Технологии генодиагностики в отечественной стоматологии

В. Н. Царев Е. Н. Николаева 

В последние годы появилось новое направление в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний, основанное на использовании молекулярно-генетических технологий. Для выявления и идентификации патогенных микробов применяют методы молекулярной гибридизации, полимеразной цепной реакции (ПЦР), рестрикционный анализ хромосомной и плазмидной ДНК. Наиболее эффективным является метод ПЦР. Принцип метода заключается в способности за 2-3 ч многократно умножить (в 107 - 108 раз) специфический фрагмент ДНК или РНК микроорганизма-возбудителя и на основании этого сделать заключение о вероятности его наличия в исследуемом материале [1, 40].

Накопленный за последние десятилетия опыт свидетельствует о том, что ведущая роль в формировании воспалительного процесса в полости рта принадлежит резидентной облигатной анаэробной и микроаэрофильной микрофлоре. С помощью современных технологий в полости рта выделен генетический материал более 700 видов микробов. В то же время в качестве этиологических факторов заболеваний пародонта в настоящее время доказана роль только небольшого числа бактерий [6, 22, 39]. Развитие генерализованного парадонтита связывают прежде всего с грамотрицательными анаэробными бактериями. Использование обычных методов диагностики в большинстве случаев не позволяет своевременно выявить возбудителей и предотвратить дальнейшее развитие инфекционных заболеваний тканей пародонта.

В последние годы за рубежом в ежедневной стоматологической практике получили довольно широкое распространение молекулярно-биологические методы идентификации возбудителей заболеваний тканей пародонта. В нашей стране подобные исследования начались буквально в последние 5 лет. Одной из первых работ, показавших необходимость исследования «маркерных» микроорганизмов зубной бляшки на пародонтологическом приеме и возможность использования для этих целей ПЦР, является публикация Т.М. Дунязиной, C. Bauermeister в 2001 г. [6].

Нами метод ПЦР был применен для детекции 5 основных видов возбудителей воспалительных заболеваний пародонта - Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteroides forsythus и Treponema denticola. Метод реализован с помощью набора реактивов Micro Dent (HAIN DIAGNOSTICA, Германия), позволяющего проводить мультиплексную ПЦР с последующей регистрацией синтезированных ампликонов методом обратной гибридизации. Анализ обратной гибридизации включает денатурацию ампликона ДНК и нанесение полученного образца на нитроцеллюлозную полоску, содержащую специфические зонды 5 пародонтопатогенов, контрольный зонд для выделенной ДНК и контроль конъюгата. Ампликоны, связавшиеся с комплементарным зондом, визуализируют после добавления конъюгата стрептавидина со щелочной фосфатазой. Результаты считывают по предоставленному шаблону. Достоинством этой тест-системы является возможность одновременного исследования как нескольких образцов, так и 1 при необходимости срочного исследования.

Были обследованы 36 пациентов (Москва) в возрасте от 18 до 65 лет с хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) тяжелой (20 человек) и средней (16 человек) степени в стадии обострения. В экссудатах пародонтальных карманов 21 (58%) пациента были выявлены маркеры B. forsythus, 14 (39%) человек - A. actinomicetemcomitans, 19 (54%) - T. denticola. Маркеры пигментообразующих P. intermedia и P. gingivalis с помощью ПЦР выявлены в 61% случаев (у 22 пациентов из 36), и только в 40% случаев - с помощью анаэробного культивирования на 5% кровяном гемин-агаре (у 28 пациентов из 83). Анализ данных молекулярно-генетических и микробиологических исследований позволил сделать заключение, что относительная частота встречаемости разных видов пародонтопатогенов у больных с генерализованной формой пародонтита существенно различается. В ассоциациях доминировали представители следующих видов: P. intermedia, P. gingivalis, B. forsythus, T. denticola, Fusobacterium nucleatum, A. actinomycetemcomitans, Actinomyces naeslundii, A. israelii, Streptococcus intermedius, Peptostreptococcus micros. При этом были выявлены несколько этиологически разнородных вариантов пародонтита, не имеющих различий клинической картины. Чувствительность бактериологического метода оказалась значительно меньшей, а такие виды пародонтопатогенов, как B. forsythus и T. denticola, ранее в отечественной лабораторной практике при культуральном исследовании не определяли [26, 37, 38, 41].

