Неклассифицированные вирусы семейства (49)

gallid herpesvirus 2 (герпесвирус 1 болезни Марека), gallid herpesvirus 3 (герпесвирус 2 болезни Марека), ovine herpesvirus 1 (герпесвирус, ассоциированный с аденоматозом легких овец) и др.

 

                                              БОЛЕЗНЬ АУЕСКИ

 

           Pseudorabies, Aujeszky's Disease (англ.), Aujeskysche Krankheit,

               Morbus Aujeszkyi, Herpesvirus-suis-Infektion,

           Pseudowut, Infektiose Bulbarparalyse (нем.), Pseudorage (франц.)

Болезнь Ауески (БА), - псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, зудящая чума, бешеная чесотка) - остро протекающая болезнь сельскохозяйственных животных всех видов, пушных зверей и грызунов Характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, сильным зудом и расчесами (у всех животных, кроме свиней).

Информация об истории БА обобщена в обзорах (31,107). БА впервые описана в США в 1813 г среди телят, страдающих экстремальным зудом и в итоге погибших, соответственнo заболевание было названо "Maditch " - бешеная чесотка. Термин "псевдобешенство" был впервые использован в 1849 г в Швейцарии, так как клинические признаки у телят были подобны таковым при бешенстве.

В 1902 г А. Ауески установил этиологический агент как небактериальный и в последст­вии Шмайдхоффер подтвердил экспериментальной фильтрацией, что агент был вирусом. В 1934 г Sabin и Wright идентифицировали его как герпесвирус, который был иммунологически связан с ВГП и герпесом В (69b). Болезнь встречается во всех европейских странах, Южной и Северной Америке, Африке и Азии в виде энзоотий и наносит большой экономи­ческий ущерб. Несмотря на единую этиологию, патогенез болезни и ее клиническое прояв­ление зависят от вида, возраста и способа заражения. Наиболее высокий экономический ущерб болезнь, наряду со свиноводством, приносит пушному звероводству. У пушных зве­рей БА - острая кормовая инфекция. Основным источником ее являются боенские отходы и субпродукты, полученные от больных свиней или животных-вирусоносителей (4)

Клинические признаки. Инкубационный период от 1,5 сут до 15-20 дн. и зависит от метода заражения, вирулентности вируса и устойчивости животного.

У свиней БА протекает без признаков зуда. Особенно тяжело болеют поросята-сосуны и отъемыши. У поросят, зараженных внутриутробно или в первые 10 дн. после рождения, бо­лезнь носит септический характер, такие поросята нежизнеспособны, не могут сосать, по­стоянно лежат, у них наблюдаются спазмы глотки, икота, слюнотечение. Через 4-12 ч, а иногда через сутки после появления признаков болезни такие поросята обычно погибают. У новорожденных поросят бывает и аполексическая форма болезни: внешне здоровый поро­сенок падает и в припадке судорог погибает. У поросят от 10 дн до 3-х мес. первые признаки болезни - лихорадка (до 40-42° С), угнетение, слизистое истечение из носа. Затем появляют­ся признаки поражения ЦНС беспокойство, манежные движения. Больные поросята стремятся вперед, натыкаются на препятствия, упираются головой в стену или кормушку. По­являются судороги шейных и жевательных мышц, мышц позвоночника - прогибается спина. Нередко возникают припадки судорог. Поросенок падает и, лежа на боку, судорожно двига­ет конечностями; голова запрокинута, саливация усилена. У некоторых более выражено уг­нетение. Далее развиваются параличи глотки, гортани, конечностей. Наступает афония, из ротовой полости течет пенистая слюна, появляется одышка - следствие отека легких. Бо­лезнь длится от нескольких часов до 3-х сут. Погибают 70-100% заболевших.

