Острые отравления лекарственными препаратами. Экпресс-методы.

Как и в случае любых химических токсикантов, специфическое токсическое действие лекарственных веществ проявляется на ранней стадии острых отравлений — в токсикогенном периоде. Неспецифическое действие характерно для соматогенного периода. Специфическое действие токсиканта приводит к многочисленным патологическим процессам, поэтому важно определить природу лекарственного вещества в начале токсикогенного периода.В настоящем разделе рассматриваются результаты химико-токсил. исследования лекарственных средств, отравления которыми происходят наиболее часто.

Отравления барбитуратами

Производные барбитуровой кислоты оказывают тормозящее действие на ЦНС. Лекарственные средства этой группы используют в качестве успокоительных, снотворных, противосудорожных и средств для наркоза. Барбитураты быстро всасываются из желудочно-кишечного тракта. Для скринингового определения барбитуратов используют иммуно-химические методы (ИФА, РИА, ПФИА). При определении барбитуратов методом ТСХ их экстрагируют из биожидкости, которую предварительно подкисляют. В качестве экстрагентов применяют различные растворители, а также двух- и трехкомпонентные смеси: бензол-этилацетат (2:1), хлороформ-изопропанол-аммиак (5:5:1) И качестве реагентов для проявления используют сернокислый раствор сульфата ртути и дифенилкарбазон. Сине-фиолетовое окрашивание пятен, совпадающих по Rf со стандартами определяемых веществ, позволяет сделать вывод о присутствии барбитуратов в анализируемой пробе. Количественное определение производных барбитуровой кислоты можно проводить спектрофотометрически в ультрафиолетовой области по полосе поглощения с ^тах = 260 нм, измеряя разность абсорбции щелочного раствора барбитурата (тетраборатный буфер) при рН среды 10,0 и 13,0.Производные барбитуровой кислоты определяют также методом ГЖХ с использованием полярных и неполярных жидких фаз. Определение осложняется адсорбцией барбитуратов на твердых носителях. Для подготовки пробы в образец вводят 0,25 М серную кислоту и очищенный хлороформ. Проводят экстракцию и центрифугируют (8000 об/мин). Для анализа отбирают 1—5 мкл хлороформного извлечения. Используют ступенчатые температурные режимы колонки, например 180, 200 °С для барбитала, барбамила, нембутала и 230 °С для фено-барбитала.

Отравления лекарственными средствами группы бензодиазепинов

Лекарственные средства группы бензодиазепинов например хлордиазепоксид (хлозепид), медазепам, диазепам (сибазон), оксазепам, нитразепам, феназепам, алпрозолам — высокоактивные транквилизаторы с относительно малой токсичностью. Эта группа лекарственных средств ежегодно пополняется вновь синтезированными соединениями с раз-личными заместителями. Относительная доступность бензодиазепинов приводит к злоупот-реблениям и передозировкам.Производные бензодиазепина легко всасываются из желудочно-кишечного тракта, максимальное количество в крови обнаруживается через 1—3 ч. Степень связывания с белками плазмы высокая (например для диазепама степень связывания достигает 98%). Производные бензодиазепина как липофильные вещества депонируются в жировой ткани с последующим постепенным высвобождением в кровь. По этой причине бензодиазепины имеют довольно большой период полувыведения, например, для диазепама он составляет около 98 ч. Экскреция веществ этой группы — почечная (более 60% дозы) и кишечная.Экспресс-анализ бензодиазепинов проводят имунными методами (ИФА, РИА, ПФИА), оценивая общее содержание этих соединении.Определение бензодиазепинов проводят или по продуктам гидролиза — бензофенонам, или по исходным веществам и их метаболитам. Для проведения гидролиза анализируемую пробу биожидкости помещпнп и 6 М НС1 и нагревают при 140 °С в течение 60 мин. Экстракцию образующихся в процессе гидролиза аминобензофенонов проводят гептаном при рН 6,0—8,0. Анализ экстрактов проводят хроматографическими методами.При определении бензодиазепинов методом ТСХ в качестве подвижной фазы используют бензол. Обнаружение после разделения проводят по собственной желтой окраске с флюоресценцией в ультрафиолетовом свете. Предел обнаружения составляет 1—5 мкг в пятне. Элюаты хрома-тограмм используют для снятия электронного спектра или газохромато-графического исследования. Основные полосы поглощения аминобензофенонов в этаноле 230—240 и 390—400 нм. Количественное определение можно проводить фотоколориметрическим методом по окрашенным продуктам реакции бензофенона с образованием азокрасителя.Анализ биологической пробы без предварительного гидролиза позволяет обнаружить индивидуальные вещества и их метаболиты. Для этого проводят экстракцию бензодиазепинов из биообъектов органическими растворителями при рН 6,0—8,0 и последующее хроматографи-ческое определение.Для определения методом ТСХ применяют системы хлороформ-метанол (9:1), этилацетат—метанол—аммиак (85:10:5). Используя элюаты с ТСХ-пластин, проводят определение методом ГХ-МС по нативным соединениям или их летучим производным (дериватам).Возможно ВЭЖХ-определение производных бензодиазепина по нативным веществам или продуктам гидролиза. В качестве подвижной фазы можно использовать смесь ацетонитрил—0,05 М водный двузамещенный фосфат аммония (35:65 для нативных соединений или 55:45 для бензофенонов). Детектирование в ультрафиолетовых лучах прово-дят при 230—220 нм.