Эти данные были получены на ограниченном клиническом материале в связи с высокой стоимостью реактивов. Дальнейшие исследования и возможность введения этой тест-системы в практику клиническо-лабораторной диагностики имели ограниченные перспективы. В 2004 г. сотрудниками ООО НПФ «Гентех», кафедры микробиологии и НИМСИ МГМСУ была разработана тест-система Мультидент для идентификации ДНК 5 вышеуказанных пародонтопатогенных видов бактерий с помощью ПЦР, которая может стать более доступной для научных лабораторий, и практической стоматологии [18, 20, 21]. Это позволило провести ряд исследований состава микрофлоры ротовой полости как у больных с различными воспалительными заболеваниями, так и у людей со здоровым пародонтом. Так, в работе [22] показано, что у 4 (5%) из 80 обследованных без признаков заболеваний пародонта и хронических патологий органов с помощью системы Мультидент выявлена ДНК A. actinomycetemcomitans, у 2 (2,5%) - P. intermedia и B. forsythus, у 5 (6%) - T. denticola. P. gingivalis в норме не выявляли. У 52 (36%) из 145 больных с ХГП выявили A. actinomycetemcomitans, у 87 (60%) - P. gingivalis, у 81 (56%) - P. intermedia, у 104 (72%) - B. forsythus, у 108 (74,5%) - T. denticola. Только у 8 из 145 пациентов, имеющих глубину пародонтального кармана 3-5 мм, т.е. в 5,5% случаев не было выявлено ни одного из исследуемых видов микробов. У 15 (10%) пациентов выявили ДНК 1 вида. Два вида микробов определили у 25 (17%) человек, 3 вида - у 39 (27%), 4 вида - у 40 (28%) с ХГП. Все 5 изучаемых видов микробов выявили у 18 (12%) пациентов. В ассоциациях доминировали представители следующих видов: B. forsythus, P. intermedia, P. gingivalis и T. denticola. Кроме того, нами была прослежена четкая связь между ростом частоты выявления грамотрицательных анаэробных бактерий в области зубодесневой борозды и глубиной пародонтального кармана. Корреляции между возрастом и ростом частоты выявления пародонтопатогенов мы не обнаружили.

Коллективом авторов из Санкт-Петербурга [28] было проведено эпидемиологическое исследование наличия P. gingivalis, B. forsythus и A. actinomycetemcomitans в разных биотопах полости рта у 2000 человек 5 возрастных групп в 4 регионах России. В отличие от нас они пришли к выводу, что наиболее распространенными из 3 изученных видов пародонтопатогенов оказались A. actinomycetemcomitans и P. gingivalis. Динамика прироста степени тяжести воспаления десны с возрастом совпадала с достоверным повышением частоты выявления пародонтопатогенных бактерий в образцах слюны и зубного налета. Выявлена корреляционная зависимость между клиническими показателями воспалительных тканей пародонта и количеством видов пародонтопатогенных бактерий, определяемых в образцах слюны и зубного налета. В основном, эти данные совпадают с результатами наших исследований [18, 21, 22, 30, 42-44].

В литературе [31, 47] имеются данные о роли дрожжеподобных грибов Cаndida, хламидий и других представителей микромира в развитии пародонтита. Многочисленные исследования посвящены диагностике и лечению заболеваний, вызываемых вирусом простого герпеса (ВПГ) в полости рта [35]. Однако роль вирусной инфекции в этиологии генерализованного пародонтита до настоящего времени в достаточной степени не установлена, поэтому ряд наших работ [11, 35, 36, 40] был посвящен диагностике и лечению ХГП, ассоциированного с герпесвирусной инфекцией. В результате исследований ДНК ВПГ 1-го типа выявлена у 16% пациентов, ВПГ 2-го типа - у 5%, ДНК цитомегаловируса (ЦМВ) - у 7%, вирус Эпштейн-Барра (ВЭБ) - у 15%. В то же время у здоровых людей в области зубодесневой борозды был выявлен генетический материал ВПГ 1-го типа в 1,4% случаев, ВЭБ - у 5,6% наблюдений, ДНК ВПГ 2-го типа и ЦМВ не выявлена ни у одного человека. Наличие ВПГ 1-го типа и ВЭБ, возможно, связано с транзиторным попаданием вирусов в ротовую полость или с тем, что нам удалось выявить начальный момент инфицирования. Вместе с тем у пациентов с ХГП наблюдалось статистически достоверное увеличение относительной частоты определения в пародонтальном кармане ВПГ 1-го типа (р=0,01) и ВЭБ (р=0,001) по сравнению с контролем. Совпадение результатов ПЦР и иммуноферментного анализа наблюдалось в 75, 17, 19 и 89% случаев соответственно.

