Инфекционный гастроэнтерит свиней

Transmissible Gastroenteritis (TGE) (англ.);

Gastroenteritis infectiosa suum (лат.);

Transmissible Gastroenteritis des Schweines,

Virusdiarrhea der Schweine (нем.)

Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней -ТГС, болезнь Дойла и Хитчингса) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь, глав­ным образом поросят до 3-мес возраста, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью (часто до 100%) среди поросят до 2-нед возраста (101).

ИГС первыми описали Дойл и Хитчингс (США) в 1946 г. Вспышки его отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, в т.ч. в странах СНГ. Показано, что 19-54% свиноферм Европы и Северной Америки серопозитивны по ТГС (46). Распространенность в большинстве европейских стран составляет около 100%. Эта ситуация обусловлена респираторным вариантом вируса ИГС, названным респи­раторным коронавирусом свиней (РКВС), который быстро распространился с 1986 г. (32, 88,89, 90а). Экономические потери весьма значительны (19, 78, 81, 92, 93). Они складываются из высокой смертности новорожденных поросят, низкой эффективности лечения, сложности предупреждения заноса вируса в весеннее время, поскольку существенную роль в этом играют птицы, особенно скворцы. Эффективность коммерческих вакцин весьма ограничена (82, 83,100).

Симптомы и патологоанатомические изменения. Вирус поражает поросят до 3-нед. возраста. В более старшем возрасте они переболевают без летального исхода. У больных кормящих свиноматок снижается продукция молока. Болезнь клинически проявляется отсутствием аппетита, рвотой, диареей (беловатые, желтоватые или зеленоватые пенистые фекалии), обезвоживанием, слабостью и высоким падежом. Инкубационный период у 1-5-дн. поросят длится 12-18 ч, погибают все заболевшие. У 6-10-дн поросят инкубационный период - 18-36 ч, смертность среди них достигает 67%. С возрастом животных инкубационный период увеличивается, смертность уменьшается. Относительно высокая чувствительность к вирусу ИГС может быть связана со снижением цитотоксичности лимфоцитов в отношении клеток, инфицированных вирусом у свиноматок при опоросе, а также отсутствием цитотоксичности лимфоцитов у поросят в течение 1-й нед. после рождения (35). В этих условиях по­росята могут быть защищены только AT матери, полученными с молозивом и молоком. Кроме энтероцитов, поражение которых сопровождается атрофией ворсинок тонкого отдела кишечника, клетками-мишенями для вируса могут служить альвеолярные макрофаги (70), а также клетки миндалин и др. органов. В клетках миндалин больных поросят АГ ВИГС вы­являли даже чаще, чем в клетках тощей кишки.

Различают 3 стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В предклинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду, ино­гда лихорадку (41-41,5°С) и рвоту. Клинический период характеризуется сильной диареей с выделением газов. Фекалии серо-красного или жёлто-зелёного цвета, выделяются самопро­извольно. Стадия выздоровления более длительная. Заболевшие поросята испытывают сильную жажду, пьют много воды и сосут молоко, которое в непереваренном виде выходит с жидкими фекалиями. Потеря жидкости ведёт к сильному обезвоживанию организма, вследствие чего развиваются метаболический ацидоз и другие изменения в электролитиче­ском балансе крови. Смерти обычно предшествует кома, наступающая на 3-й день. У вы­живших поросят через 3-4 дня начинается регенерация ворсинок, диарея прекращается. Бо­лезнь длится 2-5 дн, смертность снижается по мере увеличения возраста поросят. Возрас­тной фактор также влияет на продолжительность и тяжесть болезни. У свиноматок, зара­жённых при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает ап­петит, отмечаются депрессия, умеренная диарея и прекращение лактации. Выздоровление наступает через 7-10 дн. Выжившие поросята отстают в росте. Иногда к желудочно-кишечным расстройствам присоединяется энцефаломиелит с гиперестезией. От 43 до 98% взрослых свиней в различных странах имеют к вирусу ВНА. Материнские AT исчезают у поросят к 15 нед. жизни. Затем появляются активно выработанные AT за счёт инаппарантно перенесённой инфекции под защитой материнских AT. Вирусный гастроэнтерит, в основ­ном, протекает в ассоциации с бактериальными инфекциями и чаще с колибактериозом (37,9%), вызываемым шт. 0-138, 0-103, 0-78, 0-86 и 0-1. Необходимо учитывать, что РКВС обычно вызывает субклиническую респираторную инфекцию. Лихорадка наблюдалась по­сле интратрахеального заражения, тогда как другие исследователи наблюдали пневмонию со смертельным исходом (85, 110, 111), а также выраженную потерю массы у 90-дн поро­сят, что не наблюдалось у 15-нед свиней.

