Род: «Mammalian type B retroviruses»

Типовой вид: mouse mammary tumor virus.

В-морфология. Эксцентрично расположенное ядро, выступы на поверхности вириона. Геном 10 кб (1 мономер).

Описанные вирусы экзогенны, передаются вертикально, через молоко и эндогенно у мышей. Вирусы ассоциированы с карциномой млочной железы и Т-лимфомами. Не обнаружены онкоген-содержащие вирусы.

Виды (1):      mouse mammary tumor virus.

Род: «Mammalian type C retroviruses»

Типовой вид: вирус лейкемии мышей.

С морфология. Геном 8,3 кб. Выросты на поверхности. Центрально расрположенное ядро.

Вирусы широко распространены, экзо– и эндогенные вирусы встречаются у многих млекопитающих. Ретикулоэндотелиозные вирусы включают несколько видощв от птиц. Сходные эндогенные последовательности обнаружены у млекопитающих. Вирусы ассоциируются с рядом таких болезней как малигнизация, иммуносупрессия, нейрологические нарушения и др. Были выделены многие онкоген-содержащие вирусы млекопитающих и вирусы группы ретикулоэндотелиозов.

Определено 3 серогруппы:     онковирусы млекопитающих тип С, вирусы ретикулоэндотелиоза, вирусы рептилий тип С.

Виды: 1 – вирусы группы млекопитающих тип С (16 видов):,вирус лейкемии мышей, Moloney murine sarcoma virus, онковирус свиней тип С и др.

        2 – вирусы группы рептилий тип С (1 вид):ретровирус гадюкиviper retrovirus.

        3 – вирусы группы ретикулоэндотелиозов (3 вида): синцитиальный вирус уток,

        вирус ретиулоэндотелиоза, Trager duck splieen necrosis virus.

Род: «Avian type С retroviruses»

Типовой вид: вирус лейкоза птиц.

Морфология С-типа. Геном 7,2 кб (1 мономер). Вирусы широко распространены; экзо– и эндогенные вирусы уток и других видов птиц. Изоляты подразделяются на субгруппы А-G. Отдаленное сходство сиквенсов выявлено с эндогенными вирусами птиц и млекопитающих. Инфекция ассоциируется с малигнизацией и другми болезнями (изнурение, остеопороз). Выделено много онкоген-содержащих видов.

Виды (8 видов):вирус карциномы птиц, Mill Hill virus 2, вирус лейкоза птиц– RSA, вирус миелобластоза птиц, вирус миелоцитоматоза птиц 29, вирус саркомы Рауса, вирусы саркомы (3 вида).

Род: «Type D retroviruses»

Типовой вид: Mason-Pfiser monkey virus.

Морфология D-типа. Отсутствуют поверхностные выступы. Геном 8 кб (1 мономер). Экзо– и эндогенные вирусы обезьян и овец. Экзогенные (горизонтальная передача) вирусы обезьян связаны с болезнями иммунодефицитом, вирус Jaagsieкte связан с раком легких овец. Онкоген-содержащих вирусов неизвестно.

Виды (5): Mason-Pfiser monkey virus, вирус аденокарциномы легких овец (Jaagsieкte virus)

вирус обзьян 1 тип D и др.

Род: «BLV-HTLV retroviruses»

Типовой вид: вирус лейкемии КРС.

Морфология С-типа. Геном 8,3 кб (один мономер). Экзогенные вирусы (горизонтальная передача) обнаружены только у небольшой группы млекопитающих. Родственных энлогенных вирусов не известно. Инфекции связаны с В- или Т-клеточными лейкемиями или лимфомами, так же как и с нейрологическими болезнями (тропический спастический парапорез, HTLV-ассоциированная миопатия) с длительным латентным периодом и фатальным исходом. Онкоген-содержащих вирусов не выявлено.

Виды (4 вида): вирус лейкемии КРС, Т-лимфотропный вирус человека 1,Т-лимфотропный вирус человека 2, Т-лимфотропный вирус обезьян.

Род: Lenti-

Типовой вид: вирус иммунодефицита человека 1.