С помощью комплекса методов - клинического, микроскопического, микологического, молекулярно-генетического и иммунологического исследования - нами установлено, что у 25-30% пациентов с ХГП в развитии заболевания принимают участие дрожжеподобные грибы рода Candida. Видовой пейзаж грибов в содержимом пародонтального кармана у пациентов с ХГП в стадии обострения отличался значительным разнообразием и включал, как минимум, 6 видов данного рода. Доля Candida albicans составила 70%, C. krusei - 12%, прочих видов -18% от числа всех выделенных штаммов. При этом из 72 больных ХГП в стадии обострения, которым проводили молекулярно-генетическое исследование с помощью ПЦР, у 18 (25%) подтверждено наличие ДНК дрожжеподобных грибов C. albicans в содержимом пародонтального кармана в диагностической концентрации. При культуральном исследовании грибы выделены у 30 (23%) из 129 пациентов. Однако совпадение положительных результатов, детектируемых обоими методами, наблюдалось лишь в 82% случаев. По-видимому, эти расхождения связаны как с чувствительностью методов, так и с техническими лабораторными ошибками при заборе материала или проведении исследования. При диагностике Candida-ассоциированного пародонтита необходимо учитывать, что в настоящее время разработаны отечественные тест-системы для выявления генома C. albicans, но не C. krusei и других возможных возбудителей, поэтому микологический метод должен оставаться необходимым компонентом лабораторной диагностики кандидоза. С учетом результатов определения других видов Candida культуральным методом у некоторых пациентов совпадение положительных результатов 2 методов увеличилось, расхождение отмечалось лишь у 1 больного [30, 34, 40]. Нами также показано, что среди больных с Candida-ассоциированным пародонтитом представители пигментообразующих бактероидов (P. intermedia, P. gingivalis, B. forsythus) выявлены всего у 5 (17%) пациентов из 30, в то время как при отсутствии грибов - у 33 (33%) из 99 [39, 45].

В работе [15] ПЦР применяли для изучения состава микроорганизмов слизистой рта у 23 практически здоровых людей. Авторы подтвердили тезис о различиях спектра микробиоценоза на участках слизистой ротовой полости, выполняющих различные функции. Они показали отсутствие в области зубодесневой борозды здоровых лиц маркеров C. trachomatis, C. pneumoniae, M. hominis, U. urealiticum, H. pylori, ЦМВ и ВЭБ. Вместе с тем в 8,7% случаев они выявили ДНК C. albicans, в 27% - HSV 1-го и 2-го типа, 34% - HHV 6-го типа. При объективном обследовании, несмотря на отсутствие жалоб, у 35% обследованных были выявлены патологические изменения слизистой воспалительного характера разной степени: от гингивита и пародонтита легкой степени до хронического катарального гингивита. При статистическом анализе обнаружена умеренная корреляционная связь между наличием изменений слизистой, пародонта и присутствием в зубодесневой борозде HHV 6.

В исследовании, проведенном на нашей кафедре [12], показано, что в пародонтальных карманах 10 (11%) из 91 обследованных больных с ХГП, кроме пародонтопатогенов, представленных в системе Micro Dent, была выделена ДНК C. trachomatis. В то же время еще у 30% пациентов определили антитела класса IgG. Авторы [41, 42] предполагают, что хламидии могут играть определенную роль в развитии хронического рецидивирующего воспаления в пародонте, что необходимо учитывать при выборе тактики консервативного лечения пародонтита.

Метод ПЦР предоставляет большие возможности для оценки эффективности лечения. Так, в работе [5] представлены результаты исследования состава пародонтопатогенной бактериальной флоры в экссудате пародонтальных карманов у пациентов, страдающих ХГП средней степени тяжести, до и после применения разных способов лечения. Маркеры P. gingivalis и B. forsythus выявлены в 32 (67%) из 48 образцов, A. actinomycetemcomitans - в 28 (58%), P. intermedia - 8 (17%), T. denticola - в 24 (50%). Механическое удаление зубного налета не привело к полному удалению пародонтопатогенных бактерий. Так, через 3 нед после традиционной терапии у 16 (67%) пациентов из 24 контрольной группы выявили P. gingivalis, остальные виды микробов идентифицировали в разных сочетаниях у 4 (17%) пациентов, что в дальнейшем может привести к рецидиву заболевания. Курс инъекций по 1 мл озоно-кислородной газовой смеси с концентрацией 3 мг/л в проекции верхушек корней приводил к статистически достоверному снижению содержания B. forsythus, T. denticola и A. actinomycetemcomitans в десневой жидкости исследуемых зубов, к полному устранению P. intermedia и снижению частоты выявления P. gingivalis на 17% (p>0,05).