Патизменения у поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, наблюдают, главным образом, в желудке и тонком кишечнике. В желудке небольшое количество свернувшегося молозива, слизистая его набухшая, покрасневшая, местами ослизневшая. Аналогичные из­менения и в тонком кишечнике. У поросят 2-нед возраста картина вскрытия более выраже­на. Труп истощен, конъюнктива, слизистые носовой и ротовой полостей бледные, с синюш­ным оттенком, скелетные мышцы вялые, суховатые. На ушах, брюхе, шее часто появляются красно-фиолетовые пятна. Слизистая оболочка дна желудка резко гиперемирована, набух­шая, покрыта слизью, иногда усеяна точечными кровоизлияниями, местами эрозирована и изъязвлена. Тонкий кишечник растянут газами, заполнен жидким содержимым, в состоянии катарального или катарально-геморрагического воспаления. Слизистая тонкого кишечника полнокровна или в состоянии катарально-геморрагического воспаления. Брыжеечные, пор­тальные, почечные и желудочные лимфоузлы набухшие, сочные, селезенка полнокровна. Печень бледная или пятнисто окрашена, дрябловатой консистенции. Почки бледные, иногда с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Слизистая мочевого пузыря набухшая, усеяна кровоизлияниями. Сердце увеличено, миокард серого цвета, дрябловатый, под эпи- и эндо­кардом по ходу сосудов мелкие кровоизлияния. Легкие без особых изменений или несколько полнокровные. Оболочки головного мозга гиперемированы, вещество мозга иногда размяг­чено, отечно, с мелкими кровоизлияниями. У подсвинков и взрослых свиней картина вскры­тия сходна с таковой у 2-нед поросят, но слабее выражена.

У поросят, погибших через 1-3 дня после рождения, в желудке и тонком кишечнике ус­танавливают слизистую дистрофию и некроз эпителиальных клеток, полнокровие и отек со­единительно тканной пластинки и подслизистого слоя кишечника. У поросят 2-нед возраста обнаруживают более глубокие изменения. В желудке - полнокровие и кровоизлияния, дис­трофия покровных клеток, обширные эрозии и некрозы, окруженные клеточными инфильт­ратами из лейкоцитов. Часто отмечают серозный или фибринозный гастрит. В тонком ки­шечнике гиперемия, гиперсекреция, вакуолизация, некроз и десквамация эпителия ворсинок вплоть до полного их оголения. Большая часть ворсинок атрофирована и деформирована. Собственный и подслизистый слои гиперемированы, отечны, часто с кровоизлияниями, ин­фильтрированы лимфоидными, эозинофильными и плазматическими клетками. В толстом кишечнике гиперемия, иногда дистрофия и некроз клеток эпителия крипт. Селезенка и лим­фоузлы инфильтрированы эритроцитами, строма их отечна. В печени гиперемия, зернистая дистрофия гепатоцитов и нарушение балочного строения, в почках зернистая дистрофия канальцевого эпителия, в сердце изменения тинкгориальных свойств саркоплазмы мышечных волокон, отек межмышечной соединительной ткани. В головном мозге находят пёриваску-лярные лимфоцитарные "муфты", очаги пролиферации глии (2).

