Этап бактериологического исследования.

Первый этап заключается в изучении морфологических свойств.

По морфологии м.о. делятся на

Шаровидной формы — кокки;

 

Патогенные:

v диплококки (парные кокки) – клетки делятся в одной плоскости располагаются попарно к ним относятся плацентавидные пневмококки.

v стрептококки (цепочки кокков) - деление осуществляется в одной в плоскости, размножающийся клетки сохраняют связь не расходятся, образуя цепочки.

v стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев) – располагаются в виде грозди винограда т.к. деление клетки происходит в различных плоскостях.

v ганнококки и менингококки (бобовидной формы)

 

Все патогенные кокки вызывают гнойно- воспалительные заболевания.

Непатогенные:

v микрококки (отдельно лежащие кокки) – клетки делятся в разных плоскостях и располагаются по одиночке.

v тетракокки (образования из четырех кокков) – деление происходит взаимноперпендикулярных плоскостях.

v сарцины (паке­ты из 8 или 16 кокков) – деление клетки происходит в взаимноперпендикулярных плоскостях.

 

Палочковидные бактерии -располагаются в виде оди­ночных клеток, представители- клостридии (анаэробные, спорообразующие палочки) и бациллы (спорообразующие палочки).

Извитые формы

v спириллы (имеют 2-3 завитка (непатогенные)) -

v вибрионы (напоминают запятую) (представитель - холерный вибрион)

v спирохеты (имеют различное число завитков)

Затем необходимо приготовить среду.

Под каждый м.о. нужно выбирать подходящую среду.
Так же к средам есть свои требования:

v быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для жизнедеятельности м.о.

v иметь оптимальную кислотность — pH.

 

Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2—7,4). Исключение составляют холерный вибрион - щелочная зона (pH 8,5—9,0) и возбудитель туберкулёза - слабокислая реакция (pH 6,2—6,8).

 

v быть изотоничными - 0,5 % NaCL.

v быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.

v плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.

v обладать определённым окислительно-восстановительным потенциалом.

v быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.

v чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

 

Классификация сред

По исходным компонентам:

v натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, асцит, костная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)

v синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.

По консистенции (степени плотности):

v жидкие (бульоны)

v полужидкие

v плотные

Плотные и полужидкие среды отличаются от жидких наличием желирующего агента (агар-агар, реже желатин). Кроме того, в качестве плотных сред применяют коагулировавшие яичные или сывороточные белки, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

 

По составу:

v простые — мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА), питательный желатин,

v сложные — многокомпонентные среды, которые могут содержать аминокислоты, витамины, микроэлементы и другие вещества.

По назначению:

v основные — служат для культивирования большинства микроорганизмов, например МПБ, МПА, бульон, шоколадный агар, пептонная вода.

v специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

v элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.

v дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.

v транспортные — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

 

Этапы приготовления:

1. Варка

2. Установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.

3. Осветление: производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.

4. Фильтрация: жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена — они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

5. Разлив: разливают среды не более чем на ¾ ёмкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

6. Стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.

7. Контроль.

Приготовление МПА

1) Взвешать 2,5 сухого питательного агара

2) Растворить в 100мл воды

3) Прокипятить до полного растворения агара (2 мин), постоянно мешая

4) Проверить pH среды (нейтральная).

5) Профильтровать горячую среду через ватно – марлевый фильтр

6) Разлить в пробирки по 5 – 7 мл

7) Простерилизовать при температуре 120^о