Целесообразноcть использования метода ПЦР для контроля проводимого лечения при воспалительных заболеваниях пародонта была также показана в работах [25, 48]. Авторы изучили особенности видового состава микрофлоры полости рта в процессе реконструктивного лечения больных с ХГП и сопутствующим сахарным диабетом (СД). Показано, что пародонтопатогенная флора у пациентов с СД сопоставима с таковой у больных ХГП без СД, однако отличается по частоте встречаемости видов, относящихся к родам Enterobacter, Pseudomonas, Candida. Так, A. аctinomycetemcomitans были обнаружены у 42% пациентов с СД 1-го типа, 37% - с СД 2-го типа и 35% - без СД. Относительная частота определения P. intermedia у обследованных также не различалась: 34% случаев при СД и 35% - без него. Наиболее часто выявляли P. gingivalis: у 50% пациентов с СД 1-го типа, у 45% - с СД 2-го типа и у 41% без сопутствующего СД. B. forsythus чаще обнаруживался у пациентов с СД 1-го типа - в 39% случаев. У пациентов с СД 2-го типа этот микроорганизм был обнаружен в 37% случаев, а у пациентов без СД - в 29% случаев. Частота встречаемости T. denticola у пациентов всех 3 групп составляла 34-37%. Кроме того, было показано, что у пациентов с СД 1-го типа и пародонтитом тяжелой степени значительно и достоверно повышена частота идентификации всех видов микроорганизмов в сравнении с пациентами с пародонтитом средней степени. Частота определения почти всех микроорганизмов, за исключением

A. аctinomycetemcomitans, P. gingivalis и B. forsythus, у пациентов с СД 2-го типа и пародонтитом тяжелой степени была выше, чем у пациентов с пародонтитом средней степени и СД 2-го типа. После курса антибактериальной терапии (ровамицин - по 6-9 млн МЕ/сут в 2-3 приема в течение 7 дней) изучаемые виды пародонтопатогенов были выявлены с относительной частотой 2,6-6% у пациентов с СД 1-го типа и без СД и только P. gingivalis - у 4 (10%) из 38 пациентов с СД 2-го типа. Осложнения, возникшие в раннем послеоперационном периоде, и неудовлетворительные результаты лечения отмечены у пациентов с резким увеличением частоты выявления как резидентных, так и патогенных видов микробов.

Наличие пародонтопатогенов является фактором риска развития осложнений для лиц, подготовленных к дентальной имплантации, и требует рационального применения антибактериальных препаратов. Для назначения эффективных препаратов направленного действия, например антибиотиков, необходимо иметь четкие данные о наличии потенциально агрессивной микробной флоры у пациента и ее чувствительности к различным антибактериальным препаратам. С помощью набора реактивов Micro Dent (HAIN DIAGNOSTICA, Германия) выявлялись с высокой частотой потенциальные возбудители периимплантитов у 54 человек, которым была показана операция дентальной имплантации с последующим ортопедическим лечением [10]. Через 2 нед после проведения курса антибактериальной терапии у 18 пациентов в течение 5 дней препаратом амоксиклав (375 мг 2 раза в сутки) исчезли почти все выявленные ранее виды вирулентных бактерий. Только у 1 (5,5%) пациента определялась ДНК B. forsythus и у 2 (11%) - P. intermedia. Похожие результаты получены в группе пациентов при использовании в качестве антибактериального препарата доксициклина (100 мг 2 раза в сутки в течение 5 дней). После проведенного лечения у 1 (5,5%) пациента была выявлена ДНК B. forsythus, у другого - T. denticola. При проведении только однократной антибактериальной профилактики (цефазолин - 1 г внутримышечно) за 30 мин до операции данные бактерии сохранялись в большинстве случаев. В частности, P. intermedia и P. gingivalis - в 17% наблюдений, T. denticola и A. actinomycetemcomitans - приблизительно в 28%, а B. forsythus - в 45%. Таким образом, высокая клиническая эффективность применения схем антибактериальной санации ротовой полости пациентов, подготовленных к дентальной имплантации, была подтверждена с помощью молекулярно-биологических методов исследований [9].

В последующих работах была обоснована возможность применения отечественного набора реактивов Мультидент для оценки наличия 5 основных видов патогенных бактерий, вызывающих воспалительные заболевания пародонта и соединения имплантата с десной при дентальной имплантации, а также влияния препарата Гивалекс на пародонтопатогенную микрофлору при проведении 2-го этапа дентальной имплантации. Показано, что у обследованных пациентов перед проведением хирургического лечения выявляются пародонтопатогенные виды микробов (диагностика которых у пациентов с такой патологией ранее в нашей стране не проводилась), что может оказать существенное влияние на послеоперационный период заживления. После обработки полости рта антисептиком Гивалекс по предложенным нами схемам при проведении 2-го этапа имплантации частота выявления вирулентных видов микробов значительно снизилась, что, по-видимому, оказало благоприятное влияние на процесс заживления послеоперационной раны. Учитывая эти данные, мы предложили использовать препарат Гивалекс для профилактики послеоперационных воспалительных осложнений [7, 8, 17].