Патогенез. Попадая в организм через ЖКТ или органы дыхания, вирус проникает в эпителий тонкого кишечника. Размножаясь в цитоплазме клеток ворсинок слизистой обо­лочки, он вызывает дегенерацию и некроз их. Под влиянием продуктов распада этих клеток и токсинов происходит нарушение гемодинамики и усиливается проницаемость стенок мик­роциркулярного русла, что способствует проникновению части вируса в кровь. Однако ос­новная масса вируса локализуется в эпителии кишечника, вызывая дистрофию, некроз и де-сквамацию клеток ворсинок, из-за чего последние укорачиваются (атрофируются). Наиболее выраженный некроз клеток и атрофию ворсинок отмечают в каудальной части 12-перстной, тощей и подвздошной кишок. Названные изменения эпителиальных клеток являются при­чиной острого нарушения процессов пищеварения, диспепсии, диареи и обезвоживания, на­рушения обмена веществ. Отмечают ацидоз, общую интоксикацию и гибель животных.

Распространение вируса ИГС по эпителию кишечника происходит путем выделения ви­руса из инфицированных клеток в просвет кишечника, а затем заражаются близлежащие клетки через апикальный домен (98). При инфекции РКВС атрофии сосочков тонкого ки­шечника не наблюдается. Однако в легких развивается интерстициальная пневмония у большинства инокулированных животных (39,86, 111).

 

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную этиологию подтвердил Doyle и Hutchings (1946), когда они описали фильтруемость этиологического агента (45). Вирус относится к семейству Coronaviridae роду Coronavirus (14,105). Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) впервые выделил и описал японский исследователь Тайима (1970). Помимо ВИГС, к коронавирусам сви­ней также относятся ГА-вирус энцефаломиелита и вирус эпизоотической вирусной диареи. Последняя протекает несколько легче. Видимо, к группе эпизоотической вирусной диареи следует отнести вирус КВ-777, вызывающий массовые вспышки диареи у свиней разных возрастов и индуцирующий образование АГ в цитоплазме тонкого и толстого кишечника. При электронной микроскопии его обнаруживают в содержимом кишечника и фекалиях больных поросят.

Морфология и химический состав. ВИГС оболочечный, плеоморфный, диаметром 60-160 нм (55), имеет один слой булавообразных отростков на поверхности проек­ции длиной 12-25 нм (105). РНК, экстрагированная из вирионов, обладает инфекционностью (28). Плавучая плотность ви­рионов в градиенте сахарозы составляет 1,18-1,20 г/см³ (28, 66). Фосфо- и гликолипиды, ин­корпорированные в оболочку, имеют клеточное происхождение, таким образом, оболочка вириона клеточнозависимая. ВИГС содержит 3 главных структурных белка: нуклеокапсидный белок (N), мелкий оболочечный гликопротеин (М) и большой гликопротеин пепломеров (S) (106). В зрелом вирионе N-протеин "вплетен" в вирусную РНК, образуя рибонуклеопротеидный комплекс.

Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихолату натрия, ус­тойчив к трипсину. Не подавляется ДНК-ингибиторами. Инактивируется 0,03%-ным р-ром формалина, 1%-ным Lysovet (смесь фенола и альдегида), 0,01%-ным р-ром р-пропио лактона, гипохлорита натрия, едкого натрия, йода (31). Изучена сравнительная термическая инак-тивация 2-х штаммов вируса инфекционного гастроэнтерита Perdue и ДОЗ. Возбудитель ус­тойчив к замораживанию. В замороженном виде вируссодержащий материал сохраняется 5-8 нед, при -18°С - до 18 мес, при -20, -40 или -80°С - 365 дн; при нагревании до 56°С инактивируется за 30 мин и до 50°С в присутствии 1М MgCLz - за 1 ч, при 37°С полная потеря инфекционности наступала через 4 дн. Устойчив к рН (4-9). В жидком кале на солнце инактивируется за 6 ч, в тени - за 3 дня. Амантадин и пуромицин тормозят репродукцию вируса. ВИГС стабилен в желчи поросят при рН 3,0 (69, 80, 80а), сохраняющую его инфекционность в тонком кишечнике.

Антигенная структура. В виру­се ТГС выявлены 4 АГ-сайта (А, В, С и D) и идентифицировано 11 эпитопов, 8 из которых вируснейтрализующие.