Ядро (нуклеоид) имеет вид цилндра или конуса. Геном 9,2 кб (1 мономер). В состав рода входят экзогенные вирусы (горизонтальная и вертикальная передача) человека и многих млекопитающих. Родственных эндогенных вирусов не известно. Вирусы ассоциируются с различными болезнями, включая иммунодефициты, нейрологические нарушения, артриты и др. Онкоген-содержащие вирусы не обнаружены.

Выделено 5 серогрупп (в соответствии схозяином). Некоторые группы перекрестно реагируют по gag-антигену (лентивирусы овец, коз и кошек).

Виды: 1– группа лентивирусов КРС (1 вид):вирус иммунодефицита КРС

        2– группа лентивирусов лошадей (1 вид): вирус инфекционной анемии лошадей

        3– группа лентивирусов кошек (1 вид): вирус иммунодефицита кошек (Petuluma)

        4– группа лентивирусов овец и коз (2 вида): вирус артрита-энцефалита коз, вирус висна-маэди (штамм 1514)

        5– группа лентивирусов приматов (3 вида), вирус иммунодефицита человека 1 (12 референс штаммов), вирус иммунодефицита человека 2 (6 референс штаммов), вирус иммунодефицита обезьян (11 референс штаммов).

Род: Spuma-

Типовой вид: пенящий вирус человека (human spumavirus).

Ядро центрально расположенное, на поверхности выступы. Геном 11 кб (1 мономер). Вирусы широко распространены. экзогенные вирусы найдены у многих млекопитающих. Родственных эндогенных вирусов не известно. Многие изоляты вызывают характерное вспенивание в культуре клеток. Со спумавирусной инфекцией не ассоциированы к-л болезни. Онкоген-содержащих вирусов не обнаружено.

Виды: синцитиальный вирус КРС, синцитиальный вирус кошек, пенящий вирус человека (спумавирус человека), пенящий вирус обезьян.

 

                   ЛЕЙКОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

                           Leukaemia in cattle, Bovine leukosis (англ.);

                         Enzootische Rinderleukose (нем.); Leukose bovine (франц.)

Лейкоз КРС - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной при­знак которой - злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в резул ьтате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетка­ми или появляются опухоли (1). Само определение болезни обязывает выдвинуть проблему борьбы с этой инфекцией на первое место И, действительно, после опубликования серий работ о близком генетическом и АГ-родстве ВБЛ с вирусом Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1 и HTLV-2) диагностика и профилактика лейкоза КРС приобретают особую акту­альность (7,8,61,81,92,101,102,103,105,106,108).

Лейкозы животных диагностируют почти во всех странах мира. Наиболее широко они распространены в США, ряде стран Центральной Европы, Дании, Швеции и странах Ближ­него Востока. Потери от вы­браковки туш с опухолевым лейкозом в США в 1978 г оценивали в 7 млн. долларов. Эта сумма не отражает реальных потерь, поскольку не учитывает ущерб от падежа и вынужденного убоя заболевших животных непосредственно на фермах. Экономический расчет показал, что в Великобритании потери от лейкоза за 25 лет могут составить 4,8 млн.фунтов стерлингов (58). В Турции, куда лейкоз был завезен с племенным скотом из Швейцарии, ко­личество больных животных составило 4,5%. Лейкоз установлен также в Африке и Австралии. В нашей стране возникновение лейкоза связано с завозом племенного скота в 1940, 1945-1947 гг. из Германии.

Симптомы и патологоанатомические изменения. Различают 2 основные формы лейкоза КРС: энзоотическую и спорадическую. Последняя форма встречается редко и поражая молодых животных (до 3-летнего возраста), проявляется клинико-морфологическими разновидностями: 1) ювинальный лейкоз (форма лейкоза у телят) - наиболее часто наблюдается у телят моложе 6-мес возраста, характеризуется увеличением лимфоузлов и часто инфильтрацией костного мозга, 2) тимусная форма лейкоза встречается у телят моложе 2-летнего возраста, характеризуется увеличением тимуса, 3) кожная форма встречается у телят от 1 до 3-летнего возраста, характеризуется узелковой лейкемической инфильтрацией кожи.

Спорадический лейкоз не представляет особого интереса в экономическом плане. Этио­логический агент при этой форме болезни не выявлен.