ПЦР - оптимальный метод выявления и изучения персистенции бактерий при этиологической диагностике инфекционных воспалительных заболеваний в периодонте [32, 46]. Нами было установлено, что при хроническом периодонтите такие виды бактерий как A. actinomycetemcomitans и B. forsythus, обнаружены у 34 (59%) из 58 больных. Вместе с тем у 43 (74%) больных с деструктивным периодонтитом, в том числе с сопутствующим хроническим пародонтитом, обнаружены ДНК P. gingivalis, а P. intermedia - у 47 (81%) больных. Генетические маркеры T. denticola выявлены у 30 (52%) человек. При традиционном бактериологическом исследовании B. forsythus и T. denticola не выявляли. Частота идентификации других вирулентных видов была ниже, чем при использовании ПЦР: у 41 (71%) больного обнаружены P. gingivalis, A. actinomycetemcomitans - у 32 (55%) и 41 (77%) - P. intermedia. Результаты исследования частоты выявления бактерий из корневых каналов после эндоканального применения антибиотиков кларитромицина и цефтриаксона показали их высокую антибактериальную эффективность. Доля обнаруженных молекулярно-генетическими методами P. gingivalis и P. intermedia сократилась приблизительно на 73-76%, A. actinomycetemcomitans и B. forsythus - на 52-55%, а T. denticola - на 48%. Существенных различий в выявлении маркерных фрагментов ДНК вирулентных видов микробов в зависимости от применяемого для лечения антибиотика не обнаружено. Анализ ближайших результатов клинической оценки лечения хронического периодонтита показал положительный результат применения как кларитромицина, так и цефтриаксона [13, 32, 33]. ПЦР позволяла выявлять бактериальные ДНК чаще, чем традиционный бактериологический метод, что связано с ее большей чувствительностью и специфичностью. Поэтому применение метода ПЦР в диагностике и мониторинге эффективности проводимого лечения имеет большое практическое значение, так как получаемая информация может влиять на дальнейшие действия врача. Следовательно, лабораторная диагностика с использованием современных методов определения бактерий в корневых каналах зубов при периодонтите и в динамике его лечения - необходимый тест микробиологической оценки антибактериальной эффективности лекарственных препаратов, используемых в эндодонтической практике. Новые методы изучения микробного фактора позволяют улучшить этиологическую диагностику одонтогенного воспаления, обосновать индивидуальный подбор препаратов для лечения заболевания и контролировать его динамику.

А.В. Митронин и соавт. (2004) провел клиническую и микробиологическую оценку эффективности отечественного препарата Апексидент, содержащего гидроксид кальция, в сравнении с традиционным лечением. Результаты микробиологического исследования с помощью ПЦР до лечения деструктивных форм хронического периодонтита показали, что такие виды бактерий, как A. actinomycetemcomitans определяются у 10 (42%) обследованных, а B. forsythus - у 13 (54%) из 24. Вместе с тем у 8 (33%) больных с деструктивным периодонтитом были обнаружены ДНК P. gingivalis, а у 17 (71%) - P. intermedia. Генетические маркеры T. denticola выявлены у 11 (46%) обследованных. После экспозиции пасты гидроксида кальция в корневых каналах через 7 и 14 дней и повторных молекулярно-диагностических исследований содержимого корневого канала выявлено резкое снижение числа всех видов бактерий. Через 7 дней относительная частота обнаружения A. actinomycetemcomitans уменьшилась на 33%, а через 14 дней - на 37%; B. forsythus - на 50 и 54%; P. intermedia - на 58 и 63%; P. gingivalis - на 29 и 33%; T. denticola - на 37 и 42% соответственно (p<0,001). У больных контрольной группы, получавших традиционное лечение, вирулентные виды бактерий выявляли в 64% случаев, а после традиционной эндодонтической обработки корневых каналов и их ирригации изотоническим раствором хлорида натрия через 2-3 дня после удаления временной пломбы вновь определяли в 40% случаев [14]. Эффективность использования озонотерапии в эндодонтической практике с применением ПЦР-диагностики оценивали в работе [4].

Для уточнения этиологической роли некоторых анаэробных бактерий из группы пигментообразующих бактероидов, актинобацилл и трепонем мы исследовали гнойные экссудаты 21 больного с одонтогенными флегмонами и 17 больных с хроническим травматическим остеомиелитом нижней челюсти [16]. При одонтогенной флегмоне в гнойном очаге превалировали пигментообразующие бактероиды - P. intermedia и P. gingivalis. Бактериологическим методом их выявляли у 17% пациентов, путем ПЦР-диагностики - у 34%. Культуральным методом A. actinomycetemcomitans, B. forsythus и T. denticola не были выявлены ни у одного человека, однако при постановке ПЦР они обнаружены у 17, 8 и 4% пациентов соответственно. При хроническом травматическом остеомиелите бактериологическим методом P. intermedia выявляли у 3,5% пациентов, P. gingivalis - у 2%, а путем ПЦР-диагностики - у 14 и 21% пациентов соответственно. С помощьюяли у 3,5 ПЦР B. forsythus или T. denticola были обнаружены у 7% больных, A. actinomycetemcomitans - у 3,5% и ни у одного пациента - бактериологическим методом. Таким образом, относительная частота обнаружения бактероидов и актинобацилл у пациентов с хроническим травматическим остеомиелитом ниже, чем у пациентов с одонтогенными флегмонами, а частота выявления T. denticola почти в 2 раза выше. Обнаружение данных микробов в гнойном экссудате свидетельствует об их участии в возникновении и развитии как острых, так и хронических гнойно-воспалительных процессов.