 У коронавирусов свиней и собак в протективном белке обнаружено, по крайней мере, одна общая АГ-детерминанта, обеспечивающая практически одинаковую защиту поросят при иммунизации матерей гомо- и гетерологичным вирусом (120).

Антигенная вариабельность. Штаммы вируса, выделенные от животных в разных странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты. Существует иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. Кишечный вирус содержит АГ А. В 1977 г. установлено АГ-родство ВИГС с ВИПК, а также коронавирусом собак (КВС). Вирус ИГС имеет 1 серотип, не имеет связей с вирусом энзоотической диареи свиней и ГА-вирусом свиней (41). Выделенный недавно респираторный коронавирус свиней (RSCV/PKBC), получивший широкое распространение в ряде западноевропейских стран, оказался в АГ-отношении тесно родственным ВИГС. Главным отличием его является ис­ключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности (65). В АГ-огношении оба вируса сходны между собой и имеют одинаковые нейтрализующие эпитопы во всех ви-рионных белках (N, S, М). Однако монАТ, специфичные к белку S ВИГС, распознают РКВС (88, 89). Вирус эпизоотической диареи свиней по всем свойствам является типичным короновирусом, хотя и не обладает АГ родством с другими представителями семейства коронавирусов (47, 89). Исследована степень родства ВИГС и РКВС по уровню индукции специ­фических реакций клеточного иммунитета и защиты против контрольного заражения поро­сят. ВИГС не имеет АГ родства с 2-мя другими коронавирусами свиней: ГА-вирусом энцефаломиелита (PEDV) и вирусом эпидемической диареи поросят (CV777) (90). Энцефалит, обусловленный ГА-вирусом, регистрируется в Европе и на Тайване, AT выявлены на огра­ниченном поголовье взрослых свиней в США (42). ВИГС, КВС и ВИПК АГ связаны (97, 118). Подтверждено, что эти 3 вируса могут представлять ряд мутантов исходного вирусного штамма (62). Перекрестная реакция имеет место также на уровне структурных белков S, N и М в реакциях радиоиммунопреципитации, иммуноблотинга, ИФА (62). Аналогичные пере­крестные реакции со структурными белками ВИГС и РКВС наблюдали с использованием поликлональной сыворотки в иммуноблотинге (34).

Локализация вируса. В клетках тонкого кишечника заражённого поросёнка вирус раз­множается в течение 2 нед, а с калом выделяется 7-10 дн. после клинического выздоровле­ния. В достаточно высокой концентрации он накапливается в эпителии тонкого кишечника, содержимом ЖКТ и ткани лёгких. Вирус, попавший в организм с кормом, благодаря кислотоустойчивости проходит в желудок и размножается в тонком кишечнике, разрушая эпите­лий ворсинок. Другие клетки не повреждаются. Вирус локализуется в цитоплазме цилинд­рических клеток ворсинок тонкого кишечника. Поражённые клетки обнаруживают уже через 5 ч после заражения. Через 9-12 ч происходит повторный цикл его репликации, и через 16-18 ч в большинстве клеток отмечают специфическую ИФ. Через 24 ч происходит атрофия ворсинок, а спустя 3 дня - регенерация клеток, которая завершается на 7-й день.

Больные и переболевшие свиньи являются вирусовыделителями до 2 мес. Концентрация вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни и в период её развития (10⁶ -10⁷ ИД₅₀/мл). В крови и паренхиматозных органах его обнаруживают в продромальный период при первом повышении температуры тела. При развитии виремии он выявляется в парен­химатозных органах, а также в слизистой носа, трахеи, миндалинах, в более низком титре - в крови. У взрослых свиней вирус редко обнаруживают в органах пищеварения и дыхания, а также в региональных лимфоузлах. В лимфоцитах он не реплицируется. Из организма больного животного вирус выделяется, в основном, с калом и в меньшей степени с мочой и экскретами. Во внутренних органах и лимфоузлах животных-реконвалесцентов он может переживать многие месяцы и годы. Равновесие вирус - хозяин может быть нарушено стрессовыми воздействиями. Поросята, заражённые в возрасте 5 нед, оставались вирусоносителями в течение 104 дн. Установлено, что заражение супоросных свиноматок за 2-3 нед. до опороса приводит к массовому заболеванию и высокой смертности их поросят. При заражении маток за 1,5-2 мес до опороса поросята остаются здоровыми в течение всего подсосного периода. После отъёма от матерей они легко переболевают, смертность незначительная. У экспериментально заражённых поросят наблюдали вирусоносительство в течение 2,5 мес (срок наблюдения).