Энзоотический лейкоз - контагиозная болезнь с длительным латентным периодом, во время которого в крови выявляют вирус лейкоза КРС (ВЛКРС) и AT к нему. В основном встречается у крупных животных, наиболее часто в возрасте 5-8 лет. Болезнь характеризует­ся пролиферацией неопластических элементов, в результате чего образуются отдельные опухолевые массы и (или) диффузная инфильтрация различных тканей и органов В опухо­левый процесс вовлекаются лимфоузлы, часто поражаются селезёнка, сычуг, сердце, почки и другие органы. Клинические проявления зависят от вовлечённых в патоло­гический процесс органов, степени опухолевого роста и диссеминации неопластического процесса (6, 9).

Согласно современным данным, энзоотический лейкоз КРС объединяет две группы болезней. Опухолевые болезни первой группы характеризуются инфильтрацией лимфоцитами органов кроветворения с вовлечением в патологический процесс костного мозга (лимфоидный, миелоидный, слабо дифференцированный и недифференцированный лейкозы с раз­личными вариантами). Болезни второй группы (лимфо-, ретикулосаркома, лимфогрануле­матоз) сопровождаются опухолевым ростом, первично проявляющимся в лимфоидной ткани (лимфоузлах, селезенке и других органах). Типично протекающий энзоотический лейкоз в терминальной стадии характеризуется потерей массы, анемией, снижением молочной продуктивности и увеличением одного или нескольких периферических лимфоузлов. Заболева­ние неизменно заканчивается смертью животного через несколько недель или месяцев после проявления клинических признаков.

Патогенез. Патогенез при лейкозе коров изучен недостаточно, АГ вируса обнаружива­ют только в лимфоцитах инфицированных животных после краткосрочного культивирова­ния in vitro. Считают, что лимфоцитоз - результат поликлональной пролиферации В-лимфоцитов, постоянно стимулированных АГ ВЛКРС (53). Сравнительный анализ резуль­татов изучения интерфероногенеза лейкоцитами крови у здорового, свободного от ВЛКРС, спонтанно инфицированного вирусом лейкоза с картиной крови в пределах физиологиче­ской нормы, а также больного хроническим лимфоидньм лейкозом (ХЛЛ КРС), показал, что титры лейкоцитарного ингерферона в крови спонтанно инфицированных животных снижены в 1,3-2,9, a y больных ХХЛ- в 3,8-9,4 раза по сравнению с клинически здоровыми, свободными от ВЛКРС животными Проведенные исследования показывают, что ВЛКРС обладает иммунодефицитными свойствами, выраженными в данном случае снижением ин­терфероногенеза в лейкоцитах крови.

 

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Почти на протяжении века ученые многих стран проводили исследования по изучению этиологии этого заболевания и лишь 1969 г вошел в историю как год открытия ВЛКРС (62, 84). В последующих работах детально изучена морфология и морфогенез вируса и установ­лена его онкогенная активность в прямых опытах по заражению овец и телят с последую­щей реизоляцией возбудителя (3, 62, 75, 83, 84). На 21 Международном симпозиуме по лей­козу КРС (Брюссель, 1976) была принята резолюция, в которой отмечено "Вирус бычьего лейкоза следует официально признать определяющим фактором в этиологии энзоотического лейкоза. В государственных программах, регламентирующих борьбу с лейкозом КРС, сле­дует предусмотреть использование серологических тестов, направленных на выявление про­тивовирусных AT (52, 53).

Вирус является этиологическим агентом бычьего лейкоза и получил название "вирус лейкоза крупного рогатого скота" (ВЛКРС), или Bovine Leukemia virus (BLV). Это экзоген­ный онковирус типа С, отличающийся от всех известных вирусов типа С млекопитающих BLV широко распространен в стадах (до 75%). Относится к семейству Retrovindae, подсе­мейству Oncornaviridae/ Вместе с недавно открытым вирусом Т-клеточного лейкоза челове­ка (HTLV), ВЛКРС относится к особой группе, обозначенной типом Е (40, 41, 62, 84)