Обследование больных с лимфангиомами челюстно-лицевой области [2] в стадии воспаления и ремиссии показало, что при осаждении ДНК из 2-3 мл исследуемого материала из пунктатов лимфангиом, с помощью ПЦР и реактивов Мультидент-5 с разной частотой определялись маркеры наиболее патогенных грамотрицательных видов микробов, обычно выявляемых при воспалительных заболеваниях пародонта. В то же время все посевы на питательные среды были стерильными.

Сотрудниками НИМСИ при МГМСУ было показано, что ПЦР можно использовать для исследования эффективности стерилизации ортодонтических инструментов [21, 22]. ПЦР применяли для оценки эффективности гигиены полости рта у пациентов после протезирования дефектов зубного ряда мостовидными протезами [29], профилактики заболеваний тканей пародонта при ортодонтическом лечении детей и подростков [27]. Определение лекарственной устойчивости возбудителей воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области с применением ПЦР проведено в работе [3]. Однако оно не получило дальнейшего применения в стоматологической практике, так как в настоящее время только для 2 препаратов (тетрациклина и эритромицина) разработаны и зарегистрированы в МЗ РФ тест-системы, основанные на ПЦР.

Риск возникновения пародонтита можно выявить при анализе определенных генетических параметров. При наличии генетически обусловленных нарушений в иммунной системе человека происходит избыточный синтез интерлейкинов (ИЛ), воздействие которых приводит к чрезвычайно быстрому развитию воспалительного процесса в мягких и костных тканях пародонта даже при отсутствии в очаге воспаления пародонтопатогенов [1]. Генетически обусловленные нарушения связаны с полиморфизмом генов. У пациентов, имеющих положительный генотип ИЛ-1, обусловленный полиморфизмом генов, мероприятия по поддержанию гигиены полости рта на достаточно высоком уровне довольно часто приводят к значительному повреждению тканей пародонта, которое сопровождается утратой их основной фиксирующей функции. Пациенты с положительным генотипом ИЛ-1 относятся к группе повышенного риска развития тяжелых форм пародонтита, кровоточивости десен при зондировании и утраты зубов, выявленных в процессе последующих наблюдений. Они также предрасположены к утрате опорного аппарата после направленной регенерации тканей. Мы изучили полиморфизм генов ИЛ-1α и ИЛ-β у 95 больных ХГП тяжелой степени с помощью молекулярно-генетических методов, используя реактивы Geno Type PRT (Германия) [19]. Основой теста являются выделение ДНК со слизистой ротовой полости пациента, амплификация генов ИЛ-1α и ИЛ-β с помощью ПЦР и их идентификация методом обратной гибридизации. В результате нами показано, что частота «положительного» генотипа в обследованной группе людей составила 46%. Была выявлена связь «положительного» генотипа с клиническими проявлениями пародонтита тяжелой степени (агрессивного) у пациентов молодого возраста (до 35 лет) в сравнении с пациентами, впервые обратившимися к пародонтологу после 50 лет. Кроме того, показано, что фактор относительного риска, отражающий силу ассоциации между генотипом и болезнью, у пациентов 1-й группы имел высокие значения (RR=4,74; χ2=7,96; p<0,001). Следует отметить, что мы не выявили связи между курением и «положительным» генотипом пациентов.

Можно предположить, что при генотипе ИЛ-1 в сочетании с данными о бактериальной нагрузке (наличии вирулентных пародонтопатогенных бактерий), а также с данными о возможных дополнительных факторах риска можно прогнозировать состояние пародонта пациента, включая риск дальнейшей потери зуба. На наш взгляд, подобные сведения позволят стоматологу планировать соответствующее потребностям пациента индивидуальное лечение, которое было бы более эффективным с экономической точки зрения вследствие минимизации излишнего или недостаточного терапевтического и хирургического вмешательства.

В заключение можно отметить, что высокая чувствительность, оперативность и относительная простота молекулярно-генетических методов исследований сделали их незаменимым в решении таких задач микробиологической диагностики, как прямое обнаружение и идентификация возбудителей инфекционных заболеваний. Представленные нами данные свидетельствуют о предпочтительности применения ПЦР в качестве рутинного диагностического теста и значении внедрения молекулярно-генетических методов исследований в клиническую практику стоматологии, аналогично тому, как это происходит в настоящее время в отношении возбудителей урогенитальных инфекций (хламидии, герпес, ЦМВ).