Антигенная активность. Вирус ИГС обладает выраженной АГ активностью и индуци­рует синтез ВНА, активность которых обусловлена IgA, а при иммунизации - IgG. В молозиве, а затем в молоке свиноматок- ре-конвалесцентов, такие AT присутствуют в течение нескольких недель. Поросята от перебо­левших или ранее инфицированных в естественных условиях свиноматок устойчивы к за­болеванию, если они сразу после рождения и не реже, чем через каждые 4 ч потребляют та­кое молозиво или молоко. Пассивный иммунитет против кишечной инфекции обусловлен IgA молока. Титры AT в молозиве и молоке инфицированньк свиноматок выше, чем в сы­воротке крови. Значительный уровень IgA обнаруживается в молозиве и молоке только по­сле поедания свиноматками вируссодержащего материала. Возможный механизм, объяс­няющий это явление; - АГ-сенсибилизированные иммуноциты из Lamina propria кишечного тракта заселяют молочную железу. Субъединичный компонент ВИГС (гликопротеин), буду­чи выделенным из вирионов с помощью ультразвука и отделенным из остальных вирусньк компонентов (с помощью изопикнического центрифугирования), способен при внутримы­шечном введении защищать поросят. У вакцинированных животных развивался гумораль­ный иммунный ответ (53, 53а). Экспериментальная инфекция. Вызывается введением вируса per os или интраназально. Наиболее восприимчивы поросята - сосуны в возрасте от 1 до 15 дн, хотя во многих случаях болезнь удаётся воспроизвести и у взрослых животных. Заражение легко удаётся только при введении материала per os. Поросят 1-5-дн возраста можно заразить интраназально; очевидно, что при интразанальной инсталляции материала около 90% его попадает в ЖКТ. При парентеральных методах заражения воспроизвести болезнь обычно не удаётся или требуются для этого в 1000 раз большие дозы вируса, чем при оральном инфицировании. Морские свинки, белые мыши и мышата-сосунки 1-5-дн возраста, кролики, хомячки к ВИГС нечувствительны.

Культивирование. Вирус размножается в первичных культурах клеток тестикул, кожи, лёгких, щитовидной железы, тощей, подвздошной кишок, эпителии слизистой оболочки но­совой полости и в перевиваемых клетках тестикул поросёнка, не вызывая в первых пасса­жах ЦПД, а также в органных культурах пищевода. Редко полевые изоляты вызывают дест­рукцию клеток в первом пассаже; ЦПД появляется лишь после предварительной адаптации вируса. Адаптированный к культуре клеток, он быстро размножается и разрушает их в тече­ние 2-4 дн., в зависимости от дозы. Вирус хорошо культивируется в суспензионной культуре линии клеток почки поросенка ППК-66б. Эта культура оказалась высокопродуктивной сис­темой для крупномасштабного производства вакцинного штамма ВИГС (15).

Гемагглютинирующие свойства. Установлена ГА активность вируса в отношении эритроцитов цыплят, морских свинок и КРС. Однако только вирус, размноженный в культу­ре клеток ППС, обладал ГА-активностью, не влияющей на иммуногенность. Не установлено разницы в индукции ВНА и выраженности протективного иммунитета при использовании ГА и не ГА вируса. ГА активность коронавирусов связана с 4-тым структурным белком.