Болезнь у свиноматок и подсвинков старше 5-мес возраста проявляется в форме добро­качественного гриппоподобного синдрома, сопровождающегося обильным слюнотечением. Иногда выделяют вирус от свиней, страдающих различными формами пневмонии (кашель, признаки ринита и конъюнктивита) Через 3-4 дн. животные выздоравливают. Признаки по­ражения ЦНС проявляются редко. Супоросные матки могут абортировать (61). В Китае опи­саны поражения плаценты у супоросных свиней, естественно зараженных вирусом БА (89, 90, 91). В природе циркулируют слабовирулентные штаммы, обладающие относительно низким нейротропизмом. В таких случаях свиньи могут быть вирусоносителями до 12 мес. и более. Острое течение БА проявляется лишь в случае циркуляции возбудителя на поросятах до 5 мес и особенно новорожденных от интактных свиноматок. ВБА патогенен для плодов в период иммунологической ареактивности, и в период иммунокомпетентности (21 а).

У крупного рогатого скота повышается температура тела до 41,9°С, прекращается жвачка, появляется сильный зуд в области ноздрей, губ, щек или глаз, реже - в других уча­стках тела. Животные вялые, отказываются от корма, беспокоятся, непрерывно лижут зудя­щие места, трутся об окружающие предметы, а если это не удается, грызут кожу. Возбуж­дение нарастает, глаза выражают испуг, животное мычит, стонет, рвется с привязи, но аг­рессивности не проявляет, пульс и дыхание учащены. Иногда больные животные падают на землю. Расчесанные до крови зудящие места отекают. Нередко наблюдаются судорожные сокращения жевательных и шейных мышц Частые позывы к мочеиспусканию, сильное слюнотечение, потливость, нервная дрожь. Через 1-2 сут. с момента появления первых при­знаков болезни наступает смерть Случаи выздоровления исключительно редки. Иногда зуда и расчесов не бывает, в таких случаях наблюдаются усиленное отделение пота, слюны, ато­ния рубца, жажда. Приступы беспокойства чередуются с периодами оцепенения, сонливо­сти. Описывается болезнь среди КРС, находящегося в прямом контакте со свиньями, проте­кающая остро и характеризующаяся тимпанией. Смерть обычно наступает при явлении на­растающей слабости.

У овец и коз БА проявляется такими же клиническими признаками, что и у КРС, однако возбуждение бывает редко Тяжело болеют и часто погибают в 1-е сут ягнята (24, 25).

У плотоядных животных (пушные звери, кошки, собаки) наблюдается отказ от кор­ма, они становятся пугливыми, беспокойными. Характерный признак - сильный зуд. Он от­мечается у большинства больных собак, у кошек зуд бывает реже. У больных собак и кошек иногда появляется возбуждение, напоминающее бешенство: животные грызут палки и раз­личные предметы, нападают на других животных, но агрессивности к людям не проявляют. Вскоре парализуется глотка, в связи с чем повышается саливация. Животные обычно погибают в течение первых 2-3-х сут (24, 25) Патогенез болезни у плотоядных, проявляется локализацией и распространением вируса невральным путем по аналогии с бе­шенством; животные не выделяют вирус во внешнюю среду, не являются источником ин­фекции и служат его экологическим тупиком.

У лошадей болезнь может протекать доброкачественно. У больных незначительно по­вышается температура тела, снижается аппетит и отмечается некоторое угнетение. Через 2-4 дня эти признаки исчезают (24,25).

Разнообразие клинического проявления БА объясняется видовой и возрастной чувстви­тельностью, уровнем иммунореактивности животных, а также пантропностью возбудителя, его способностью поражать клетки иммунной системы, вызывать в организме состояние иммунодефицита (12).

Патологоанатомические изменения. При внешнем осмотре трупов крупного и мелко­го рогатого скота, пушных зверей, собак и кошек обращают на себя внимание расчесы и ра­ны кожи в области морды, головы или других частей тела. Шерсть на этих участках отсут­ствует, кожа покрасневшая, покрыта трещинами, ссадинами, разорвана. Подкожная клет­чатка отечна, красного или темно-красного цвета. Слизистая оболочка носовой полости, гортани, глотки застойно гиперемирована. В бронхах пенистая, красного цвета жидкость Легкие темно-вишневого цвета, тестоватые, с поверхности разреза стекает пенистая красно­ватая жидкость. Иногда обнаруживают очаговое или разлитое воспаление. Слизистая ЖКТ покрасневшая, набухшая, по складкам покрыта кровоизлияниями и дифтерическими плен­ками Под серозными покровами паренхиматозных органов видны мелкие точечные крово­излияния. Кровеносные сосуды мозга и его оболочек расширены, полнокровны, мозговое вещество отечно. В мозговых желудочках находят большое количество красноватой жидко­сти (53,73).