Литература

Bauermeister C.-D. Микробиологическая диагностика заболеваний тканей пародонта. Новое в стоматологии 2003;7:115:27-30.

Агапов В.С., Царев В.Н., Якименко И.И. Обследование больных с лимфангиомами челюстно-лицевой области в стадии воспаления и ремиссии. Институт стоматол 2005;3:28:30-32.

Алексеева Ю.В. Этиологическая диагностика и оптимизация лечения воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области на основании определения генетических маркеров микроорганизмов возбудителей: Автореф. дис.... … канд. мед. наук. М 2004;117.

Безрукова И.В., Петрухина Н.Б., Щербо С.Н. ПЦР-диагностика для оценки эффективности использования озонотерапии в эндодонтической практике. Всероссийская научно-практическая конференция «Стоматология сегодня и завтра»: Материалы. М 2005;75.

Дмитриева Л.А., Теблоева Л.М., Гуревич К.Г. и др. Особенности изменения микрофлоры пародонтального кармана при применении озонотерапии. Пародонтология 2004;4:33:20-24.

Дунязина Т.М., Bauermeister C.D. Значение исследования «маркерных» микроорганизмов зубной бляшки на пародонтологическом приеме. Институт стоматол 2001;3:7-8.

Иванов С.Ю., Бизяев А.Ф., Царев В.Н., Николаева Е.Н., Алешанов К.А. Профилактика воспалительных осложнений стоматологической имплантации методом антисептических полосканий раствором Гивалекс. Мед вестн МВД 2005;2:40-43.

Иванов С.Ю., Царев В.Н., Алешанов К.А., Николаева Е.Н. Антисептическое действие препарата Гивалекс на вирулентную микрофлору полости рта. Всероссийский симпозиум «Актуальные проблемы стоматологии», Всероссийский конгресс «Современные методы профилактики и лечения заболеваний пародонта», Республиканская конференция стоматологов Башкорстостана «Экологические аспекты профилактики и лечения стоматологических заболеваний в республике Башкорстостан»: Материалы. Уфа 2004;143-144.

Иванов С.Ю., Царев В.Н., Чувилкин В.И. и др. Оценка эффективности антибактериальной санации пациентов от возбудителей периимплантитов с помощью молекулярно-генетических методов. Мед вестн МВД 2005;1:8-12.

Иванов С.Ю., Царев В.Н., Чувилкин В.И., Солощанский И.И. Диагностика возбудителей периимплантитов с помощью молекулярно-генетических методов. Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»,10-й: Тезисы докладов. М 2003;287.

Максимовская Л.Н., Царев В.Н., Рунова Г.С. и др. Диагностика и лечение хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с цитомегало- и герпесвирусной инфекцией. Всеросийская научно-практическая конференция «Образование, наука и практика в стоматологии»,3-я: Сборник трудов. М 2006;98-99.

Мегрилишвили Н.А. Тактика консервативного лечения заболеваний пародонта, основанная на ранней индикации пародонтопатогенной микрофлоры: Авфтореф. дис.... … канд. мед. наук. М 2004;127.

Митронин А.В., Царев В.Н., Николаева Е.Н., Новикова А.С. Использование полимеразной цепной реакции в диагностике верхушечного периодонтита. Всеросийская научно-практическая конференция «Образование, наука и практика в стоматологии»,2-я:Сборник трудов. М 2005;194-197.

Митронин А.В., Царева Т.В., Николаева Е.Н. и др. Оценка антимикробной активности гидроксида кальция в лечении периодонтита. Форум стоматол 2004;1:13:8-13.

Нелюбин В.Н., Мудров В.П., Скрипкина Г.В., Прокопенко В.Д. Микроорганизмы слизистой рта практически здоровых лиц. Симпозиум «Технологии генодиагномтики в практическом здравоохранении»: Сборник трудов. М 2002;266-268.

Николаева Е.Н., Алексеева Ю.В., Царев В.Н., Агапов В.С. Применение молекулярно-генетических методов исследования в диагностике гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области. Стоматология для всех 2004;2:46-49.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Бизяев А.Ф., Алешанов К.А. Эффективность использования антисептических полосканий раствором Гивалекса в комплексной профилактике и лечении воспалительных осложнений при операциях в полости рта. Медицинский алфавит. Стоматология 2005;1:24-27.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Земляная Н.Ю. и др. Лабораторная диагностика инфекционных пародонтитов. Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»,11-й: Тезисы. М 2004;465.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Плахтий Л.Я. Генетический полиморфизм генов IL-1a и IL-b у больных с воспалительными заболеваниями пародонта. Владикавказ мед-стоматол вестн 2003;3:6:159-161.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н. Разработка и применение отечественной тест-системы для диагностики пародонтита с помощью мультиплексной ПЦР. Съезд общества биотехнологов России, 2-й: Тезисы докладов. М 2004;121.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н. и др. Опыт разработки стандартного метода молекулярно-генетической диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний пародонта. Форум стоматол 2004;1:13:20-24.

Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н. и др. Применение молекулярно генетических методов исследований в диагностике пародонтита. Институт стоматол 2004;4:25:63-66.

Остроухова А.А., Николаева Е.Н., Тихонов А.А. Применение плазменной стерилизации для профилактики инфекции в ортодонтии. Всероссийская конференция «Профилактика основных стоматологических заболеваний»: Материалы. М 2003;100-101.

Остроухова А.А., Николаева Е.Н., Тихонов А.А. Эффективность плазменной стерилизации инструментов, применяемых в ортодонтии. Ортодонтия 2003;1:22-26.

Парунова С.Н. Влияние микрофлоры полости рта на регенерацию тканей пародонта у больных сахарным диабетом: Автореф. дис.... … канд. мед. наук. М 2004;21.

Плахтий Л.Я. Тактика антибактериальной терапии пародонтита, основанная на результатах микробиологического и молекулярно-генетического исследования: Автореф. дис....… д-ра мед. наук. М 2002;253.

Сампиев А.Т. Эффективность профилактики заболеваний тканей пародонта при ортодонтическом лечении детей и подростков: Автореф. дис.... … канд. мед. наук. М 2005;134.

Соловьева А.М., Матело С.К., Тотолян А.А. и др. Эпидемиологическое исследование распространенности периодонтопатогенной микрофлоры полости рта у населения России. Стоматология 2005;5:14-20.

Ушаков Р.В., Царев В.Н. Антимикробная терапия в лечении гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области. Стоматология 2005;9:25-27.

Ушаков Р.В., Царев В.Н., Комарницкий Б.М. Повышение эффективности гигиены полости рта у пациентов после протезирования дефектов зубного ряда мостовидными протезами. Стоматология 2005;3:30-32.

Ушаков Р.В., Царев В.Н., Ушакова Т.В., Носик А.С. Клиника хронического генерализованного пародонтита ассоциированного с грибами рода кандида. Стоматология 2005;4:25-28.

Царев В.Н., Митронин А.В., Максимовский Ю.М. и др. Диагностика хронического периодонтита с помощью полимеразной цепной реакции и перспективы эндодонтического применения макролидов и цефалоспоринов. Стоматология для всех 2004;1:8-11.

Царев В.Н., Митронин А.В., Николаева Е.Н. и др. Трансканальное использование антибиотиков нового поколения в лечении хронического периодонтита и оценки их эффективности с применением генодиагностики. Кафедра 2004;9:34-40.

Царев В.Н., Николаева Е.Н. Микробиологическая диагностика воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области с помощью отечественной системы Мультидент. Всеросийская научно-практическая конференция «Образование, наука и практика в стоматологии», 2-я: Сборник трудов. М 2005;224-226.

Царев В.Н., Николаева Е.Н., Носик А.С., Щербо С.Н. Современные методы микробиологической диагностики заболеваний тканей пародонта. Медицинский алфавит. Стоматология 2005;2:43:26-29.

Царев В.Н., Николаева Е.Н., Максимовская Л.Н. и др. Генодиагностика вирусов семейства Herpesviridae у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом. Всеросийская научно-практическая конференция «Образование, наука и практика в стоматологии»,2-я: Сборник трудов. М 2005;222-224.

Царев В.Н., Николаева Е.Н., Максимовский Ю.М. и др. Перспективы применения молекулярно-генетических методов исследований в диагностике пародонтита. Рос стоматол журн 2002;5:6-9.

Царев В.Н., Николаева Е.Н., Николаева Л.Н. и др. ПЦР-диагностика пародонтита. Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», 10-й: Тезисы докладов. М 2003;399.

Царев В.Н., Николаева Е.Н., Носик А.С., Щербо С.Н. Современные методы микробиологической диагностики заболеваний тканей пародонта. Медицинский алфавит. Стоматология 2005;2:26-29.

Царев В.Н., Плахтий Л.Я., Зуева И.А. и др. Диагностика хронического генерализованного пародонтита молекулярно-генетическими и иммунологическими методами. Пособие для врачей. Методические рекомендации. М 2004.

Царев В.Н., Ушаков Р.В. Антимикробная терапия в стоматологии. М: МИА 2004;143.

Царев В.Н., Ушаков Р.В. Местное антимикробное лечение в стоматологии. М: МИА 2003;156.

Царев В.Н., Ушаков Р.В., Плахтий Л.Я., Чухаджян Г.А. Применение адгезивных пленок Диплен-дента в комплексном лечении пародонтита. Руководство по стоматологии. М 2002;90.

Царев В.Н., Ушаков Р.В., Николаева Е.Н. и др. Применение генодиагностики для контроля персис