 

 

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Эпизоотологическая характеристика ИГС представлена в обзорах (92, 93). Различают 3 формы инфекции: эпизоотию, энзоотию и ин­фекцию, обусловленную РКВС, серологически тестируемым как ИГС (79, 88, 89). Основной источник инфекции - животные, находящиеся в инкубационном периоде, больные и перебо­левшие (в течение месяца). Инфекция передаётся с кормами, тарой, транспортом, навозом и субпродуктами. Вирус выделяется из молока инфицированных животных в течение острой фазы заболевания. В носовых истечениях он обнаруживается в течение 10 дн. после зараже­ния (85, 116). Особенно опасны фекалии больных животных. Инфекцию могут распростра­нять собаки и лисицы, так как вирус размножается в кишечнике. Вирус может передаваться домашними мухами (Musca domestica) (53). Из гомогенатов тонкого кишечника мух его удавалось выделять в течение 104 дн. после заражения, из органов дыхания - 11 дн. В орга­низме экспериментально зараженных поросят разновозрастных групп вирус выделяется из кишечника, печени, селезенки, фекалий, легких через 12 ч после заражения и сохраняется до 20 дн. (срок наблюдения), что свидетельствует о том, что поросята могут быть носителями вируса и источником инфекции (4, 5).

Серологические исследования, проведенные в Бельгии в 1984 г, неожиданно показали значительное увеличение числа носителей AT к ВИГС на фоне отсутствия вакцинаций или клинических признаков ИГС. Не энтеропатогенный вирус, АГ родственный ВИГС, оказался этиологическим агентом этого явления и был выделен в культуре клеток (90а). Вирус инфи­цировал эпителиальные клетки респираторного тракта и альвеолярные макрофаги. При экс­периментальном заражении инфицировал только некоторые не идентифицированные клетки тонкого кишечника, при этом вирус ограниченно обнаруживался или вовсе отсутствовал в кале (39, 40, 86). У поросят продуцировались AT, которые нейтрализовали ВИГС. Вирус широко распространен в Европе: Бельгии, Англии, Франции, Нидерландах, Германии (32, 59, 65, 71а, 89). В Дании и США также регистрируется заболевание (61, 89,116). Инфекция РКВС персистирует в закрытых фермах с циклическими эпизоотическими вспышками даже на фоне пассивных сывороточных AT.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к вирусу восприимчивы свиньи и собаки; новорождённые поросята в 2-1000 раз восприимчивее, чем свиньи, достигшие убойной кондиции. У собак отмечали потерю аппетита, понос, рвоту и гипертермию. Вирусом, выделенным от больных собак, заражали недельных поросят. Соба­ки могут быть носителем вируса и инаппарантным источником для восприимчивых свиней. КВС, ВИГС и ВИПК входят в одну группу антигенно родственных агентов, отличающихся от других членов семейства коронавирусов по РН и ИФ. В естественных условиях установ­лено существование штаммов ВИГС различной вирулентности. Вирусы ИГС, ИПК и КВС отличаются по патогенности для новорожденных поросят. Вирулентный ВИПК вызывает такие же симптомы заболевания, как и ВИГС. КВС не вызывает клинические признаки за­болевания. До сих пор нет сообщений о естественном заражении поросят ВИПК или КВС. У поросят, экспериментально зараженных ВИПК или КВС, не образуются AT к ВИГС.

 

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и резуль­татов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает изоляцию вируса из органов погибших поросят, идентификацию его в РН и РИФ в культуре клеток и выявление специфических AT в сыворотках крови больных и переболевших животных. В качестве экс­пресс-диагностики используют РИФ для обнаружения вирусного АГ в органах животных.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Для исследования в лабораторию направляют тонкий кишечник (тощую и подвздошную кишки с содержимым) и мезентериальные лимфоузлы от поросят в начальной стадии проявления клинических признаков болезни (первые часы диа­реи). Кроме того, целесообразен отбор органов и тканей (кусочков лёгкого, печени, селезён­ки, почек, головного мозга). Патологический материал от трупов, пролежавших более 2 ч после гибели, для исследования не пригоден. Материал необходимо брать от 8-9 больных поросят 3-5 поражённых помётов (по 2-3 поросёнка из помёта). От каждого поросёнка берут пробы массой 10 г. Отрезок кишки длиной 10-12 см перевязывают и берут с содержимым. Пробы патматериала доставляют в лабораторию в плотно закрытых стеклянных флаконах, помещенных в сосуд Дъюара с жидким азотом или в термос с сухим льдом. Для серологи­ческих исследований направляют парные сыворотки крови от свиноматок, в помётах кото­рых болеют новорождённые поросята, взятые с интервалом в 21 день. Вируссодержащий материал сохраняют в активном состоянии в течение нескольких лет при температурах ми­нус 20:-70°С. При -28°С вирус остаётся активным около 3,5 лет. При 4°С он может сохра­ниться в течение 1-го мес. В связи с фоточувствительностью вируса все вируссодержащие материалы следует защищать от действия света. С целью длительного сохранения патологи­ческий материал (фрагменты кишечника) можно замораживать до -30:-70°С и использовать по мере надобности в течение 2-3,5 лет. Для вирусологических исследований оттаиванию подвергают лишь необходимую часть патологического материала. Исходный материал ста­раются постоянно держать в глубоко замороженном состоянии. Упаковка должна надёжно предохранять материал от какого-либо воздействия на него жидкого азота. Для выделения вируса из органов поросят (отдельно паренхиматозных органов и кишечника) готовят 10%-ную суспензию на р-ре Хенкса по общепринятой методике и после проверки её на стериль­ность используют для заражения чувствительной системы (культура клеток, поросята).