У свиней, поросят-отъемышей и сосунов расчесы и другие повреждения кожи, как пра­вило, отсутствуют В миндалинах, на слизистой оболочке надгортанника, глотки часто обнаруживают крупозные дифтерические пленки, некротические фокусы, язвы и эрозии Резко выражен отек легких. Слизистая ЖКТ диффузно воспалена, отечна, с кровоизлияниями и докрыта дифтерическими пленками. Брыжеечные лимфоузлы увеличены, отечны. У поросят-отъемышей и сосунов в печени, селезенке, почках обнаруживают множественные мел­кие некротические очажки. Головной мозг и его оболочки застойно гиперемированы, отеч­ны, иногда покрыты кровоизлияниями В мозговых желудочках содержится большое коли­чество желтоватой жидкости (2). У молодых поросят встречается некротический энтерит. Основные видимые изменения обнаруживаются в грудной полости. Сердечная мышца дряб­лая, с сильными дистрофическими изменениями под эпи-, эндокардом и в миокарде. Легкие застойно гиперемированы и отечны с обильным выделением транссудата. В печени крово­излияния, лимфоузлы грудной и брюшной полостей вишневого цвета, сочные на разрезе. Сосуды головного мозга кровенаполнены (11).

Гистологические изменения. При гистологическом исследовании в миндалинах, глот­ке, печени, селезенке обнаруживают очаговый некроз клеток с выраженным кариорексисом, при этом реакция со стороны окружающей ткани отсутствует (90, 91). В легких альвеолы расширены, просветы их заполнены серозной, иногда с примесью фибрина, лейкоцитов и эритроцитов и десквамированного эпителия жидкостью. В головном и спинном мозге раз­вивается картина негнойного менингоэнцефалита.

Патогенез. При попадании на слизистую глотки, гортани, трахеи, легких или через по­врежденную кожу вирус проникает в периферическую нервную систему и достигает голов­ного мозга, легких, где размножается. Через 24 ч после заражения вирус обнаруживается в легких; здесь он поражает клетки эпителия, фибробласты, лимфоциты, макрофаги. Позднее в ядрах и цитоплазме этих клеток выявляют капсиды вируса, а в межклеточном пространстве - вирусные частицы. Через 48 ч вирус находят в головном, а затем в спинном мозге, селезенке, печени, в лимфоузлах, мышцах и коже. Во вторичной фазе болезни вирус pacпространяется лейкоцитами через кровеносную и лимфатическую системы по всему организму. Генерализация длится примерно 7 дн. У некоторых свиноматок ВБА по кровяному руслу проникает в матку и плод. Проявление БА у свиней сильно различается в зависимости от возраста и вирулентности вируса. В течение последних 30 лет в Европе отмечают выражен­ный пневмотропизм болезни (20, 21, 22)

Вирусемия способствует развитию лихорадки сосудистых нарушений. У больных жи­вотных в месте внедрения вируса нарушается содержание ацетилхолина, гистамина и дру­гих веществ, что способствует развитию зуда, расчесов и различных повреждений кожи. В ЦНС и внутренних органах вирус вызывает тяжелые патологические изменения, приводя­щие к гибели животного (43, 45).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. Впервые установил и описал болезнь в Европе венгерский ученый А Ауески в 1902 г. Вирионы содержат 2-спиральную линейную ДНК. ВБА состоит из одетого нуклеокапсида, который окружает линейный геном из ДНК. Размер вириона 150-180 нм в диаметре, нуклеокапсида 105-110 нм. Нуклеокапсид состоит по крайней мере из 8 белков от 22,5 до 142 кД. Белки с мол.м. 142, 34 и 32 кД являются преобладающими (103а). Вирусная оболочка имеет из 9 структурных белков с мол.м. от 50 до 130 кД (54, 107). Восемь из них имеют сахар, прикрепленный к ним, и относятся к гликопротеинам.

Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, быстро инактивируется жел­чью, устойчив к широким колебаниям рН (5-9), 1-2%-ный раствор формальдегида инактивирует вирус в течение 15-20 мин. Он устойчив к прогреванию, сохраняет активность при 60°С 40-50 мин, инактивируется через 3 мин при 80°С. Однако замораживание при -20°С способствует его инактивации. Прямые солнечные лучи обезвреживают его в течение 6 ч, рассеянные солнечные лучи - за 12-48 ч, ультрафиолетовые - за 1 мин. Холод консервирует вирус, при 1-4°С он активен от 130 дн до 4 лет. В 40%-ном растворе глицерина и глицерин-фосфатном буфере с нейтральным рН сохраняется в течение 2-3 лет, в насыщенном раство­ре NaCI - не менее 3 мес. В тканях высохших трупов грызунов вирус сохраняется до 6 мес., в гниющих трупах - до 1 мес. В моче летом вирус сохраняет активность 3 нед. и 8-15 нед в зимнее время, в навозной жиже - летом в течение 1 мес,. зимой - около 3 мес. При биотер­мическом обеззараживании навоза инактивируется в течение 8-15 дн. Горячий 3%-ный рас­твор NaOH, 20%-ная взвесь свежегашеной извести, 1%-ный раствор формальдегида убива­ют вирус за 5-20 мин, однако растворы креолина и карболовой кислоты слабоэффективны..

Антигенная структура. В оболочке ВБА различают 3 основных гликопротеина Д1, Д2, ДЗ, кодируемых U-сегментом вирусного генома. При инъекции свиньям AT формиру­ются ко всем гликопротеинам. Гликопротеин Д1 состоит из 2 субъединиц с мол. м. около 80 кД - концевой фрагмент Д1 содержит высокоантигенный домен, способный вызывать обра­зование ВНА и защитный эффект Гликопротеины Д2 и ДЗ имеют соответственно мол м 110 и 60 кД (22). Эпитопное картирование вирусных АГ и изучение роли отдельных эпитопов в индукции иммунного ответа имеет важное значение при разработке маркированной вакцины и дискриминирующей диагностической тест-системы. Гликопротеин gI ВБА слу­жит маркерным белком в вакцинах и соответствующих тест-системах.

АГ активность. Вирус продуцирует образование ВНА, КСА и ПА, которые можно обнаружить с помощью РН, РСК и РДП. Специфические КСА появляются в сыворотке кров через 3 дн. после заражения, и титр их не снижается в течение 30-40 да. ВНА появляются в 5-7 дн, достигают максимума через 3-4 нед и титр их сохраняется от 1 г. до 1,5 лет. Вирусные гликопротеины Д1, ДЗ и gp50 индуцируют развитие ВН активности сывороточных AT. Вакцинированные свиньи и животные-рековалесценты, с титром ВНА 1-801 выше, противостоят экспериментальному заражению. Динамика AT в период с 5-го по 21 день после заражения 6-нед поросят характеризовалась следующими показателями. На 5-7-е сут после заражения появлялись преимущественно AT класса М, которые обнаруживали только в РНГА. ВНА начинали появляться только с 12-го дня. Таким образом, РНГА -более чувствительный метод диагностики инфекции, особенно на ранних сроках при наличии AT класса М (56). ТК вируса и его гликопротеины важны для персистенции вируса в макрофагах и клетках нервной системы.

АГ вариабельность и родство. АГ вариантов у ВБА не установлено. Методом перекре­стной ИФ установлено АГ родство ВБА и простого герпеса. Предложен метод дифференциации разных штаммов ВБА, основанный на разделении рестриктазных фрагментов ДНК. Полученные фрагменты разделяют электрофорезом. Данный метод позволяет достаточно четко идентифицировать штаммы ВБА по подвижности полученных фрагментов (47, 62, 95).