Отравление лекарственными средствами группы фенотиазинов

Лекарственные средства группы фенотиазина используются как транквилизаторы, антидепрессанты, антигистаминные и антиангинальные средства. Из алкильных производных фенотиазина наиболее известны аминазин (хлорпромазин), пропазин (промазин), левомепразин (тизерцин), метеразин (прохлорперазин), тиоридазин, хлорпротиксен, трифтазин.Из ацильных производных фенотиазина широко применяются этацизин, этмозин, нонахлазин и др.Производные фенотиазина химически очень лабильны и в организме подвергаются биотрансформации. Для экспресс-определения фенотиазинов в моче используют реакцию с FNP-реактивом, который состоит из смеси водного раствора хлорида железа (III), хлорной кислоты (НСЮ4) и азотной кислоты (1:9:10). Появляющаяся окраска от розовой до сине-фиолетовой свидетельствует о присутствии фенотиазинов или их метаболитов. Вследствие недостаточной специфичности реакции возможно получение ложноположительных результатов. Определению мешают салицилаты, желчные пигменты и другие соэкстрактивные вещества биологической пробы.Дальнейшее определение проводят методами ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ. При подготовке проб мочи и крови для анализа проводят гидролиз. Затем экстрагируют фенотиазины смесью гептан—3% изопентанол. Для ТСХ используют системы бензол— диоксан—25% аммиак (60:35:5) и этилацетат—ацетон—25% аммиак в этаноле 1:1 (50:45:4). Применяют также системы толуол—ацетон-этанол—25% аммиак (45:45:7,5:2,5) и диоксан—хлороформ—ацетон—25% аммиак (47,5:45:5:2,5). Детектирование проводят спиртовым раствором конц. серной кислоты (9:1) или реактивом Марки (H2SO4 + СН2О). Все фенотиазины дают красное или темно-красное окрашивание, кроме левомепразина, имеющего голубую окраску. Количественное определение проводят фотометрическим методом по окрашенному продукту взаимодействия производного фенотиазина с метиленовым оранжевым или кислотами.Для определения фенотиазинов методом ГЖХ используют тот же экстракт, температура колонки 230 °С или программирование от 130 до 290 °С со скоростью 20 °С/мин при температуре испарителя 250 °С.Для определения фенотиазинов используют ГХ-МС элюатов с ТСХ-пластин по нативным соединениям или ацето- и фторзамещенным дериватам.Возможно ВЭЖХ-определение производных фенотиазина в моче и сыворотке крови с использованием автоматических анализаторов; предел обнаружения 0,1 мкг/мл.

Отравление лекарственными средствами группы трициклических антидепрессантов

К группе трициклических антидепрессантов относятся амитриптилин, имизин, соответствующие N-дезметильные аналоги нортриптилин и дезипрамин. В анализе химико-токсикологические лаборатории выполняют качественное обнаружение амитриптилина в моче методом ТСХ. При скрининговых исследованиях проводят экстракцию из мочи хлороформом или эфиром при рН 10,5—11,0. Упаренный экстракт наносят на пластинку и проводят хроматографирование в различных системах, например этилацетат—ацетон—раствор аммиака в этаноле (50:45:5), бензол—диоксан—аммиак (60:35:5). Проявление проводят опрыскиванием конц. серной кислотой; наблюдается оранжево-кирпичная окраска. Предел обнаружения составляет 0,1 мкг в пятне.Количественное определение амитриптилина и нортриптилина проводят экстракционно-фотометрическим методом по комплексу с бром-феноловым синим после экстракционной и хроматографической очистки. Предел обнаружения составляет 1 мкг/мл (в случае смертельных отравлений). Для экспресс-диагностики антидепрессантов в крови и моче используют также иммунохимические методы, например ПФИА. При этом удается снизить предел обнаружения на порядок — до 0,01 мкг/мл. Таким образом, иммунохимический метод позволяет выявить передозировку лекарственного средства, что особенно важно в связи с малой широтой терапевтического интервала (близость терапевтических и токсических доз).Для дифференциальной диагностики, изучения фармако- и токсикокинетики используют методы ГЖХ и ВЭЖХ (предел обнаружения 1 мкг/мл). При определении токсических концентраций в крови для снижения предела обнаружения (до 0,2 мкг/мл) проводят предварительное превращение в трифторацетатные производные.

