Выделение чистых культур аэробных бактерий

В практических бактериологических лабораториях для выделения чистых культур аэробных бактерий используют метод Дригальского, представляющий собой последовательный поверхностный рассев исследуемого материала петлей на чашки Петри с МПА. Процесс выделения чистой культуры данным методом можно разделить на 3 этапа.

1 этап: стерилизуют бактериальную петлю в пламени спиртовки. Захватывают петлей исследуемый материал (гной, кровь, моча и др.) и наносят на поверхность питательной среды в чашке Петри. Движения петли при посеве должны производиться последовательно по всей поверхности среды. После посева петлю прожигают в пламени спиртовки. Чашки подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37°С на сутки.

Рис. Посев материала на поверхность питательной среды

2 этап: на следующий день посевы на чашке просматривают, изучая характер роста. Отмечают нужную (подозрительную) колонию. С помощью стерильной бактериальной петли захватывают подозрительную колонию и пересевают в пробирку со скошенным МПА. Пробирку подписывают и помещают в термостат при температуре 37°С на 18-24 часа.

Рис. Характер роста на трех секторах питательной среды

3 этап: визуально изучают характер роста на скошенном агаре. Затем делают мазок из выросшей культуры, окрашивают его по методу Грама и, убедившись в том, что культура чистая, переходят к видовой идентификации. При микроскопии мазка, приготовленного из чистой бактериальной культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки.

Рис. Характер роста на скошенном агаре

Кроме метода Дригальского, в бактериологической практике применяют и другие. Например, для выделения чистой культуры протея, обладающего «ползучим» ростом, используют метод Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного МПА. Бактерии, обладающие ползучим ростом, из конденсационной воды вползают на поверхность агара. На следующий день проверяют чистоту выделенной культуры. Из верхнего края налета делают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Для выделения чистой культуры бактерий с трудом культивируемых на питательных средах (например: пневмококков), используют биологический метод, заключающийся в заражении восприимчивых к данному виду возбудителя животных. После гибели или появления признаков заболевания животного забивают и проводят микроскопическое исследование мазков–отпечатков из органов, а затем делают посев крови и органов на питательные среды. Далее исследования продолжают по методу Дригальского.

Чистую культуру бактерий также можно получить, если на исследуемый материал воздействовать каким-либо физическим или химическим агентом, обладающим избирательным антибактериальным действием. Например: для выделения чистой культуры спорообразующих бактерий, исследуемый материал прогревают при температуре 80°С в течение 20 минут или кратковременно кипятят для уничтожения вегетативных форм. Споры бактерий при этом сохраняются и при посеве материала на питательную среду прорастают. Далее чистую культуру получают обычным путем.

Для выделения чистой культуры возбудителя чумы посевы инкубируют при температуре 5°С, что значительно замедляет рост сопутствующей микрофлоры.

Для получения чистой культуры кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза) исследуемый материал обрабатывают 2% серной кислотой, уничтожающей сопутствующую флору.

Занятие 2