The molecular biology of hepatitis B virus and related viruses of animals / W.S. Robinson. – Acad. Press. – 1985. – P. 319-347.
29. Schneider, R. Mechanism, kinetics and role of duck hepatitis В virus e-antigen expression in vivo / R. Schneider, D. Pernholz, Z. Wildner, H. Will // Virology. – 1991. – Vol. 182, N 2. - P. 503-512.
30. Spectrum of live disease and duck hepatitis В virus infection in a large series of Chinese duck with hepatocellular carcinoma / A. Duflot, R. Mehrotra, S.Z. Yu [et al.] // Hepatology. – 1995. – Vol. 21, N 6. - P. 1483.
31. Stannard, L.M. Hepadnaviridae / L.M. Stannard // Animal Virus Structure. – Hardbound, 1987. - P. 361-370,
32. Tagawa, M. Duck hepatitis В virus replicates in the yolk sac of developing embryos / M. Tagawa, W.S. Robinson, P.L. Marion // J. Virol - 1987. – Vol. 61, N 7. - P. 2273.
33. Tavis, J.E. The duck hepatitis B virus polymerase is activated by its RNA packging signal E / J.E. Tavis, B. Massey, Y. Gong // J. Virol. – 1998. – Vol. 72, N 7. – P. 5789-5796.
34. Tsiquaye, K.N. Maternal transmission of duck hepatitis В virus in pedigree Pekin ducks / K.N. Tsiquaye, T.F. McCaul, A.J. Zuckerman // Hepatology. – 1985. - Vol. 5, N 4. - P. 622.
35. Urban, M.K. Sequence of events in natural infection of Pekin duck embryos with duck hepatitis В virus / M.K. Urban, A.P. O'Conell, W.T. London // J. Virol. – 1985. – Vol. 55, N 1. - P. 16.
36. Virus infections of birds / ed. J.B. McFerran, M.S. McNulty.– Amsterdam [etc]: Elsevier Sci. Publ. B.V., 1993. – P. 111-121.
37. Wei–Fa, Y. Duck hepatitis В virus and liver disease / Y. Wei-Fa, A.P. O'Conell, W.T. London // Gastroenterology. – 1983. – Vol. 85, N 2. - P. 260 –267.

 

                                                                                   

 

 

18. ГРИПП

 

Грипп (Influenza A, инфекционный синусит, заразный насморк, заразный катар дыхательных путей) – зоонозная болезнь, характеризующаяся высокой контагиозностью, интоксикацией, нарушением функций желудочно-кишечного тракта, дыхательной, кровеносной, нервной и иммунной систем многих видов птиц домашней и дикой фауны, антигенным дрейфом, длительной персистенцией у животных, летальностью водоплавающих и околоводных птиц до 100%.

В действующем законодательстве Евросоюза даётся следующее определение гриппа птиц – «Инфекция домашней птицы, вызываемая либо любым вирусом гриппа А, индекс внутренней патогенности которого у 4-8-недельных цыплят выше 1,2, либо любым вирусом гриппа А подтипа Н5 и Н7. Изолят или штамм признаётся высокопатогенным, если среди заражённых цыплят в течение 10 дней смертность составит более 75%. МЭБ рекомендует считать подлежащими уведомлению все случаи регистрации высокопатогенного гриппа птиц и любые случаи идентификации субтипов Н5 и Н7.

Историческая справка. Существует три серологических типа вируса гриппа: А, В и С. Вирусы гриппа типов В и С инфицируют людей, вызывают микроэпидемии (тип В) или спорадические случаи заболевания (тип С). Вирусы типа А поражают людей, птиц и млекопитающих (свиней, лошадей, тюленей, китов и др.) и имеют тенденцию к пандемическому и панзоотическому распространению (7, 9, 19, 28).

Пандемии гриппа А имели место: в 1889-1890 гг. – характеристика возбудителя неизвестна; 1918-1920 гг. – «испанка» (Н1N1); 1957-1959 гг. – «азиатский грипп» (Н2N2); 1968 г. – «гонконгский грипп» (Н3N2), и 1977 г. – «русский грипп» (Н1N1) (47, 52, 55).

До 2005 года эпидемическое распространение в основном имели серотипы Н1N1 и Н3N2. С 1996 года отмечена межвидовая передача птичьих штаммов вируса людям: Н7N7, Великобритания/1996; Н5N1, Гонконг/1999; Н7N3, Чили/2002, Канада/2004 (51).

В популяции домашней и дикой птицы циркулирует огромное количество типов и штаммов вируса гриппа А разной вирулентности. После 1975 года установлена циркуляция вируса в популяции декоративной птицы (субгруппы Н4 и Н3), а с 1990 года - среди бескилевых птиц (страусов). Заболевание со смертельным исходом зафиксировано у морских млекопитающих: китообразных (Н13N3, Н13N9) в 1972 и в 1989 гг.; ластоногих (Н7N7, Н4N6, Н3N3) в 1979-1992 гг.

Серологические доказательства циркуляции современных эпидемических штаммов вируса гриппа А КРС вполне обоснованы. Среди лошадей достоверно установлена циркуляция субтипов Н3, Н7, N7, N8 (спорадически фиксировались вирусы субтипов Н1 и Н2), а у свиней – Н1, Н3, Н9, N1, N2, N7. В 1984 году опустошительная эпизоотия гриппа, обусловленная возбудителем серотипа Н10N4, была зарегистрирована в Швеции.