Отравление антигистаминными лекарственными средствами

К антигистаминным средствам относятся вещества, блокирующие Н-гистаминовые рецепторы. Это представители разных химических классов органических веществ (например, димедрол, супрастин, тавегил, диазолин), что объясняет применение различных методик для их определения. Дифенилгидрамин довольно легко всасывается после приема внутрь (биодоступность 50%). Связывание с белками плазмы достигает 72—98%, период полувыведения из крови 3—10 ч. Основные пути метаболизма - N-дезалкилирование, окислительное дезаминирование, конъюгация. Лишь 2-4% дозы выводится в неизмененном виде с мочой.Анализ на дифенилгидрамин проводится после экстракции веществ основного характера. Определение методом ТСХ проводят в общих системах, например бензол—диоксан—аммиак (60:35:5); проявляют опрыскиванием конц. серной кислотой - образуется лимонно-желтое окрашивание.Для ГЖХ-анализа используют тот же экстракт; температура колонки 230 °С или программирование от 130 до 290 °С со скоростью 20 °С/мин, температура испарителя 250 °С.

Отравление лекарственными средствами группы сердечных гликозидов

К группе сердечных гликозидов относятся дигитоксин и другие кардиотоксичные гликозиды, которые содержатся, например, в наперстянке. Их применяют как антиаритмические средства. Из структуры дигоксина следует, что гликозиды имеют высокую молярную массу, химически неустойчивы. Их терапевтические и токсические концентрации очень низкие, в связи с чем определение этих веществ, особенно в биологических м-лах, представляет определенные трудности. Доля связывания с белками 20-40%, доля выведения с мочой 60-90%, период полувыведения из плазмы 4—100 ч. Методы ВЭЖХ, ТСХ можно применять для определения сердечных гликозидов в сырье или в вещественных доказательствах, но не в биологических жидкостях, где их концентрация очень мала. Для определения гликозидов в моче используют иммунохимические методы.

Острое отравление ФОС.

Они являются средствами борьбы с грызунами. ФОС являются основными компонентами данной группы ядов. В РФ 10-15% больных, поступающих в стационары с острыми экзогенными интоксикациями, составляют отравления веществами группы ФОС. Основные приемы развития острых отравлений:

1. неправильное хранение препаратов;

2. применение препаратов в повышенных концентрациях;

3. ошибочное использование при самолечении кожных заболеваний (чесотки);

4. случайное употребление внутрь в состоянии алкогольного опьянения вместо ЛП,

приготовленных на спирту.

Высокая летальность - 20-24%. В клинической практике наиболее часто встречаются острые отравления карбофосом, хлорофосом, трихлорметафосом-3 и метафосом.Летальная доза при приеме внутрь составляет: метафос - 0,2-2,0 г, карбофос, хлорофос, трихлорметафос-3 - от 5,0 до 10,0 г соответственно.При ингаляционном поступлении наиболее токсичны октометилмеркаптофос, метилмеркаптофос, метафос; смертельная концентрация которых составляет менее 20 мг/м3 крови. Менее токсичны трихлорметафос-3, фосфамид, хлорофос, карбофос. Их смертельная концентрация 20-100 мг/м3.

Ведущим звеном в механизме токсического действия ФОС является нарушение каталитической функции ферментов холинэстеразы. Вследствие этого, возникает расстройство обмена ацетилхолина. Это выражается в характерных изменениях ЦНС, а также в нарушении деятельности внутренних органов и скелетной мускулатуры. Клиническая картина острых отравлений ФОС однотипна при действии различных препаратов этой группы. Отличие заключается в степени выраженности симптомов возбуждения центральных и периферических холинореактивных систем, в скорости развития токсического процесса и зависит от особенностей всасывания, распределения и выделения ФОС из организма. Клинические симптомы острых отравлений ФОС являются отражением 2-х основных фаз развития токсического процесса.

В токсикогенной фазе реализуется реакция соединения холинэстеразы с ингибиторами, а во второй фазе - соматогенной - идет приспособление организма к низкому уровню холинэстеразы. Во всех случаях острого перорального отравления имеет место нарушение со стороны ЦНС, которое обычно проявляется в нарушении психической активности больных и выраженными изменениями биоэлктрической активности головного мозга. Нарушение психической активности характеризуется развитием раннего астенического синдрома, интоксикационного психоза или коматозного состояния. Больные с астеническим синдромом жалуются на общую слабость, головную боль, головокружение, невозможность сосредоточиться, ощущения страха, поэтому для уточнения диагноза острого отравления ФОС имеют значение результаты лабораторных исследований. Используют следующие методы:

определение активности холинэстеразы цельной крови, плазмы и эритроцитов;

определение токсического вещества в крови, плазме, биологических средах методом ГЖХ.

Лабораторная диагностика основана на извлечении ФОС из биосред экстракцией органическим растворителем (гексан), дальнейшей отгонки растворителя на роторном испарителе и последующем определении остатков извлечения на газовом хроматоргафе с термоионным детектором.