Морфология и химический состав. Зрелые вирионы ВЛКРС содержат центральнорасположенный электронно-плотный нуклеоид, диаметр которого, в зависимости от методов фиксации и обработки препарата, варьирует от 40 до 90 нм/ Центральная часть нуклеоида отделена от внешней вирусной оболочки промежуточным слоем. Гексагональное очертание нуклеоида в ультратонких срезах предполагает икосаэдрическую симметрию. Внешняя ви­русная оболочка представлена 2-контурной мембраной, которая лабильна, из-за чего диа­метр вирионов может сильно варьировать - от 73 до 120 им. На поверхности внешней обо­лочки выявляют шипики (пепломеры) с пуговкообразным утолщением на конце, длиной 8-11 нм, которые состоят из субъединиц, образованных двумя гликозилированными вирусны­ми белками gp51 и gp30, отвечающими за типоспецифичность. Вирионы имеют плавучую плотность в растворе сахарозы и CsCI, равную 1,15-1,18 г/мл и 1,17-1,33 г/мл соответствен­но. Химический состав вирионов. протеины 60%, липиды 35, нуклеиновые кислоты 2,2, уг­леводы 0,5% (6, 55).

В структуре ВЛКРС обнаружено 6 основных белков с мол.м. от 10 до 51 кД (р10, р12, р15, р24, gp30 и gp51) (95, 97,116). Четыре негликозилированных белка (р10, р12, р15, р24) составляют сердцевину вириона, причем белок р24 присутствует в наибольшем количестве (38). Два крупных белка являются гликопротеинами - один из которых (р51) расположен на поверхности вириона, другой (р30) - трансмембранный белок (107). ВЛКРС обладает выра­женной антигенной активностью и индуцирует синтез ВНА и КСА. Он агглютинирует эрит­роциты мышей. За инфекционность (94) и ГА активность ответственен gp51 (113). В gp51 выявлено 3 эпитопа, ответственных за нейтрализацию вируса. Поли- и монАТ против gp51 обладают ВН-активностью (70, 71, 72, 73, 76, 82, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 112), подавляют синцитийобразуюшую активность вируса, препятствуют выходу из клеток и вызывают ли­зис инфицированных клеток в присутствии комплемента. Оболочка ВЛ КРС содержит 2 белка gp60 (гликопротеин поверхности вириона) и р30 (межмембранный белок) (109).

Геном вируса может существовать в 2-х формах геномной 1-цепочечной РНК или в ви­де ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице, и интегрированной в хромосо­му клетки-хозяина в виде провируса. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах. В жизненном цикле вируса геномная РНК функционирует лишь 1 раз, когда служит матри­цей для фермента - обратной транскриптазы при биосинтезе комплементарной ДНК. Весь объем биохимических процессов, необходимый для полной репликации вируса, выполняет­ся с участием ДНК-провируса (60, 65).

Устойчивость. Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным возденет разрушается при повторных замораживаниях и оттаиваниях и при нагревании до 56°С в течение 15 мин. Пастеризация молока (74°С в течение 16с) разрушает его, и он теряет инфекционность для ягнят. Вирус обнаруживается в молоке после хранения в течение 72 ч. при 1°С, при 10 и 14,5°С его не обнаруживают через 48 и 24 ч соответственно. Полная инактивация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости установлена при 50°С в течение 70 с (100), при 70-74 °С в течение 17 с или при 56-63 °С в течение 5-30 мин (11). В цельном молоке, хранившемся при 1,1-5,5°С, происходит постепенное снижение титров ВЛКРС в течение 72 ч; при 9,9 и 14,4°С вирус не обнаруживался уже через 48 и 24 ч хранения. В сливках, собранных после отстоя цельного молока, при 1,1°С через 24, 48, 72 ч вирус был выделен только в пробах первых 2-х сроков отстоя. В разбавленном молоке (до 37,5 %) инфекционность сохраняется в течение 12 ч. Если при рН 6,5 вирус сохраняется в молоке в течение 72 ч, то при рН 7,1- только 48 ч (104). Снижение кислотности молозива до рН 4,5 разрушает вирус в течение 2 ч, особенно при высоких исходных титрах, а в нативном молозиве вирус сохранялся в течение 18 дн. при комнатной температуре (111). Прямой солнечный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ лучи - в течение 30 мин (120 Вт  на расстоянии 1 м). ВЛКРС полностью теряет активность в р-рах натриевого щелока (0,5° мин, 22°С), этанола (2,0%, 4 ч, 22°С), формальдегида (0,5%, 8 ч, 37°С), фенола (0,5%, 4°С) (48). В жидком азоте лимфоциты, несущие провирусную ДНК, сохраняют инфекционность в течение нескольких лет. Повторное замораживание и оттаивание разрушает клетки и устраняет инфекционность.