Локализация и выделение вируса. Вирус пантропен и может быть обнаружен у есте­ственно восприимчивых животных в верхних дыхательных путях, легких и через 48 ч в го­ловном мозге, селезенке, печени, почках, слюнных железах, миндалинах, коже, лимфоуз­лах. У свиней его можно обнаружить на 1-6-й день болезни в носовой слизи. На 8-й день вирус исчезает из ЦНС, в это время в крови появляются ВНА. Первично вирус попадает в носоглотку, откуда его можно выделять в течение 2-х нед, а затем распространяется прямым нейролимфогенным путем по обонятельному, тройничному и языкоглоточному нервам, дос­тигая ЦНС. При проникновении через кожу вирус быстро размножается в месте внедрения в жировой, соединительной, мышечной тканях и затем лимфогенным и гематогенньм путями распространяется по всему организму, обнаруживаясь во всех внутренних органах. Из орга­низма вирус экскретируется с носовыми истечениями и слюной, но может присутствовать и в эякуляте. В крови его обычно можно обнаружить лишь в начале болезни, вирусемия кратковременна. В миндалинах естественно переболевших и экспериментально зараженных подсвинков вирус находится 120 дн, выделение его продолжается не менее 60 дн (до 18 мес)после инфицирования (24, 25). Вакцинация не прекращает репродукцию вирулентного вируса, который обнаружен в миндалинах всех животных, убитых на 3-б-й день, и в мозге большинства свиней. При подкожной вакцинации свиней шт. БУК он регулярно в течение 2-8 дн. выявляется в подкожной клетчатке на месте введения, в региональных лимфоузлах и в 18% случаев в ЦНС.

Кроме указанных органов его часто обнаруживают в надпочечниках. Доказана возмож­ность проникновения в плоды вирулентного и вакцинного штаммов вируса через плаценту. У павших поросят наивысшая концентрация вируса обнаружена в миндалинах, лимфоузлах области головы и легких. Описано невральное распространение вируса у телят, после смер­ти которых его обнаруживали в ЦНС. У кроликов и свиней он распространяется по крове­носным сосудам (24, 25). Инфицированные свиньи выделяют ВБА на 24 ч раньше проявле­ния клинических признаков. Свиньи с титром ВНА 3,0-4,5 log;, вакцинированные интраназально, также выделяют во внешнюю среду возбудитель, но в значительно меньших количе­ствах. От инфицированных свиней с титром поствакцинальных ВНА 6,8-8,5 log₂ВБА выде­лить не удалось (16, 18). Вирус выделялся от клинически больных или инаппарантно боль­ных в период 2-5 дн. после инкубационного периода ВБА может выделяться из носового экссудата в титрах 10⁷-10⁸ ТЦД5о в течение 1-2 нед. и в меньшем количестве из глоточных соскобов, вагинального секрета, препуция, молока и, иногда, мочи (68, 69,107,108).

Персистенция вируса. Доказана реактивация in vivo и in vitro латентного вируса у по­росят от вакцинированных свиноматок. В первичной культуре клеток почки свиньи, зара­женной шт БУК и АБ, удавалось получить латентную инфекцию, шт. АБ персистировал в инфицированной культуре клеток в течение 193 дн. Переболевшие бессимптомно серые крысы и мыши остаются вирусоносителями 130-140 дн. Длительность вирусоносительства у свиней колеблется в зависимости от возраста переболевших животных, у свиноматок и хряков - свыше 180 дн, у подсвинков моложе 6 мес - более 130 дн, и даже считают, что у вы­здоровевших свиней БА переходит в латентную форму, при которой вирус может пожиз­ненно персистировать в ЦНС, миндалинах и лимфоузлах, и животные также могут быть ис­точником инфекции. Поэтому трудности искоренения болезни связаны с тем, что выздоро­вевшие животные остаются носителями вируса и могут его выделять после стрессовых воз­действий. Поскольку вирусоносительство при БА широко распространено, то для исключе­ния его необходимо обязательно исследовать сыворотки крови в РН от всех вновь посту­пающих в хозяйство животных (21,25).

