Созревания и стабилизации, а также сборки с TERT in vivo. Био ге-

нез TER. Как уже говорилось выше, элементы вторичной структуры

TER, взаимодействующие с белками, необходимыми для созревания,

стабилизации и сборки с TERT, отличаются у разных организмов.

Пути созревания и стабилизации TER также различны.

Первоначальный транскрипт TER простейших синтезируется

РНК-полимеразой III и при этом не процессируется. У простейших

T. termophila TER взаимодействует с белком p65, входящим в состав

теломеразы [128, 132, 133]. Белок p65 содержит N-концевой, La-мо-

тив (мотив связывания РНК), RRM и С-концевой домены. Все они

взаи модействуют с элементами стебель I/ стебель IV в TER. Белок

р65 способствует взаимодействию TER и TERT, то есть сборке тело-

меразного комплекса, а также стабилизации TER. У других простей-

ших Euplotes aediculatus TER также связывает белок, содержащий

La-мотив, – р43. Показано, что при реконструкции комплекса in

vitro белок р65 значительно стимулирует образование активной

тело меразы [5, 128]. Белок р65 взаимодействует с консервативным

выпетливанием GA в шпильке IV, способствуя ее изгибу.

У млекопитающих первоначальный транскрипт синтезируется

РНК-полимеразой II, затем TER кэпируется на 5'-конце, модифициру-

ется и процессируется на 3'-конце [134, 135]. Процессинг и стабиль-

ность TER зависят от H/ACA мотива, находящегося на 3'-конце моле-

кулы. H/ACA мотив также входит в состав малых ядрышковых РНК,

участвующих в посттранскрипционной модификации некодирующих

РНК. С этим мотивом взаимодействуют четыре белка, необходимые

для аккумуляции и стабильности РНК – dyskerin, NHP2, NOP10 и

GAR1. Все эти белки входят в состав теломеразного комплекса [15,

136–138]. Нарушение созревания TER человека ассоциировано с

таким генетическим заболеванием, как врожденый дискератоз. Также

TER содержит мотив CAB, который ответствен за локализацию TER

в тельцах Каяла [135].

TER дрожжей S. cerevisiae (TLC1 РНК) по многим параметрам

похожа на малые ядерные РНК (мяРНК), участвующие в сплайсинге.

Пер вичный транскрипт синтезируется РНК-полимеразой II, полиаде-

нилируется, на 5'-конец добавляется TMG-кэп и далее процессируется

в зрелую молекулу с удалением поли(А)-конца [139, 140].

Теломераза: компоненты и функции, регуляторы фермента 183

Полиаденилированный предшественник TLC1 РНК составляет

около 5–10% от общего количества TLC1 РНК [140, 141]. TLC1 РНК

содержит уридин-богатый консенсусный мотив RAU4-6GR (R-пу-

ри новое основание) мяРНК дрожжей, который взаимодействует с

Sm-бел ками. Такой же мотив дайден у некодирующих малых ядерных

РНК дрожжей (snРНК). Мутация в участке связывания Sm-бел ков в

TER или уменьшение количества одного из них (например Sm D1)

при водит к резкому уменьшению количества TLC1 РНК и тело меразы.

Пока зано, что Sm-белки входят в состав холофермента [139].

TLC1 РНК подвергается 3'-концевому процессингу [105, 106].

Обна ружено несколько различных форм этой РНК, которые различа-

ются длиной 5'-концевой части. Показана возможность модификации

осно вания С651 in vivo. Детали проценсса биогенеза TLC1 РНК до

конца не ясны, однако получены данные, свидетельствующие о том,

что при биогенезе эта РНК может перемещаться между ядром и цито-

плазмой [142, 143].

TER1 дрожжей Schizosaccharomyces pombe имеет много общего с

TLC1 РНК S. cerevisiae [118, 119]. Недавно был расшифрован процесс

биогенеза у дрожжей S. р ombe, оказалось, что для созревания TER1

необ ходим не полный сплайсинг, а только его первая стадия без после-

дующего лигирования экзонов [144]. Такой неполный сплайсинг был

описан впервые. Возможно, что подобный процесс ответствен и за

соз ревание других теломеразных РНК.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ БЕЛКИ ТЕЛОМЕРАЗНОГО КОМПЛЕКСА

В теломеразном комплексе различных организмов идентифициро ваны

дополнительные белки, необходимые для его функционирования.

К примеру, теломеразный комплекс S.cerevisiae состоит не только

из каталитической субъединицы (Est2p) и молекулы РНК (TLC1),

являю щейся матрицей для обратной транскрипции, но и содержит

допол нительные субъединицы – Est1p и Est3p [145]. Они не требу ются

для работы теломеразы in vitro, однако необходимы для ее функцио-

ни рования in vivo [146].

В первичной структуре Est1p имеется потенциальный РНК-уз наю-

щий мотив RRM [147]. Этот белок, наряду с Est2p, образует __________контакт

с теломеразной РНК вблизи матричного участка, что ука зы вает

на его участие в формировании активного центра фермента. Est1p

может формировать стабильный TLC1-содержащий комплекс даже в

отсутствии Est2p или Est3p. Установлено также, что Est1p взаимодей-

ствует с 3'-концевой областью теломерной ДНК [148]. Однако in vivo

Est1p может связываться с теломерной ДНК только в комплексе с

Cdc13p. Таким образом, Est1p является посредником, связывающим

184 М. Э. Зверева и соавт.

тело мерный комплекс с Cdc13p [149]. Est3p – постоянный компонент

тело меразного комплекса и, более того, ассоциация Est3p с ферментом

тре бует интактности каталитического центра. Взаимодействие Est3p с

Cdc13p значительно увеличивает доступ теломеразы к теломере [150].

В человеческой теломеразе также были обнаружены дополни тель-

ные теломеразные компоненты помимо TERT и TER. Человеческий

геном содержит три ортолога Est1, два из которых (Est1A, Est1B)

коди руют белки, участвующие в регуляции теломеразы [150]. На

дан ный момент ортологи Est3 не идентифицированы.