Заражение культуры клеток. Выделение вируса проводят на первичных и перевивае­мых линиях клеток поросят (почек, щитовидн.ой и слюнных желез, тестикул). Материалом каждой пробы инокулируют не менее 4-8 пробирок с культурой клеток. Для исследования методом ИФ заражают культуру клеток, выращенную на стеклышках. Её просматривают ежедн.евно в течение 5-7 сут. При отсутствии ЦПД в первом пассаже проводят 5-7 последо­вательных пассажей. Обычно ЦПД вируса наступает через 2-7 пассажей и характеризуется набуханием, утолщением с последующим укорочением и округлением клеток до полного разрушения монослоя. Идентификацию выделенного вируса проводят в РИФ и РН.

Заражение восприимчивых животных. В связи с наличием большого количества штаммов ВИГС, не обладающих ЦПД, биопроба на восприимчивых поросятах - надежный метод выделения вируса. У зараженных животных вирус сравнительно легко удается выде­лить из фекалий, одн.ако в наивысших концентрациях он содержится в слизистых оболочках тонкого кишечника, особенно двенадцатиперстной и тощей кишок. Уже через 24-72 ч после клинического проявления болезни титры вируса в этих тканях достигают 10⁶ -10⁷ ИД₅₀ /г. По­этому, если необходимо выделить вирус, поросят убивают через 24 ч после появления диа­реи и полученные от них материалы (содержимое и соскобы слизистой тонкого кишечника) подвергают вирусологическому исследованию. В крови и почках поросят вирус удается об­наружить через 24-48 ч после заражения, но титры его обычно низкие – 10¹ -10² ИДдо/г, лишь изредка концентрация вируса в почечной ткани может достигать 10⁵ -10⁶ ИД₅₀/г.

У новорожденных поросят, зараженных интраназально, через 2 ч после заражения вирус может быть обнаружен в ткани легких (титры до 10⁴ ИД₅₀/г), а у поросят, зараженных ин­траназально в 6-дн. возрасте, вирус может быть обнаружен в слизистой оболочке носа (титры до 10⁴ ИД₅₀/г). Для подтверждения диагноза важно также исследование в РН парных сывороток, 1-ую из них берут на 3-5-й день после начала болезни, а 2-ую (от выживших жи­вотных) - через 1-2 нед..

Для биопробы можно использовать супоросных свиноматок за 3-5 дн. до опороса. Сви­номатку заражают 10%-ной суспензией, приготовленной из пораженных стенок тонкого ки­шечника вынужденно убитых больных поросят, или вируссодержащей культуральной жид­костью. Исследуемый материал вводят per os в количестве 10 мл. Контролем служит 2-я су­поросная свиноматка. Биопробу считают положительной, если через 24 ч (реже через 48 ч) поросята, родившиеся от зараженной свиноматки, заболевают с клиникой ИГС. В сомни­тельных случаях проводят исследования органов от вынужденно убитых в агональном со­стоянии поросят подопытной группы на наличие вируса методами РИФ и РН.