Реакция преципитации. Компоненты. Методы постановки. Практическое применение.

РП- выпадение в осадок растворимого АГ при взаимодействии с соответствующими АТ- приципитатами в присутствии электролита. АГ м.б. прозрачный р-р белка или гаптена, различные экстракты. РП ставят несколькими методами. М-д кольцепритации: на известную сыворотку с известными преципитатами в узкой пробирке сверху осторожно наслаивают р-р АГ и в теч. 1ч. учитывают (+) р-ю(на границе жидкостей образуется белый диск приципитата и постепенно оседает). Так, определяют, например, АГ сибирской язвы в разных материалах. М-д прецип-ии в каппиляре: стеклянный каппиляр диаметром 1 мм сначала опускают на 1/3 в диагностическую сыв-ку, а затем на 1/3- в р-р АГ, переворачивают неск-ко раз и оставляют в вертикальном положении на сутки. Зерна преципитата оседают и собираются столбиками на нижнем мениске жидкости в каппиляре. Так определяют, например, С-реактивный белок(СРБ) при аутоиммунных заболеваниях, ревматизме, туберкулезе, инф. Миокарда(диагностическую сыворотку с преципитатами к СРВ получают путем иммунизации кроликов). М-д диффузной преципитации в агаровом геле: р-ры АГ и АТ помещают в разные места прозрачного геля, из которого они диффундируют, образуя при встрече приципитат в виде белых полос или линий. В м-де простой диффузии АГ диффундирует в агаре, содержащем определ. конц-ю диагнотической сыв-ки, которую предварительно вводим в незастывший агар. В м-де двойной диффузии АГ и АТ из лунок в агаре диффундируют навстречу друг другу в нейтральном слое агара. В м-де иммуноэлектрофорреза р-р неоднородного АГ сначала поддвергают фракционированию в огаровом геле под действием постоянного тока, а затем канавку в геле, сделанную сбоку от линии распределения фракций заполняют сыв-кой (АТ). В результате двойной диффузии в геле образуется специфический рис. Из дуг и линий преципитата, вид от которого зависит от кол-ва и кач-ва фракций АГ и АТ.

РП обладает высокой чувствительностью, она позволяет выявить белковые АГ в разведениях 1:100000 и выше, т.е. недоступные для обнаружения химическим путем. Титром преципитир-й сыв-ки считают наибольшее разведение АГ, дающее преципитацию при контакте с ней. Такая особенность связана с мелкодисперсным состоянием АГ, маленькими размерами его молекул. РП применяют для индикации микробных АГ в материале от больных и из внеш. Среды, определение Igразных классов, для выявления фальсификации пищ. Продуктов, для определения видовой принадлежности крови и др. биологических примесей(суд. мед. практика).

 

Реакция лизиса.Реакция связывания комплемента(РСК).Компоненты.Практическое применение.

РСК ( РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА )

ИНГРЕДИЕНТЫ

Пробирки, сыворотка больного, физ р-р,комплемент(сыворотка морской свинки)эритроциты барана,гемолитическая сыворотка(кролика)диагностикум

ПОСТАНОВКА

РЕАКЦИЯ В 2 ЭТАПА.

Параллельно ставят 1-ну опытную и 2-е контрольные пробирки:

1.контроль сыворотки пациентки(КС)к сывороткедобавляют физ р-р и комплемент,инкубируют и на 2-ом этапе добавляют гемолитическую систему(смесь эритроцитов и сыворотки кролика)инкубируют,проводят учет

2.контроль диагностикума/антигена(КА) на 1-ом этапе к диагностикуму добавляют физ р-р и комплемент,инкубируют,добавляют гемолитическую систему,инкубируют проводят учет

3.опытная пробирка(О) к сыворотке пациента добавляют диагностикум и комплемент,инкубруют, добавляют гемолитическую систему,инкубируют, проводят учет

УЧЕТ

КС КЛ О

А) красная прозрачная жидкость(лаковая кровь)выявлена в пробирках КС,КЛ

Б) прозрачная бесцветная жидкость и осадок на дне выявлена в пробирке О

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

1. на наличие антител в опытной пробирке указывае прозрачная бесцветная жидкость с эритроцитами на дне(гемолиз эритроцитов не произошел)

2.на отсутствие антител в сыворотке пациента указывает лаковая кровь(произошел гемолиз)

5.ВЫВОД. У ПАЦИЕНТА АНТИТЕЛА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ВЫЯВЛЕНЫ.. Реакция лизиса -серологический тест, основанный на растворении цельноклеточного АГ, соединенного с AT, в присутствии комплемента. В зависимости от АГ, участвующих в реакции лизиса, ее называют реакцией спирохетолиза, вибрионолиза, бактериолиза, гемолиза и т.д. AT, участвующие в реакции, соответственно называют спирохетолизинами, вибрионолизинами, гемолизинами и т.д. Комплемент проявляет литическое действие только в присутствии иммунного комплекса «клетка + лизин». Большинство м/о, за исключением холерного вибриона и трепонем, малочувствительны к литическому действию комплемента. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.