Антигенная структура. Электрофорез очищенных вирионов ВЛКРС в SDS - ПА и гельфильтрация в присутствии гидрохлорида гуанидина показывают в составе вирионов 4 главных негликозилированных белка и 2 гликозилированных.

Антигенная вариабельность и родство. В АГ отношении ВЛКРС отличается от из­вестных вирусов типа С. Не выявлено с помощью ИФ и иммунодиффузии АГ родства меж­ду главным внутренним белком ВЛКРС р24 и группоспецифическими АГ вирусов лейкозов мышей и кошек, опухолей молочных желез мышей, вирусов бабуинов, Мезон-Пфайзера, шерстистых обезьян ВЛКРС, являясь экзогенным ретровирусом КРС, отличается от извест­ных ретровирусов по АГ свойствам, морфогенезу, способности индуцировать синцитий в монослойных культурах клеток и по свойствам ревертазы. Кроме того, в отличие от боль­шинства других лейкемогенньгх вирусов, он присутствует у инфицированных животных в непродуктивном состоянии На основании этих различий, Ferrer считает, что ВЛКРС явля­ется особым лейкемическим вирусом, принадлежащим к особой группе Oncovirinae, обозна­ченной как тип Е (54).

Локализация вируса, вирусоносительство, персистенция. ВЛКРС обнаруживается в клетках молозива и молока естественно зараженных животных. Из слюны, носовых истече­нии, мочи и спермы инфицированных животных его выделить не удалось. Эксперименталь­но и спонтанно зараженный до или после рождения теленок остается инфицированным всю жизнь, несмотря на постоянное присутствие ВНА, выявляемых в РДП, РСК и других серо­логических реакциях (93). Отсутствие экспрессии генома ВЛКРС при наличии транскрип­ционных провирусов в опухолевых клетках дало возможность предположить, что причиной опухолевой трансформации клеток ВЛКРС является нарушение структуры клеточного гено­ма (121). Неспособность AT элиминировать ВЛКРС объясняется тем, что этот вирус обычно присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищен от действия AT. Размножение его не является необходимым для распространения в популяции животных. Инфицированные лимфоидные клетки могут передавать вирусный геном потом­ству во время размножения клеток. От клетки вирус может передаваться также без продук­ции вирусных частиц с помощью механизма Cellular Kissing (клеточного прикосновения), как описано относительно герпесвирусной системы.

Антигенная активность. Инфицированные ВЛКРС животные вырабатывают AT к не­скольким вирионным АГ. Впервые для выявления АГ этого вируса в цитоплазме продуцирующих вирус лимфоцитов КРС был использован метод непрямой ИФ с использованием сыворотки больного лейкозом КРС. В дальнейшем было показано, что выявляемый этим методом АГ является вирионным компонентом, несущим АГ детерминанты, присутствую­щие в главном внутреннем вирионном белке р24. В сыворотке крови больных лейкозом ко­ров обнаружены КСА, к 4-м вирусным полипептидам: р15, р24, gp30, и gp51. В сыворотке крови телят и ягнят, родившихся от больных лейкозом животных, имеется высокий уровень специфических AT, сохраняющийся в течение 5-6 мес. после рождения у телят и 3 мес. у яг­нят. Наличие высокого титра колостральных AT способно нейтрализовать инфекции ВЛКРС и предотвратить заражение новорожденных телят при условии их содержания раз­дельно от больных коров (39). AT вырабатываются преимущественно на структурный белок gp51 и относятся к IgC, IgA и IgM. Наличие AT не предотвращает развития опухолей.

Экспериментальная инфекция. Болезнь можно воспроизвести на новорождённых те­лятах и овцах при введении им различных вируссодержащих материалов. Эксперименталь­ному лейкозу предшествует бессимптомная онковирусная инфекция, переходящая в после­дующем в гематологическую стадию болезни с развитием характерной клинической и патоморфологической картины. У заражённых животных гематологическая стадия характеризу­ется постоянным лейкоцитозом и лимфоцитозом. Воспроизведение лейкоза у овец осуществляется с большим постоянством и в более короткие сроки по сравнению с КРС. После внутриперитонеального, подкожного, внутримышечного введений нативных лейкоцитов, краткосрочных культур клеток лейкозной коровы и бесклеточных фильтратов культура ной жидкости этих культур у всех заражённых телят и овец через 15-90 дн., в зависимости от дозы и активности вводимых материалов, развивалась инфекция, выявляемая как серологи­ческими, так и вирусологическими методами. В условиях опыта животных можно заразить аэрозольно и интраназально.