Экспериментальная инфекция. При интраназальном заражении гибель молодых супоросных свиноматок составляет около 40%. Кроме свиней, кроликов, норок, кошек болезнь можно легко воспроизвести на крысах при заражении их подкожно или интраназально. Лабораторные крысы более чувствительны, чем дикие. Заболевшие животные погибают, у крыс-реконвалесцентов AT не обнаруживают. Здоровые крысы, находившиеся в одни клетке с больными крысами или свиньями, как правило, не заболевают, и AT у них нет. Это наблюдение дало основание отрицать возможную роль крыс в переносе и резервации инфекции. Мыши в 1 мес. возрасте чувствительны к ВБА при внутримозговом и подкожном заражениях. Кортизон повышает их чувствительность. Цыплята 1 сут возраста восприимчивы к вирусу при различных способах заражения. Однако с возрастом смертность зараженных снижается. У больных кроликов с яркой клинической картиной расчесов через 41-75 после заражения установлено размножение вируса в ядрах ганглиозных, оболочечных, реже шванновских и эндотелиальных клеток капилляров (24).

Заражение всех чувствительных животных смертельно, хотя имеется одно сообщение, которое подтверждает выздоровление зараженной коровы. Некоторые дикие животные также чувствительны к ВБА со смертельным исходом - это опоссумы, еноты, крысы, мыши; практически все животные, окружающие свиноферму. Из приматов чувствительны обезьяны - резусы и мармозетки, устойчивы шимпанзе и Вагbагу. Сообщения о заражении людей ограничены и недостаточно документированы - не основывались на выделении вируса. В 1987 г. сообщалось о трех больных в Дании и Франции, у которых развивалась низкого уровня сероконверсия к ВБА после заболевания, которое возможно было передано от кошек. Возможно, что в данном случае имела место перекрестная реакция с AT, индуцированными другими герпесвирусами (69а).

Заражение вирулентным ВБА вакцинированных серонегативных свиноматок приводит к снижению их репродуктивности, трансплацентарной передаче вируса плодам и персистенции вируса у полученных от них поросят (22).

Культивирование. ВБА пассируется на кроликах, белых мышах (предварительно обра­ботанных гидрокортизоном), в первичных культурах клеток КЭ, почек КРС, обезьян, ягнят, свиней, перевиваемых клетках, вызывая образование некротических фокусов - бляшек, число которых пропорционально титру вируса (6а). Клетки КЭМ-Ла неодинаково чувстви­тельны к различным шт. ВБА, а фибробласты КЭ более чуствительны, чем первичная культypa клеток мышиного эмбриона. В культуре ФКЭ вирус образует бляшки с агаровым покрытием через 48 ч. после заражения. Помимо культур клеток, вирус удается культивировать в КЭ при инокуляции на ХАО после некоторого периода адаптации альтернативными пас­сажами. На ХАО наблюдаются специфические фокусы поражения и генерализованная ин­фекция Эмбрионы гибнут через 24-96 ч (в зависимости от степени адаптации).

ГА свойства. Показано, что гемагглютинин ВБА легко сорбируется на мышиных эрит­роцитах при температуре 4, 22 и 37°С. Но не сорбируется на эритроцитах КРС. При этом связавшийся с эритроцитами ГА не элюируется с них в присутствии нейраминидазы. Спе­цифичные для ГА рецепторы мышиных эритроцитов инактивируются трипсином, α-амилазой, пепсином, КIO₄>4 и ЭДТА, но не папаином, β-глюкозидазой, фосфолипазой С, нейраминидазой, этиловым эфиром, хлороформом и др., что указывает на гликопротеидную природу активного компонента ГА.. ГА стабилен при 37°С, разрушается при 60°С. При зо­нальном центрифугировании вирусных препаратов в градиенте плотности сахарозы пик ГА активности совпадает с пиком инфекционности (67).