Особенностью штаммов вируса гриппа птиц является способность так называемых низкопатогенных штаммов мутировать и переходить в высокопатогенные штаммы, что и произошло при последних вспышках в США, Мексике, Пакистане, Германии, Ирландии, Италии, где распространению вируса гриппа птиц предшествовало наличие в данном регионе низкопатогенного штамма того же серотипа (Н9N2) (48, 55).

На фоне бактериальных и других вирусных болезней грипп считался до 1999 года редкой болезнью; за 40 лет (1959-1999) во всём мире у домашней птицы было зарегистрировано только 18 эпизодов (7, 18, 48).

Венгеренко Л.А. (2003) сообщает, что в России грипп птиц не регистрировали с 1978 года. После выявления вируса болезни в Голландии, Дании и США (2003) в Россию был запрещён ввоз продукции всех видов птиц, кормов и кормовых добавок из названных стран (5). Ветеринарной службой России была разработана программа по предупреждению импорта возбудителя инфекции, куда внесён пункт обязательного проведения тестов на грипп. В период с 2003 по 2004 гг. грипп многих околоводных и водоплавающих видов птиц, а также млекопитающих был отмечен в 10 странах Юго-Восточной Азии. Болезнь протекала с проявлением характерных клинических признаков, сопровождалась гибелью и, дополнительно, вынужденным убоем птицы. В России болезнь широкое распространение приобрела с июля 2005 года, где была впервые диагностирована в Сибири (Новосибирской области). До марта 2006 года грипп птиц зарегистрировали в 12 регионах России и 44 странах мира: Австрии, Азербайджане, Албании, Афганистане, Боснии и Герцеговине, Вьетнаме, Германии, Греции, Грузии, Египте, Дании, Йемене, Израиле, Индонезии, Иордании, Ираке, Иране, Италии, Казахстане, Камбодже, Камеруне, Китае, Корее, КНДР, Лаосе, Малайзии, Монголии, Мьянме, Нигерии, Пакистане, Польше, Румынии, Сербии, Словакии, Словении, Турции, Украине, Франции, Хорватии, Чехии, Швейцарии, Швеции и Японии.

В 2007 году болезнь водоплавающих и продуктивных (кур, индеек, и др.) птиц отмечали в Великобритании, Германии, России, Египте, Чехии, Того, Франции, Нигерии. В августе грипп животных был зарегистрирован в 65 странах (9, 28, 23, 34, 53, 44).

Экономический ущерб. Определяется снижением продуктивности и гибелью больной птицы, а также дополнительными финансовыми затратами на проведение мероприятий по профилактике и ликвидации болезни.

В 2005 году грипп в России был зарегистрирован в 62 населённых пунктах, где во время карантина пало 22015 и уничтожено 588585 голов различных видов птиц, включая гусей, уток и лебедей (25).

На территории России с июля 2005 года по 23.03.2006 года пало более 500 тысяч птиц, уничтожено около 1 млн. голов. При минимальной компенсации 100 рублей за голову только на эти цели уже потрачено не менее 100 млн. рублей. С затратами на работу, санацию помещений, утилизацию и захоронение тушек, карантинизацию и т. п. сумма возрастает не менее чем в 2 раза.

За 6 месяцев 2006 года грипп был зарегистрирован в 16 субъектах РФ, 92 неблагополучных пунктах, где пало и уничтожено 1 385 530 голов птицы, в том числе водоплавающих.

В 12 субъектах Южного ФО и г. Москва вакцинировано 8 295 903 голов птицы (в сутки – 82 387). В начале 2006 года в субъекты РФ выделено более 39,6 млн. доз вакцины, из них доставлено более 15, 7 млн. доз.

Возбудитель. Ортомиксовирус (Ortomyxovirus) тип А, относится к роду Influenzavirus A семейства Ortomyxоviridae.

Вирус гриппа А, поражающий домашнюю птицу, может быть разделён на две отдельные группы по их вирулентности: высокопатогенный и низкопатогенный.

Высокопатогенный грипп птиц – крайне контагиозная, пантропная, системная болезнь домашних птиц, вызывающая высокую смертность (до 100%). К высокопатогенному вирусу гриппа птиц отнесены подтипы Н5, Н7 и, по некоторым классификациям, Н10. Большинство штаммов вируса типа А слабопатогенны, вызывают или субклиническую инфекцию, или поражение респираторного и репродуктивного трактов домашних и диких птиц.

Морфологическая и антигенная характеристика. Вирионы шаровидной, грушевидной и нитевидной формы с оболочкой, на которой расположены пепломеры длиной до 12 нм. Размер вирусных частиц от 80 до 500 нм. Геном представлен однонитевой РНК из восьми фрагментов. Вирус гриппа является сложным комплексом антигенов. По локализации различают внутренние и наружные антигены. К первым относятся нуклеопротеид (NP), белки M, P1, P2 и Р3. Наружные антигены представлены гемагглютинином (Н) и нейраминидазой (N). Нуклеопротеид и белок М (их ранее называли S-антигеном) имеют, в основном, общие для всего типа А антигенные детерминанты. Сочетание поверхностных антигенов – Н и N – образует серологическую подтиповую формулу, которая является «паспортом» каждого изолята или штамма вируса.

Выделено более 1000 изолятов вируса водоплавающих птиц. Установлено антигенное родство по нейраминидазе между вирусами гриппа многих птиц, человека и лошади.

Современная характеристика поверхностного антигена позволяет определить 15 подтипов вируса гриппа в различных сочетаниях HN, изолированных от многих видов птиц.

В настоящее время (2007 г.) известно более 50 вариантов (антигенных формул) вируса подтипа А (таблица 12).

Таблица 12