Инфекцию ВЛКРС можно также воспроизвести на козах, однако без клинических при­знаков лейкоза. Введение ВЛКРС в организм шимпанзе сопровождалось образованием в длительной циркуляцией вирусспецифических AT, однако выделить инфекционный вирус не удалось. Показана возможность пассирования вируса (шт. FLK) через новорождённых ягнят. В 6-и последовательных пассажах прослежено изменение некоторых биологически свойств вируса: усиление его лейкозогенности и иммуносупрессивного действия, сокраще­ние сроков индукции синтеза вирусспецифических AT после инфицирования. Длительное выявление вирусспецифических AT без клинических проявлений лейкоза наблюдается так­же у заражённых ВЛКРС кроликов и свиней. В экспериментальных условиях не установлен положительный эффект применения миксоферона (смесь антивирусных интерферонов, по­лученных генно-инженерным путем) (15,16,17).  

Инфицирование ВЛКРС мышей, крыс, хомячков, морских свинок, собак, белок, кошек и птиц (цыплят, голубей) не сопровождается развитием лейкозного процесса или выработкой вирусспецифических AT. Изучены свойства ВЛКРС на кроликах, трансгенных по гену антисмысловой РНК (асРНК) ВЛКРС. Иммунный ответ на экспериментальное заражение ВЛКРС, выявляемым в серологических реакциях, наблюдали у одного из 4-х трансгенныхк у 3-х из 4-х контрольных кроликов через 1-3 мес. Реизолировать ВЛКРС удалось от трек контрольных кроликов, тогда как от трансгенных кроликов вирус не выделяли (46). Kpoлики наиболее чувствительны при заражении их внутривенно нативными лейкоцитам от больной лейкозом коровы (26). Кролики могут служить лабораторной моде­лью при изучении ВЛКРС. Через 28-35 дней после заражения опытные кролики и овцы продуцировали антивирусные AT, выявляемые в РИД (13, 14, 15). В клетках нелимфоидного происхождения ни ВЛКРС, ни его АГ не обнаруживаются. С помощью молекулярной гиб­ридизации показано, что в этих клетках отсутствуют последовательности ДНК провируса.

Культивирование. Вирус лейкоза впервые удалось обнаружить в краткосрочных куль­турах лимфоцитов крови инфицированных животных (84). ВЛКРС репродуцируется в пере­виваемых хронически инфицированных культурах клеток тканей животных разных видов. Наибольшее распространение в мире получила перевиваемая линия клеток FLK-BLV, кото­рую получил в 1974 г. Van der Maaten путём сокультивирования эмбриональных клеток почки овцы с лимфоцитами лейкозной коровы. Эта линия клеток используется для биохи­мических, морфологических и серологических исследований (110,119,120,122).

В настоящее время получены и широко используются перевиваемые хронически инфи­цированные ВЛКРС линии клеток: фибробласты легкого эмбриона коровы (АИД-15), почки эмбриона коровы (ПЭК); почки эмбриона овцы (FLK-BLV); легкого эмбриона летучей мы­ши (T61-Lu); легкого макаки-резус (BLV-Simian); селезенки овцы (FLS, J-1228); тимуса эм­бриона коровы (ТЭК-МВА-766 LmTT) (50, 62, 120).

Способность ВЛКРС индуцировать в монослойных куътурах клеток образование синци­тиев (многоядерных клеток) была использована для разработки специфичного, чувствитель­ного и быстрого диагностического теста для вьывления инфекционного вируса и ВНА. Этот тест обеспечивает количественные результаты и успешно применяется для прямого выявле­ния ВЛКРС - инфекции у КРС и животных других видов (23, 24, 25, 27, 28, 40, 41, 42,44, 45,66, 67).

Особенности репродукции. В краткосрочных культурах вирус накапливается пре­имущественно во внеклеточных пространствах, но может формировать и внутриклеточные скопления, заключенные в цитоплазматические вакуоли. Почкующиеся формы вирионов можно обнаружить через 3-9 ч культивирования. В нативных лимфоцитах крови больных животных вирионы ВЛКРС, как правило, обнаружить не удается. В перевиваемых культу­рах клеток почкующиеся формы вирионов встречаются чаще. Почкование вируса сопровож­дается значительной дистрофией цитоплазмы (8). Инфицированные ВЛКРС клетки индуци­руют формирование синцития из клеток индикаторных культур. Каждый очаг синцития яв­ляется результатом действия одной биологически активной инфекционной вирусной части­цы и представлен поликариоцитом, образованным в результате слияния 5-25 клеток (68).

ГА свойства. ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА на­блюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или ультра­звуком ГА активность вируса повышается в 6-16 раз. Обработка трипсином, KI04 или нейраминидазой значительно снижает ГА-активность ВЛКРС. Эти данные указывают на то, что ГА ВЛКРС является гликопротеином gp51, который после очистки обладает высокой ГА- J активностью. Обработка мышиных эритроцитов нейраминидазой в 4 раза повышает их способность агглютинироваться.  ГАд свойства не установлены.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лейкозом животные. В естественных условиях инфекция ВЛКРС может передаваться пренатально и постнатально. Механизм пренатальной передачи включает передачу вирусного генома через гаметы (генетическая и хромосомная трансмиссия) и передачу целого вируса (эпигенети­ческая или экстрахромосомная трансмиссия). Постнатальная передача включает передачу вируса через молоко или при контакте. Контактная передача может быть результатом пря­мого воздействия контаминированных вирусом секретов или экскретов или переноса вируса, насекомыми или контаминированными объектами. ВЛКРС может персистировать в лейкоцитах клещей и переноситься ими на здоровых животных. Пренатальная передача ВЛКРС не превышает 20 случаев. Вирус передается от матери плоду трансплацентарно, во время последних 6 мес. внутриутробной жизни, а не через половые клетки.

Однако основным путем распространения инфекции в естественных условиях является контактная передача. Так как частицы ВЛКРС не продуцируются in vivo, то логично пред­положить, что в большинстве случаев вирус передается с инфицированными лимфоцитами. Для заражения коровы достаточно ввести внутрикожно 2500 лимфоцитов крови. Учитывая возможность переноса ВЛКРС ничтожным количеством крови, следует иметь в виду, что при не соблюдении элементарных санитарных правил инфекция может распространяться во время выполнения ветеринарных процедур со шприцами, иглами и другими хирургически­ми инструментами, контаминированными кровью. Следовательно, при массовом взятии крови, вакцинации, туберкулинизации и других мероприятиях для каждого животного необ­ходимо использовать отдельный стерильный инструмент. Несоблюдение этого правила рез­ко повышает инфицированность животных неблагополучных хозяйств. Имеются косвенные доказательства того, что распространение инфекции ВЛКРС может осуществляться насеко­мыми. В тропических зонах, например в Венесуэле, где распространены кровососущие насе­комые, пораженность лейкозом особенно высока.

ВЛКРС или инфицированные им лимфоциты присутствуют в молоке большинства ин­фицированных животных. Однако, несмотря на то, что молоко и молозиво инфицированных коров содержат вирус, инфекция новорожденным телятам в естественных условиях переда­ется редко по сравнению с контактным заражением (83). Устойчивость телят, вскормлен­ных инфицированными коровами, к ВЛКРС в течение первых месяцев жизни обусловлена, вероятно, материнскими ВНА, которые приобретают все телята, получающие молозиво. Ес­ли теленок заражен ВЛКРС во внутриутробный период, то колостральные AT не влияют на персистенцию вируса. В зависимости от уровня AT в молозиве, материнские AT исчезают в течение 4-6 мес. после рождения. Внутриутробная передача вируса лейкоза обнаружена у 4 из 50 обследованных новорожденных телят. По мнению авторов, возникновение передачи вируса лейкоза не оказывает существенного влияния на эпизоотологию данной инфекции, чем обосновывают нецелесообразность использования серопозитивных коров в системе противолейкозных мероприятий (32,33).

В сперме инфицированных быков ВЛКРС не выявлен. Однако, у быков с воспалением генитального тракта могут быть в сперме лимфоциты, инфицированные ВЛКРС. Экспери­ментально установлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфоцитов на слизистую оболочку матки. Таким образом, в случае наличия ВЛКРС в сперме инфици­рованных быков исключена передача вируса от быка корове. Вместе с тем, различий в час­тоте проявления инфекции среди потомства ВЛ КРС положительных и ВЛ КРС отрицатель­ных быков не выявлено. Механизм контактной передачи ВЛКРС не ясен, поскольку не уста­новлено наличие вируса в фекалиях, моче и слюне инфицированных животных. Паренте­ральное введение подопытным животным слюны, выделений из носа, проб выдыхаемого воздуха и мочи инфицированных животных не вызывало депрессии. Исследованиями, про­веденными в динамике опыта, было установлено, что через 60 сут. после прекращения выпаивания молока у 2-х кроликов в сыворотке крови были выявлены антитела к ВЛКРС в РИД, а через 90 сут. еще 5 кроликов были серопозитивными. На морских свинках не удалось установить факт передачи ВЛКРС через молоко. Опытные животные, которым вы­паивали молоко, термически обработанное и контрольные были серонегативными на протя­жении всего срока наблюдения. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что молоко является фактором передачи ВЛКРС. В основном инфекционный процесс у КРС ограничивается 2-мя стадиями: инкубационной и бессимптомного вирусоносительства. Только у небольшого процента (5-7) взрослых животных устанавливают 3-ю и 4-ю стадии: клинико-гематологическое и опухолевое проявление, характерные для лейкоза.

При лейкоза КРС рассматривают 2 пути передачи вируса: неонатальный (внутриутробный) и постнатальный (горизонтальный) Сероэпизоотологические исследования, проведенные на 62 тыс. зараженных ВЛКРС и 47 тыс. здоровых коров, показали, что вертикальный путь не оказывает существенного влияния на эпизоотический процесс. Горизонтальный (контакт­ный) путь является основным в эпизоотическом процессе. В стадах с зараженностью коров-матерей ВЛКРС в пределах 11,3-33,1% широкомасштабными сероэпизоотологическими ис­следованиями 6 – мес. телят (118 тыс.) в РИД выявляли сравнительно невысокий уровень AT носительства (2,1-4,8%). Одновременно установлено, что в оздоровленных от инфекции ВЛКРС стадах методом постепенной замены зараженных коров серонегативными собствен­ной репродукции первотелками, у последних более 57% матерей положительно реагировали на ВЛКРС.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических при­знаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые включают гематологические и гистологические, а также серологические исследования.

Все формы лейкоза характеризуются увеличением в различной степени лимфоузлов. При лимфолейкозе они увеличены равномерно, не сращены с окружающими тканями, кап­сула снимается легко, на разрезе узлы серо-белого цвета, сочные и саловидные. Лимфоузлы при лимфогранулематозе, лимфосаркоме и гистиоцитарной саркоме бугристые, капсула сращена с паренхимой, на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы, в органах брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают опухолевые разрастания уз­лов в виде конгломератов серо-белого, желто-серого цвета. Селезенка при лимфоидном, слабодифференцированном и миелоидном лейкозах увеличена. При первых 2-х формах она буро-красного цвета с четко выраженной красной и белой пульпой за счет гиперплазии фол­ликулов. В более поздней стадии болезни граница между белой и красной пульпой стерта. При миелоидном лейкозе селезенка красно-малинового цвета, фолликулы плохо заметны, а в отдельных участках отсутствуют, ткань рыхлой консистенции с кровоизлияниями. При лимфоретикулосаркоме селезенка не увеличена. При всех формах лейкоза отмечают очаго­вые или диффузные разрастания серо-белого или серо-розового цвета в печени, почках, толще сердечной мышцы, органах пищеварения, матке, скелетных мышцах, диафрагме и других органах.

Взятие и подготовка материала. Для гематологического исследования кровь берут из яремной вены в пробирки с антикоагудянтом - 10 %-ном р-ром динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон В) из расчета 0,02 мл р-ра на 1 мл крови. Не разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для сероло­гического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 мес. и старше В лабораторию в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки Для гистологического исследования ку­сочки пораженных органов (селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца и правого ушка сердечной мышцы, стенки сычуга, матки и скелетных мышц) посы­лают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном р-ре формалина.